苏州大学学报(医学版)2007;27(1) 25 兔膝关节腔注射 P一磷酸铬胶体后外周 血淋巴细胞染色体畸变率的变化 高宜军 ,董启榕 2 (1.昆山市第一人民医院骨科,江苏昆山215300;2.苏州大学附属第二医院骨科,江苏苏州215004) 摘要:目的 观察s2p一磷酸铬胶体注入兔类风湿关节炎模型膝关节腔后对外周血淋巴细胞染色体畸变率的 影响。方法9只新西兰兔随机分成3组,A组3只为正常对照;B组3只为模型对照;C组3只诱导成模型1周后, 右膝关节腔内各注射s2p一胶体磷酸铬44.4 MBq。3组均在c组核素注射后2个月时经耳缘静脉采血,其中c组另 在核素注射前、注射后3 d时采血。经培养后比较各组中期淋巴细胞染色体畸变率的变化。结果 A、B、C 3 组外周血淋巴细胞染色体观察均未见双着丝粒,无着丝粒断片率3组无明显差异(P>0.05)。c组各时间点外周血 淋巴细胞染色体观察也未发现双着丝粒,无着丝粒断片率也无明显差异(P>0.05)。结论关节腔注射实验剂量 的”P一磷酸铬胶体,兔外周血淋巴细胞畸变率的波动在正常范围内,说明放射性滑膜切除术是一种安全的治疗方 法。 关键词:放射性滑膜切除术;”P一磷酸铬胶体;淋巴细胞;染色体畸变;兔 中图分类号:R593.2205;R817.8 文献标识码:A 文章编号:1673—0399(2007)O1—0025—03 The Change of Chromosome Aberration Rate for Peripheral Blood Lymphocytes After Injection of Colloidal Chromic Phosphate P into Rabbit Knee Joint Cavities GAO Yi-juni,DONG Qi-『o (1.Dept of Orthopaedics,Kunshan No.1 People Hospital,Jiangsu Kunshan 215300,China; 2.Dept of Orthopaedics,the Second Hospital Affiliated to Suzhou University,Jiangsu Suzhou 215004,China) Abstract:Objective To study the impact on the chromosome aberration rate for peripheral blood lymphocytes after injecting colloidal chromic phosphate 。P into knee joint cavities of rabbit models of rheumatoid arthritis.Methods Nine rabbits were divided into three groups randomly.Three rabbits in group A were for normal comparison and three rabbits in group B for model comparison.One week after the three rabbits in group C have been induced as models,44.4 MBq colloidal chromic phosphate P was injected into the right knee joint cavity.In all of the three groups blood samples were taken from the ear—irm veins upon two months after the nuclein injection in group C.For group C,a blood sampling three days before and after the nuclein injection was conducted.After cultivation,examination and com— parison of the changes in lymphocytes chromosome aberration rate were conducted during the interim divi— sion in different groups.Results No obvious twin—centromere in the lymphocytes chromosome of periphe— ral blood was observed in all three groups.No distinct differences was observed(P>0.05)in compari— son of fragment rates.No twin—centromere was discovered in lymphocytes chromosome in peripheral blood,and no obvious difference(P>0.05)in fragment rates at all scheduled time in group C.Conclu- sion After injecting colloidal chromic phosphate弛P in lab test dosages into articular cavities,the lfuctua— tion of lymph cell chromosome aberration rate in peripheral blood of the rabbit is within the normal range, which proves that radioisotope synovectomy is a safe treatment method. 