MM_FS_CNG_0614 产蛋后备鸡、产蛋鸡、肉用仔鸡配合饲料中粗蛋白的测定

MM_FS_CNG_0614产蛋后备鸡 产蛋鸡 肉用仔鸡 配合饲料 粗蛋白 凯氏定氮法

MM_FS_CNG_0614

产蛋后备鸡、产蛋鸡、肉用仔鸡配合饲料中粗蛋白的测定

1.适用范围

本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

2.原理概要

凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定。测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

硫酸：化学纯，含量为98％，无氮；

混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀；

氢氧化钠：化学纯，40％水溶液(m/V)；

硼酸：化学纯，2％水溶液(m/V)；

混合指示剂：甲基红0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月；

盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按标准制备；

盐酸标准溶液：c(HCl)=0.1mol/L。8.3mL盐酸，注入1000mL蒸馏水中；

盐酸标准溶液：c(HCl)=0.2mol/L。1.67mL盐酸，注入1000mL蒸馏水中；

蔗糖：分析纯；

硫酸铵：分析纯，干燥；

硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。

3.2.仪器

实验室用样品粉碎机或研钵；

分样筛：孔径0.45mm(40目)；

分析天平：感量0.0001g；

消煮炉或电炉；

滴定管：酸式，10、25mL；

凯氏烧瓶：250mL；

凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；

锥形瓶：150、250mL；

容量瓶：100mL；

消煮管：250mL；

定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。

4.试样的选取和制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

5.过程简述

5.1.仲裁法

5.1.1.试样的消煮

称取试样0.5～1g(含氮量 5～80mg)准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360～410℃)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

5.1.2.氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A)

5.1.2.1.常量蒸馏法

将试样消煮液冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

5.1.2.2.半微量蒸馏法

将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

注：5.1.2.1和5.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。

5.1.2.3.蒸馏步骤的检验

精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2或5.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

5.1.3.滴定

用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

5.2.推荐法

5.2.1.试样的消煮

称取0.5～1g试样(含氮量5～80mg)准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片(仪器自备)或6.4g混合催化剂，12mL硫酸，于420℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。

5.2.2.氨的蒸馏

采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。

采用半自动定氮仪时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。

5.2.3.滴定

用0.1mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

6.空白测定

称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液(4.6.1)的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。

7.结果计算

7.1.计算见下式：

式中：V₂──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；

V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；

c──盐酸标准溶液浓度，mol/L；

m──试样质量，g；

V──试样分解液总体积，mL；

V’──试样分解液蒸馏用体积，mL；

0.0140──与1.00mL盐酸标准液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。

6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。

7.2.重复性

每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。

当粗蛋白质含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。

当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。

8.来源：

GB/T 32－94