甘草总黄酮体内抗肿瘤作用及其机制的初步研究

１４９６　ＧｕａｎｇｘｉＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，Ｏｃｔ．２００６，Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１０　甘草总黄酮体内抗肿瘤作用及其机制的初步研究▲　广西民族医院检验科（南宁５３０００１）赵世元农智新钟振国※王乃平※　建立ｓｌ８０小鼠肉瘤，观察甘草总黄酮对　［摘要］　目的探讨甘草总黄酮体内抗肿瘤作用并阐明其可能的作用机制。方法瘤组织内Ｂｃｌ一２和Ｂａｘ蛋白的表达水平。结果下调，而Ｂａｘ蛋白的表达上调。结论ｓｌ８０小鼠肉瘤抑瘤率，肿瘤组织切片ＨＥ染色观察其病理改变，从肿瘤组织提取的ＤＮＡ并做琼脂糖凝胶电泳，用免疫组化法检测　甘草总黄酮各组能显著抑制Ｓｌ８０小鼠肉瘤生长，肿瘤组织ＨＥ染色观察，部分肿　瘤细胞体积较小，细胞核浓染。肿瘤组织的ＤＮＡ电泳带呈明显的梯状条带；免疫组化显示小鼠肿瘤组织内的Ｂｃ１．２蛋白的表达　甘草总黄酮体内有明显的抑瘤作用，抑瘤机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡密切相关，影响　肿瘤细胞内相关凋亡蛋白Ｂｃ１．２和Ｂａｘ蛋白的表达实现的。　［关键词］甘草总黄酮；体内抑瘤；细胞凋亡　［中图分类号］Ｒ２８８．５；Ｒ７３．３５　４　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ＺＨＡＯＳｈｉ一　ｎ，ＮＯＮＧＺｈｉ－Ｍｎ，ＺＨＯＮＧＺｈｅｎ—ｇｕｏ，ＷＡＮＧＮａｉ－ｂｉｎｇ　ＴｈｅＣｅｎｔｅｒ　ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ＴｈｅＨａ￣ｐｉｔａｌｏｆＮａｔｉｏｎａｌｉｔｙｏｆＧｕａｎｇｘｉ（Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００１），Ｃｈｉｎａ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ　ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ，ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｉｔｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ．ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｃｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍＯＬＬｑｅ　ｔｕｍｏｒ　ｍｏｄｅｌ　Ｓｌ８０　ＷａＳ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ，ｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｎｓｐｌｎｔｅｄ　ｔｕｎｌａｏｒｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｗａｓ　ｓｕｂｊｃｔｅｄ　ｔｅｏ　Ｅ　Ｈｓｍｉｍｎｇ　ｔｏ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｓｒｎ；ａｎｄ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　Ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｄ　ｅｆｏｒ　ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｃｔｒｏｐｈｏｒｅｅｓｉｓ．ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２　ａｎｄ　Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｉｎｍｍｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｔｏｔｌａ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｈａｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｅｆｆｃｔｅｓ　ｏｎ　ｔｍｏｒｕ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ—ｅｏｓｉｎ（　）ｓｔａｉｎ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｅｌｌ　ｖｏｌｕｍｅ　Ｗａｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ，ｎｕｃｌｅａｒ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　Ｗａｓ　ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｐｌｓｒｎ　Ｗａａｓ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｄｅｅｐｌｙ　ｗｉｔｈ　ｒｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｌｉｇｈｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ｔｈｅ　ａｇａｒｏ￣ｇｅｌ　ｅｌｃ—ｅ　ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｓｈｏｗｅｄ　ｌａｄｄｅｒ　ｆｉｇｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．ｗｈｉｌｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｄ　ｉｅｎ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｕｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｓ　ｓｕｇｇｅｔｓｔ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｏｔｌ　ｆａｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｈａｓ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｉｔ　ｉｓ　ｌｉｋｄｙ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｔｍｏｒ　ｃｅｌｕｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．　【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ］Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ；Ｔｕｍｏｒ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｖｏ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　现代科学研究表明，甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｇｌａｂｒａ）具有抗癌防　癌、调节免疫、抗病毒多方面的药理作用，其主要有效成分为　多糖、甘草酸及黄酮类化合物　ｌ＿２　Ｊ。从甘草中提取的甘草总黄　酮（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ），在体外能显著抑制ＢＥＬ７４０４细胞　的生长，诱导ＢＥＬ７４０４细胞凋亡　３　Ｊ。笔者对其体内抗肿瘤作　用及部分作用机制进行研究，现报告如下。　干燥后即得甘草总黄酮。　１．２受试药物的配制称取甘草总黄酮用０．５％羧甲基纤维　素溶液助溶，用生理盐水加到所需的浓度，置ＨＶ．５０自动高压　灭菌器１２０℃、３０　ｉｎ，ｍ冷却后将其置于超净工作台中（事先以　紫外线灯消毒３０　ｍｉｎ）分装。药品配好后置４～８℃冰箱保　存。　环磷酰胺（ＣＴＸ）（上海华联制药有限公司生产，批号：　２００４０１２５）用生理盐水配制成２０　ｍｇ／ｋｇ溶液，现配现用。　１．３试剂兔抗鼠Ｂｅｌ一２，Ｂａｘ单克隆抗体：北京中山生物技　术有限公司提供，为美国ｓａｎｔａ　ｃｒｕｚ公司产品。ＳＡＢＣ试剂盒：　１材料与方法　１．１受试药物的提取和分离　光果甘草采自准葛尔盘　地石河子垦区，秋季挖取除须根，洗净晾干。经稀氨水提取，　酸化沉淀，醇提取，氨化去甜素，回收乙醇后浓缩物溶于水，调　ｐＨ值，用大孔吸附树脂吸附，经水洗后，用稀氨水洗脱总黄酮　粗品，经中和浓缩酸析水洗脱水，用有机溶剂提取，回收溶剂，　▲广西医疗卫生科研课题（　００５００９）　武汉博士德生物技术公司提供。　１．４主要仪器　美国ＢＩＯ－ＲＡＤ　Ｍ０ＤＥＬ５５０型酶标仪；倒置　光学显微镜：Ｏｌｙｍｐｕｓ。　※广西中医学院新药开发中心　（南宁５３０００１）　维普资讯 http://www.cqvip.com

广西医学２００６年１０月　第２８卷　第１０期　１．５肿瘤细胞株ｓｌ８０细胞株：小鼠肉瘤细胞株，广西中医学　１４９７　５００　ｍｌ，匀浆研磨１次，以２００　ｒ／ｒｎｉｎ离心５　ｒｎｉｎ后取沉淀，加　ＰＩｋｑ　５０　ｆｌ混匀，加裂解液１５０　ｆｌ，以１　６００　ｒ／ｒｎｉｎ离心５　ｒｎｉｎ，　取上清加１／１０体积的ＳＤＳ液（十二烷基硫酸钠），混匀后加蛋　白酶＜１００￣ｇ／ｒｎ１）５　ｌ，５６℃孵育２　ｈ。然后加入１／２体积１０　ｍｏｌ，　的乙酸铵、２．５体积的无水乙醇混匀，一２０℃过夜。最　院药学院教研室保存。实验前１周从液氮罐取出细胞株。用　自来水冲洗，待恒温后转接到昆明种小鼠腹腔内，７　ｄ后即成　为腹水瘤，每周传代一次。　１．６实验动物健康的昆明种小鼠，体重１８－－２２　ｇ／　只，每次　实验用同一种性别的小鼠，由广西医科大学实验动物中心提　后以１３　０００　ｒ／ｒｎｉｎ离心１５　ｒａｉｎ，取沉淀加’ｒＥ溶解液，１％琼脂　糖电泳，电压６０　Ｖ，电泳时间１．５　ｈ。　１．