收稿日期:2006—02—07作者简介:高宜军(1970一),男,江苏徐州人,医学硕士,研究方向为膝关节外科。导师:董启榕 维普资讯 http://www.cqvip.com 26 SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE 2007;27(1) Key words:radioisotope synovectomy;colloidal chromic phosphate P;lymphocytes;chromo— some aberration;rabbit 放射性滑膜切除术是将放射性核素注入关节腔 内,使之均匀分布在滑膜表面,利用核素发射出B射 线,抑制滑膜中的炎性细胞增生,使病变的滑膜变 性、纤维化直至坏死,以缓解或在一定程度上消除滑 培养液各加入全血1 ml,即每只兔子有3个平行样 本,轻轻摇匀,置38.5℃的恒温培养箱中培养,24 h 后每培养瓶中加入最终浓度为0.3 I.zg/ml的秋水仙 素继续培养14 h,然后收获加入0.075 mol/L的KC1 膜炎症。目前对放射性滑膜切除术的临床应用尚有 争议,主要原因是其放射性对染色体畸变的潜在危 害仍无肯定的结论。本实验首次观察了兔类风湿关 节炎模型膝关节腔注射 P一磷酸铬胶体后不同时 间外周血淋巴细胞染色体畸变率的变化,以为其临 床应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物新西兰兔9只,周龄12~13周, 体质量1.5~2.1 kg,雌雄不限,由苏州大学实验动 物中心提供,分笼颗粒饲料喂养。自由饮水,动物房 室温(22±1)℃,光照与黑暗时间为每12 h更替。 1.2 试剂和仪器植物血凝素(PHA),鸡卵蛋白 (分子量为45000,批号020902,1 g装,上海伯奥生 物科技有限公司产品),弗氏完全佐剂(批号5881, 10 ml装,Sigma公司产品), P~磷酸铬胶体注射液 (北京原子高科核技术应用股份有限公司)。Olympus 光学显微镜,BX50国联专业图像分析仪。 1.3 方法 1.3.1 分组将9只新西兰兔随机分成A、B、C 3 组,A组(3只)为正常对照组,未做任何处理;B组(3 只)为关节炎模型对照组,模型的制备按Sreinberg 等I I的抗原诱导方法进行,诱导成功后不做其他 处理;C组(3只)为关节炎模型治疗组,诱导成关节 炎模型1周后,右膝关节腔内各注射1.2 ml P一 胶体磷酸铬44.4 MBq。 1.3.2培养基配制及分装 在无菌条件下配制 RPMI1640培养液(内含20%小牛血清,0.7%肝素, 4%PHA及青霉素、链霉素各100 u/m1),用5% NaHCO,调pH值至7.5~7.8,然后分装在灭菌培养 瓶内,每瓶装9 ml培养液,放于一20℃冰箱待用。 1.3.3 培养及收获在c组核素注射前、注射后3 d时,将c组3只兔子分别在无菌条件下经耳缘静 脉采血,每只每次3 ml,肝素抗凝。在c组核素注射 后2个月时,再将A、B、C 3组兔子分别在无菌条件 下经耳缘静脉采血,每只每次3 ml,肝素抗凝。每瓶 低渗处理,再用甲醇/冰醋酸(3:1)固定,气干法制 片,常规Giemsa染色,蒸馏水冲洗,待干后镜检。观 察分析染色体(2 =44±1)铺展良好的中期淋 巴细胞,记录细胞水平上能识别的各型染色体畸变, 并计算其所占观察细胞的百分率。 2 结果 c组兔子在核素注射前、注射后3 d、注射后2 个月分别观察了染色体铺展良好的中期淋巴细 胞380个、340个、350个,结果均未发现有双着丝粒 畸变,无着丝粒断片分别为3个、4个、3个,占所观 察细胞的百分率分别为0.79%、0.88%、1.14%,用 率的差异的统计学方法进行检验,P>0.05,3组数 据两两之间无明显差异。 在c组兔子核素注射后2个月,分别观察A、B、 C 3组染色体铺展良好的中期淋巴细胞400 个、350个、350个,结果均未发现有双着丝粒畸变, 无着丝粒断片分别为3个、3个、4个,占所观察细胞 的百分率为0.75%、0.86%、1.14%。用率的差异的 统计学方法进行检验,P>0.05,3组数据两两之间 无明显差异。 3 讨论 我们所处的辐射环境,包括天然本底辐射和人 工辐射,因此,未受到附加辐射的细胞也能见到有畸 变,通常称之为自发畸变I I。自发畸变的类型和辐射 引起的结构改变是相似的,只是频率很低,自发性畸 变中主要以无着丝粒断片为主。正常人的染色体自 发畸变率中,无着丝粒断片约占0.1%~0.3%,双 着丝粒只有0.OI%~0.05%,而兔这一种属动物自 发的染色体畸变率较人类的要高 邓志诚等H 观察 了1 157个兔正常外周血淋巴细胞,发现无着丝 粒断片8个,占0.69%,双着丝粒2个,占0.17%。 在兔全身受到大剂量辐射后,观察了800个淋巴细 胞相,无着丝粒比例上升至23.5%,双着丝粒、 着丝粒环的比例明显增大,占到41%。本实验中所 维普资讯 http://www.cqvip.com
