维普资讯 http://www.cqvip.com ２００２年Ｉ１月 ＮＯＶ ，２００２ 第２４卷 第１ １期 Ｖ（）ｌ ２４ ＮＯ ｌｌ 提取水蛭有效成分初探 刘 欣， 张文清， 夏 玮， 金鑫荣， 顾百胜 （华东理工大学化学与制药学院，上海２００２３７） 关键词：水蛭水蛭素氮含量提取工艺 中图分类号：Ｒ２８４ ２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：ｌ００ｌ—ｌ ５２８（２００２）ｌ１—０８９４—０２ 水蛭作为常用的活血化瘀中药，具有破血，逐瘀，通经 之功能 ，在【｛ｌ药ｌ临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾 病的治疗。 ６０。Ｃ，提取时间ｌ ５ ｈ，过滤，回收乙醇，样品定容为２５ ｍＬ： 分别测定样品中的氮含量和水蛭素含量。氮含量的测定采 用ｆＩ动凯氏定氮法［６ ；水蛭素的测定可依据其与凝血酶按ｌ ：ｌ结合的原理，采用以下方法测得。 ２．３温度条件的选择 水好医用始载于《神农本草经》，其有效成分主要为一种 抗凝血物质， 为水蛭素（Ｈｉｒｕｄｉｎ）。它能阻止凝血酶对血小 板的作用，抑制血小板受凝血酶的刺激而释放，从而延缓或 由于水蛭素只能在８０。Ｃ下稳定存在ｌ５ｍｉｎ，所以在选取 温度时，应尽鼍避免温度过高造成水蛭素失活。所以本试验 选用在５０。Ｃ，６０。Ｃ，７０。Ｃ下分别进行。称取水蛭粗分１０ｇ，采 用７０％的乙醇于３个温度各提取ｌ ５ｈ，并采用同样的方法 测定氮含量和水蛭素含量。 ２ ４提取时间的选择 阻止血液的凝困 Ｊ 、研究表明，水蛭素是由６５个氩基与３ 个二硫键组成的多肽，分子量约为７０００ ，在干燥状态下稳 定存在； 温下，在水中稳定存在六个月，８０ 下加热ｌ５ｍｉｎ 不被破坏；提高溶液的ｐＨ值，其稳定性下降；２０。Ｃ下，在 ０ ｌｎ１（］卜Ｉ 的ＨＣＩ或０．１ｍｏｌ・Ｉ 的ＮａＯＨ中可稳定ｌ５ ａｉｒｎ 水蛭素与凝血酶的亲和力极强，ｌ ｇ水蛭素可中和 称取水蛭粗粉１０ｇ，用７０ ｃ｝６的乙醇，在６０。Ｃ下分别提取 ｌｈ，ｌ ５ｈ，２ｈ。分别测定提取样品的水蛭素含量和氮含量。 ３实验结果与讨论 ５ｔｔｇ凝血酶，相应摩尔比为ｌ：ｌ，即中和一个国际单位（ＮＩＨ 单位）的凝血酶需要一个抗凝单位（ＩＡＴ ｕ）的水蛭素ｌ５ 。 根据以上唪尔比，以水蛭素含越及含氮量为指标，对不 同浓度、温度及提取时间的水蛭提取物进行比较，选择最佳 ３．１ 乙醇浓度的选择 从表ｌ的数据可以看出，不同浓度的乙醇对水蛭的提取 丁艺路线，并确定水蛭提取制备工艺 １ 实验材料和仪器 效果有较大的影响。从总氮含量来看，随着乙醇浓度的提 高，总氮提取率下降，原因是蛋白质的溶解度会随着乙醇浓 度升高而降低；从水蛭素的含量来看，随乙醇浓度的提高，其 含量不断增加，在７０％～９０％的乙醇浓度下，获得较好的提 水蛭（宽体金线蛭）上海中药饮片厂提供，原产地山东； 乙醇，上海振兴Ｔ一厂，ＡＲ；纤维蛋白原（ＦＩＢＲＩＮＯＧＥＮ） 取效果。由于水蛭素是一种可溶于水和乙醇等有机溶剂的 蛋白质，所以综合两种因素考虑，７０％～９０％的乙醇浓度是 较好的提取浓度。 表１ 不同浓度乙醇的提取结果 ＳＩＧＭＡ；凝血酶（ＴＨＲＯＭＢＩＮ）ＳＩＧＭＡ；Ｔｒｉｓ碱，ＳＩＧＭＡ单道 侈液器，ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；旋转蒸发器，上海申科机械研究 所；高速冷冻离心机Ｓｉｇｍａ ４Ｋｌ５；自动凯氏定氮仪Ｖａｐｏｄｅｓｆ ４０德国Ｇｅｒｈａｒｄｔ公司；自动酸碱滴定仪ＤＬ５３ Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ｓｗｉｌｚｅｒｌａｎｄ。 ２ 实验方法 ２ ｌ 水蛭素的测定方法 取纤维蛋白原０．２５ｇ，溶于５０ｍＬ的Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ缓冲液 （ｐＨｉ８）中，得０，５％的纤维蛋白原溶液。稀释凝血酶到 ５ＮＩＨ／ｍＩ 。取０ ２ｍＩ 纤维蛋白原溶液，加入２０“Ｌ水蛭素提 取液，并加入凝血酶至凝固，得水蛭素含量凝血酶浓度×凝血酶用量 水蛭素提取液体积 ２．２ 乙醇浓度的选择 注：提取率＝测定的总氮含量／生药量×ｌ００％ ＝ 表２ 不同温度的提取结果 称取水蛭粗粉ｌ０ｇ，分别用不同浓度的乙醇进行提取， 乙醇的含量为０％，３０％，５０％，７０％，９０％，提取温度定为 收藕日期：２００２ ０６ ０６ ３．