７　４肿瘤组织中Ｂｃｌ一２和ＢａＸ蛋白的表达：采用免疫组织　化学染色，对各实验组小鼠肿瘤组织Ｂｃｌ一２和ＢａＸ两种蛋白的　表达水平进行检测。组织块经４％多聚甲醛固定后，石蜡包　埋，４　Ｉｙｌｍ厚连续切片。组化染色采用ＳＡＢＣ法，ＤＡＢ染色。　供，许可证号：ＳＣＸＫ桂２００３—０００３。　１．７实验方法　１．７．１小鼠实体瘤模型的建立【　Ｊ：无菌条件下，分别取传代７　－９　ｄ的、生长良好的Ｓｌ８０小鼠腹水（注意观察腹水颜色，腹水　为乳白色无絮状沉淀物者为佳，如腹水为血性则不能进行下　述实验）立即置无菌管中，以注射用生理盐水按１：ｉ比例稀释　成瘤细胞悬液，并计数调整细胞浓度为１　Ｘ　１０　／ｍｌ，管外以冰　袋来维持温度在４℃左右，以保持瘤细胞的活性。用体重（２０　±２）ｇ左右的昆明种小鼠６０只，每只用０．２　ｍｌ瘤细胞悬液接　种于右前肢腋窝皮下，整个过程尽量在半小时内完成。２４　ｈ　后称重并随机分成５组，每组１２只。分甘草总黄酮高、中、低　１．７数据处理实验数据统计分析采用ＳＰＳＳ　１０　０　ｆｏｒ　ｗｉｎ—　ｄｏｖｅｓ统计软件包，数据以ｊ±Ｓ表示，组间比较采用ｔ检验。　２结果　甘草总黄　２．１甘草总黄酮对ｓｌ８０肉瘤移植性实体瘤的影响酮对小鼠Ｓｌ８０肉瘤的生长具有一定的抑制作用，其抗肿瘤效应　剂量组，阳性对照组，模型组（羧甲基纤维素一生理盐水组）。　分组后，ＣＴＸ组按２０　ｍｇ／ｌ￣体重，腹腔注射，隔天给药，受试　样品组，按０．１　ｍｌ／１０　ｇ等容量不等浓度，腹腔注射，１次／ｄ，连　续８　ｄ。模型组腹腔注射相同体积的０．５％羧甲基纤维素一生　理盐水。每天观察小鼠的自主活动、大便和毛色及瘤体大小　等情况，随时记录，用药８～９　ｄ，瘤体重约１　ｇ时，停止给药。　停药次日处死小鼠，分别称取小鼠体重，解剖瘤体并称重；肿　瘤组织切片ＨＥ染色观察病理变化。个别组出现提早死亡的　动物则提前解剖称重纪录，计算抑瘤率。　抑瘤率＝（Ｃ－Ｔ）／Ｃｘ１００％　注Ｔ为实验组平均瘤重，Ｃ为空白对照组平均瘤重。　呈剂量依赖性，其高剂量组的抑瘤率略低于环磷酰胺；肿瘤组　织切片ＨＥ染色，镜下观察，除见到大量坏死细胞外，部分肿瘤　细胞体积较小，细胞核浓染。见表１，图１－－３。　２．２　Ｓｌ８０肉瘤小鼠瘤体的ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳　Ｓｌ８０肉瘤小　鼠给予甘草总黄酮治疗后，取出的瘤体组织，提取出ＤＩＮ．＆，琼　脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带，ＤＮＡ梯状条带是细胞发　生凋亡的特征性改变。电泳图象见图３。　２．３甘草总黄酮对ｓｌ８０肉瘤小鼠肿瘤瘤组织内Ｂｃ１．２和Ｂａｘ　蛋白表达影响　甘草总黄酮高、中、低剂量组的肿瘤组织Ｂｃ１．２　的ＯＤ值分别为０．０７、０．０９１和０．１０２，低于模型组０．１５，差异　有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；而甘草总黄酮的高、中、低剂量组的　肿瘤组织的Ｂａｘ的ＯＤ值分别为０．１９５、０．１６４和０．１３３，高于　模型组０．１１２，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。　１．７．２肿瘤组织病理形态学观察：各实验组小鼠肿瘤组织切　片ＨＥ染色观察肿瘤细胞的病理变化。　１．７．３　ＤＮＡ的提取及电泳：取各组瘤体组织分别加ＰＢＳ液　表１甘草总黄酮对小鼠Ｓ１８０肉瘤重的影响（ｊ±Ｓ，　＝３）　Ｔａｂ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｅ￣ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　Ｓｙｏｙｒｒｈｉｚａｅ　Ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｍｎｏｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　Ｓｌ８０　ｍｉｃｅ（￣±　，，ｌ＝３）　与模型组比较＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。　维普资讯 http://www.cqvip.com

１４９８　ＧｕａｎｇｘｉＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，Ｏｃｔ．２００６，Ｖｏ１．　！Ｎ０．　Ｑ　Ａ：｝｛，　总故刚高刹　齄组，…观ＨＪｊ　的梯　ｌＪ（祭　；　Ｂ：ＣＴＸ　ｆｉ　图ｌ肿瘤细胞异性明显。核易见。　骨骼肌。脂肪组织有肿瘤细胞浸润，坏死明显。　Ｆｉｇ　ｌ　Ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｈｅｔｅｒｏｍｏｒｐｈｏｓｉｓ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｌｌｅｒ　ａｎｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｋａｒｙｏｒｒｈｅｘｉｓ　ａｌｅ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｓｅｅ．Ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｎｄ　ｆａｔｓ　ｏｒｇａｎｉｚａ・　ｔｉｏｎｓ　ｄｅａｌｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃａｎｃｅｒ。ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｅｖｉｄｅｎｔ．　Ａ　Ｂ　（、　Ａ：甘草总黄酮高剂量组，出现明显的梯状条带；　Ｂ：ｃｒｘ组：ｃ：阴性对照组。　图３　ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳　ｉｇ　３　ＤＮＡｌＦａｄｄｅｒｓ　ｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅ　ｏｆＳｌ８０ｍｉｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｃｈｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｃｌｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｏｙｒｒｈｉｚａｅ　ｉｎ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ－　ｓｉｓ．Ａ．ｔｒｅａｔｅｄ　ｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｏｔｗａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｃｌｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｏｙｒｒｈｉｚａｅ　［３０　ｎａｇ／（１ｑ；．ｄ）］；Ｂ．ｔｒｅａｔｄ　ｗｅｉｔｈ叨【［２０　ｎａｇ／（ｋｇ．ｄ）］；　Ｃ．ｃｏｎｔｒｏ１．　３讨论　移植肿瘤模型是目前中药抗肿瘤体内实验研究中研究最　多的肿瘤模型，本实验中高、中、低剂量组抑瘤率大于３５％，按　图２部分肿瘤细胞体积较小，细胞核浓染。　骨骼肌和脂肪组织均有肿瘤细胞浸润。坏死严重　Ｆｉｇ　２　Ｓｏｍｅ　ｔｕｍｏｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｒｅ　ｓｍａｌｌｅｒ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｌｓ　ｐｙｌｕｍｏｓｉｓ－　Ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｎｄ　ｆａｔｓ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ　ｈａｖｅ　ｔｕｍｏｒｓ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ　ａｎｄ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｓｅｒｉｏｕｓ．　照体内抗肿瘤疗效评价标准：中草药抑制率大于３０％，经统计　学处理差异有统计学意义时，连续３次实验，疗效稳定，说明　实验结果可信【引。凋亡是细胞程序性死亡的重要形式，是机　体对自身内外因素的改变所产生的一种特定的应答反应。大　表２甘草总黄酮不同剂量对Ｓｌ８０肉瘤小鼠肿瘤组织Ｂｃｌ一２和Ｂａｘ表达水平的影响（　±　）　Ｔａｂ　２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｃｌｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉｘ　ｇｌｙｏｙｒｒｈｉｚａｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＢｃ１．２＆Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｓｌ８０ｍｉｅ（ｘ±　－ｎ＝３）ｃ　与模型组比较Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．Ｏｌ。　量研究表明，抗肿瘤药物的作用机理之一是诱导肿瘤细胞发　生凋亡　，凋亡细胞形态上初期为细胞核的紧密、细胞浆的压　ｂｐ的片段。在ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳时呈“梯形”［引。我们在实　验中通过电镜下观察和琼脂糖凝胶电泳的检测，甘草总黄酮　组出现了较为明显的凋亡特征标志：肿瘤组织　染色观察，　缩，随后细胞核碎裂而演变为凋亡小体，但其它细胞器仍保持　完整，最终被邻近细胞或巨噬细胞摄取和清除。生化特征上　部分肿瘤细胞体积较小，细胞核浓染；肿瘤组织的ＤＮＡ琼脂　糖电泳出现明显的ＤＮＡ“梯状条带”。在细胞凋亡机制方　最显著的表现是，核小体问的ＤＮＡ双键裂解，形成１８０～２００　维普资讯 http://www.cqvip.com