苏州大学学报(医学版)2007;27(1) 27 观察到的染色体畸变类型都是无着丝粒断片,且各 殖,培养24 h后用秋水仙素开始终止其,并继 时间点的比例十分接近(P>0.05)。这说明不论从 续培养到38 h后进行观察,就是期望在染色体断片 染色体畸变的比例还是畸变的类型来看,关节腔注 可能丢失或修复前观察到其的存在。根据笔者前期 射44.4 MBq弛P一磷酸铬胶体对兔外周血淋巴细胞 弛P一磷酸铬胶体关节腔注射后在兔体内各主要组 染色体畸变的影响与其自发畸变相比都无明显差 织器官分布规律的实验结果,在兔膝关节腔注射 异,但无着丝粒断片率比相关文献的数据要高,这主 44.4 MBq的弛P一磷酸铬胶体3 d左右,其血液中的 要可能是由于观察的细胞数较少的原因造成的。 放射性活度最高,因此我们选择此时间点采血进行 1962年Bender用离体照射人体外周血淋巴细 观察。同时我们也考虑到 P胶体注入到兔关节腔内 胞的方法首先肯定人体细胞染色体畸变量和受照剂 后,产生的是一个持续性内照射过程,其不同于一次 量成正比关系。虽然这种剂量一效应关系是建立在 性外照射,随着时间的延长,内照射产生的累积剂量 分布均匀的急性外照射的条件下,但辐射效应的总 也越大,从而有可能不断地造成更多的染色体畸 的规律是剂量越大,效应越显著 1。所以,根据笔者 变。所以我们选择核素注射后2个月再次采集外周 前期的剂量实验结果…,我们选用44.4 MBq这个剂 血淋巴细胞进行观察,以便获得照射后染色体畸变 量,就是以期观察在较大剂量下兔外周血淋巴细胞 的累积效应。从本实验结果看,我们在淋巴细胞培养 染色体畸变率有无明显变化。本实验选用新西兰兔 38 h后获得了较多的中期的染色体,且染色体 为研究对象,主要由于其染色体核型为(44,xY),基 形态清晰,易于识别。另外,各个时间点的染色体畸 本与人相似,相对辐射敏感性与人接近(0.87:1)[71。 变率无明显差异,也说明在44.4 MBq的剂量下,不 我们将弛P一磷酸铬胶体注入到兔的膝关节腔内,即 管是血液中放射性活度最高时还是注射后2个月, 是在其体内放置了一个内照射放射源,其衰变时放 外周血淋巴细胞染色体畸变率的波动都在正常范围 射出的B射线使炎性滑膜细胞核固缩,细胞坏死,但 内。当然,本实验只观察了2个月,至于更长期对染 由于染色体对电离辐射非常敏感,所以也有可能造 色体畸变率的影响,尚需进一步研究。 成正常细胞染色体的畸变。但本实验结果表明,A、 参考文献 B、c3组兔的外周血淋巴细胞畸变率无明显差异(P >0.05)。我们分析认为,由于我们是将放射性核素 【1】 Steinberg ME,McCrae CR,Bersell RA,et a1.Intra.articu— 以胶体盐的形式注入到关节腔内,胶体颗粒较大,不 lar 5-flUO rouracil in antigen induced arthritis【J】.J Bone 能被直接吸收入血,而是被机体看做是异物由巨噬 Joint Surg(Am),1971,53(6):514—522. 细胞吞噬后缓慢由淋巴吸收,故能长期滞留于关节 【2】 高宜军,董启榕.兔类风湿性关节炎模型的诱导机制及 腔内,全身各组织脏器的放射性活度很低,因此其相 组织病理学的研究【J1.苏州大学学报(医学版),2005, 当于一种局部内照射,而B射线组织内的平均射程 25(5):803—806. 【3】 Obe G,Johannes I,Johannes C,et a1.Chromosomal aber— 只有2~4 mm,所以杀伤的绝大部分都是炎性滑膜 rations in blood lymphocytes of astronauts after long—term 细胞。因此,在44.4 MBq这个剂量下,兔外周血淋 space lfights[J】.Int J Radi ̄Biol,1997,72(2):727. 巴细胞染色体的畸变率仍无明显变化。 【4】 邓志诚,李双甲,詹江海,等.人和家兔受局部急性 射 染色体畸变的淋巴细胞再时,随着次 线照射后的染色体畸变分析….辐射防护通讯,1993, 数的增加,由于染色体断片未附着于纺锤丝而往往 3(3):21—28. 丢失,或由于在过程中分配不均匀,造成子细胞 I 5 I Lolyel DC.Chromosomal analysis to assess radiation dose 遗传物质的不平衡,使其不能继续存活而导致细胞 I J 1.Stem Cells,1997,15(Supple 2):195. 死亡。从而使畸变细胞数随时间的推移而迅速递 【6】 高宜军,董启榕.不同剂量”P一磷酸铬胶体关节胫注 减。另外,有些畸变可在细胞内经自我修复系统得以 射对兔类风湿性关节炎模型的影响【J】.现代医学与临 床,2006,6(1):1—3. 修复。因而在急性全身外照射的辐射损伤研究中,通 I 7l 张连珍,邓志诚,王海燕. 射线整体和局部照射家兔 常是对辐射后第一细胞周期的中期细胞进行分 诱发血淋巴细胞染色体畸变及其消长规律的研究…. 析,以避免上述情况造成畸变细胞减少而使结果不 辐射研究与辐射工艺学报,1997.15(5):109—112. 准确。张连珍等 1的研究结果表明,兔外周血淋巴细 I 8 l 张连珍,李云华.家兔外周血淋巴细胞染色体标本制 胞培养38 h,其M。期细胞占92.5%。因此我们取外 备及其细胞周期的测定【J1_辐射研究与辐射工艺 周血淋巴细胞使之在PHA作用下进入细胞增 学报,1989,3(1):33—34.
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