广西医学２００６年１０月　第２８卷　第１０期　’１４９９　面，ｂｃ１．２作为一类新的癌基因家族，通过广泛抑制各种刺激剂　诱导的细胞凋亡、延长细胞活力而发挥作用　Ｊ。ｂｃｌ一２蛋白作　ｌｎ　ｌｔ　ｌａｌ　ｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＤＭ　ＢＡ　ｂｙ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｒａｌ　ｆｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　ｇｌｖｅｙｒｒｈｉｚｉｎ　ｉｎ　ｄｒｉｎｋｉｇｗａｔｎｅｒ［Ｊ］．ＮｕｔｒＣａｎｃｅｒ，１９９１，１５（３－４）：ｌ８７～１９３．　２　ＨａｎｔａｎｏＴ，Ｋａｎａｗａ　Ｈ，Ｙａｓｕｈａｒｅ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｔｗｏ　ｎｅｗ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｉｃｏｒｉｃｅ　ｒｏｏｔ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ａｓｔｉｒｒｍｅ￣ｅｙ　ａｎｄ　ｒａｄｉｃａｌ　为一个整合膜蛋白定位而发挥效应，它的具体分布部位多数　认为是在线粒体上，光面内质网和核周膜也是它的定位处，　ｂｃｌ－２的功能取决于其亚细胞膜定位，ｂｃｌ一２能够影响许多凋亡　基因的变化，如细胞氧化还原状态、抑制氧自由基的产生与活　化、增加过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性、细胞内离子、　抑制ｃａｓｐａｓｅ　３和ｃａｓｐａｓｅ　６的活性等。Ｂａｘ蛋白与Ｂｃ１．２蛋白　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｅｆＦｅｅｔｓ［Ｊ］，Ｃｈｅｍ　ｐｌ￣ａｒｍ　ｂｕｌｌ，１９８８，３６（６）：２０９０－－２０９３．　３赵世元。王乃平，钟振国，等．甘草总黄酮诱导肝癌细胞凋亡的实　验研究［Ｊ］．广两医科大学学报，２００５，２２（２）：２３５－－２３７．　４徐叔云，卞如镰，陈修．药理实验方法学［Ｍ］．第３版．北京：人　民卫生出版社，２００２，１７５７～１７８６．　有２１％的同源性，可以与Ｂｃｌ一２分子形成异二聚体，抵消Ｂｃｌ一２　的抗凋亡作用，从而促使细胞死亡。Ｂｃｌ一２和Ｂａｘ对细胞凋亡　的，不仅取决于自身表达水平的高低，还与两者之间的比　例有关，ｐｅｐｐｅ等Ｌｌ　ｏＪ研究了ｂｃｌ一２／ｂａｘ比值与慢性淋巴细胞白　血病对化疗敏感性的关系，发现ｂｃｌ一２／ｂａｘ可显著影响慢性淋　巴细胞白血病对化疗药物的敏感程度，当ｂｃ１．２／ｂａｘ比值增高　时，患者对化疗药物耐药；而当ｂｃ１．２／ｂａｘ下降时，表现为对化　疗敏感。当ｂｃｌ一２／ｂａｘ比值＞１．０的患者化疗后几乎没：有缓解　的可能性。故Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ的比率也是决定细胞凋亡的关键因　素。本研究中，甘草总黄酮组治疗后，小鼠肿瘤组织中Ｂａｘ蛋　白表达水平较荷瘤对照组增高，而Ｂｃｌ一２蛋白的表达降低，Ｂｄ一　２／Ｂａｘ比值显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），进一步提示甘：荜总黄　酮的促凋亡作用与其上调Ｂａｘ表达，抑制Ｂｃｌ一２表达有关。　参考文献　５韩锐．抗癌药物研究与实验技术［Ｍ］．北京：北京医科大学、中　国协和医科大合出版社，１９９７．２７１－－２７２．　６　Ｙａｎｇ　Ｅ，Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ　Ｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔｈａｎａｔｏｐｓｉｓ：ａ　ｄｉｓｃｏｕｒｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＢＣＬ一　２　ｆａｍｉｌｙ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，１９９６，８８（３）：３８６－－３８８．　７卿晨，丁健．Ｂｃ１．２基因家族在调节细胞凋亡中的作用［Ｊ］．国　外医学・分子生物学分册，２０００，２２（１）：ｌ７～２１．　８　Ｌｉｕ　Ｙ，Ｈｅｍａｎｄｅｚ　ＡＭ，Ｓｈｉｂａｔａ　Ｄ。ｅｔ　ａ１．ＢＣＬ２　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｆｒｅ・　ｑｕｅｎｃｙ　ｉｒｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ａｇｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９９４，　９ｌ（８）：８　９ｌＯ～８　９１３．　９　ＤＥ　１ｇ　Ｇ，【　ｅ　Ｃ　Ｋｏｍｂｌａｕ　Ｓ，ｅｔ　１．Ｒａｔｉａｏ　ｏｆ　ｂｅｌ—ｘ　ｓｈｏｒｔ　ｔｏ　ｂｃＩ－ｘ　ｌｏｎｇ　ｉｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎ　ｇｃ￣ｘｔ・ａｎｄ　ｐｏｏｒ・ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅｌｏｉｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｍ０１　Ｍｅｄ，１９９８。４（３）：１５８～１６４．　１０　ｌ－）ｅｎｇＧ，ＥａｒｌｅＣ，Ｋｏｍｂｌａｕ　Ｓ，ｅｔａ１．Ｒａｔｉｏｏｆ　ｂｅｌ—ｘ　ｓｈｏｒｔｔＯｂｅｌ－ｘｌｏｎｇｉｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎ　ｇ０Ｃｄ．ｎｄ　ｐｏｏｒ－ｐｒａｏｇｎｏｓｉｓ　Ｓｕｂｓｅｔｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅｌｏｉｄ　ｌｅｕｋｅｒ－　ｎｉａ．Ｍｏｌ　Ｍｅｄ［Ｊ］．１９９８，４（３）：ｌ５８～１６４．　（收稿日期：２００６．０７．１０修回日期：２００６－０８．２５）　１　Ａｇｗ￣ｌ　Ｒ，ＷａｒｍＺＹ，Ｍｕｋｈｔａｒ　Ｈ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｕｔｇ￣ｓｋｉｎ　ｔｕｍｏｒ　初产年龄、产次与骨密度关系的探讨▲　广西医科大学第一附属医院　（南宁５３００２１）　莫凤媚※　蒋凤艳△　劳　山　［摘要］　目的探讨初产年龄、产次对妇女骨代谢、骨密度影响。方法骨密度。结果采用统一问卷表方式调查问卷，早晨８：００－－１０：００　取空腹血和第二次晨尿，尿钙（Ｃａ）、肌酐（Ｏｒ）、血碱性磷酸酶（ＡＬＰ）均采用酶法测定，采用ＧＥ公司提供双能ｘ线骨密度仪测定　初产年龄小于２５岁组骨形成指标血、ＡＬＰ骨吸收指标、尿Ｃａ／Ｃｒ值高于大于２５岁组（Ｐ＜０．０５），产次大于３次　组各部位骨密度低于产次３次及以下组（Ｐ＜０．０５），两组骨代谢指标差异无统计学意义。结论多，骨量丢失越多，骨密度越低，越容易发生骨质疏松。　女性初产年龄越年轻，产次越　［关键词］初产年龄；产次；骨代谢；骨密度　［中图分类号］Ｒ７１４．１　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｍｏｎｇ　ａｇｅ　ｏｆ　ｆｉｒｓｔ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ａｎｄ　ｂｏｎｅ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ＭＯ　Ｆｅｎｇ－ｍｅｉ．ＪＩＡＮＧ　Ｆｅｎｇ－ｙａｎ。ＬＡＯ　ｎｎ．Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＧｕａｎｇｚｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２１），Ｃｈｉｎａ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖ￣ｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｄａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ＢＭＤ），ｏｎｅｂ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｗｉｔｈ　ａｇｅ　ｏｆ　ｆｉｒｓｔ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ａｎｄ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｄｄｉｖｅｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｏ　ａｐｐｌｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｑｕ￣ｔｉｏｎｎａｉｒｅ　ａｎｄ　ｔｏ　ｇｅｔ　ｅｍｐｔｙ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｕｒｉｎｅ　ｏｆ　ｓｅｃｏｎｄ　ｔｉｍｅ　ａｔ　８　ｔｏ　１０　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｒｎｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｕｒｉｎｅ　Ｃａ　ａｎｄ　Ｃｒ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＢＭＤ　ＷａＳ　ｂｙ　ｄｕａｌ　ｅｎｅｒｇｙ　Ｘ—ｒａｙ　ａｂｓｔｏｒｐｔｉｏｎｅｔｒｙ，ｐｍｖｌｄｅｄ　ｂｙ　ＧＥ　ｃｏｍｐａｎｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｕｒｉｎｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ａ　Ｃｎｄ　ａＣｒ，ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＡＬＰ　ｉｎ　ｔｈｅ≤２５ｙ　ｇｒｏｕｐ　ＷａＳ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ＞２５ｙ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．　▲广西教育厅科学研究项目（桂教科字［１９９８］１－５２号）　△通讯作者；※现在南宁市第二人民医院工作