２提取温度的选择见表２ 作者简介：刘欣（１９７８～），硕士研究生．主要从事中药制剂与分析．电话０２１ ６４２５３２２１。 ８９４ 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００２年１ １月 第２４卷第１ １期 ４小结 表３ 不同提取时间的提取结果 参考文献： ＮＯＶ，２００２ Ｖｏｌ ２４ Ｎ（）．１ １ ［１ Ｊ 中药大辞典（上册）第一版ｌ 海科学技术出版社．１９８６：５ｌ ７ ５ｌ８ ｌ ２］郭义明，胡於鲁．王庭力，等水蛭有效成分提取的初步探讨 ｌ Ｊｊ．中国海洋药物ｌ９９３ ｌ（４５）：４（１ ４ｌ ｌ ３ｊ 千于杰，陈劲春．两种新型抗血栓药物一水蛭素与水蛭肽 Ｊ ． 科技情报开发与经济２０００ ｌ０（５）：６０—６ｌ 本实验过程利用ｒ水蛭素和凝血酶１：１的配比关系测 定不同条件水蛭提取液的水蛭素含量，并配合氮含量的测 定，确定』，水蛭工业提取的最佳条件。实验结果表明，乙醇 浓度再７Ｏ％～９Ｏ％之间．温度住６０。Ｃ左右，提取时间１．５ｈ会 达到较好的提取效果。 ［４］欧兴长，Ｔ 家欣，张玲，等水蛭素的研究概况［Ｊ ．中国药学 杂志ｌ９９ｌ ２６（７）：３９６—３９９ ［５］ 于秉新，李爱君，邵民象．等水蛭开发与临床应用［Ｊ］，时珍国 医国药，２０００ １ｌ（２）：１７９ ｌ ８０ ［６］ 中华人民共和国药典［Ｍ］．北京化学工业出版社．１９９０：附录 ｌ ７．４５ 气相色谱法测定小金片中麝香酮的含量 余春霞 ， 陈建玉 ， 蒋仪丽 ， 张 磊 （１．河南省中药研究所，河南郑州４５０００４；２．中华全国供销合作总社郑州化肥农药农膜质量监督检验测试 中心，河南郑州４５０００８） 关键词：气相色谱法；小金片；麝香酬 中图分类号：Ｒ９２７．１ １ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１ １５２８（２００２）１ １ ０８９５ ０２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｓｃｏｎｅ ｉｎ Ｘｉａｏｊ ｉｎ Ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＧＣ ＹＵ（＇ｈｕｎ—ｘｉａ ， ＣＨＥＮ Ｊｉａｎ—ｙｕ ，Ｊ ＩＡＮＧ Ｙｉ—ｌｉ ， ＺＨＡＮＧ Ｌｅｉｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ（）ｎｔｅｒ（ １ ＦＰｒ ｚｌｉ ２：Ｐ ．Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５（１００８．（ ｈｉｌｉａ、 （Ｊ Ｈｅｎａ”Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ’（７ｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉ￣ａ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００４．Ｃｈｉｎａ；２ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ＤｅｔＫｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＧＣ；Ｘｉａｏｊｉｎ Ｔａｂｌｅｔｓ；ｍｕｓｃｏｎｅ 小金片是由麝香、枫香脂、乳香、没药、当归等组成的复 方制剂，具有散结消肿，化瘀止痛的功效。本品中麝香既为 君药又为贵重药，故我们选择麝香的有效成分麝香酮作为质 量控制的定 指标。由于本品为大复方制剂，成分复杂．含 榆测室温度２５０。Ｃ。 ３方法与结果 ３ １ 对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量，精密称定． 加无水乙醇制成每毫升含０ ２ｍｇ的溶液．作为对照品溶液： ３ ２ 对照品的纯度检查 精密称定麝香酮，加无水乙醇溶 解至每毫升含２０ｍｇ的麝香酮溶液，精密量取２０，ｄ ，注入气 相色谱仪按上述方法进行测定，从对照品出峰起计时，继续 延长２倍，以面积归一化计算。测定结果为９９．３７％ 色潜 图见图１。 挥发性成分的药物占处方量的４０％，所以我们通过选择最佳 分离条件．建立小金片中麝香酮的含最测定方法。此方法简 便易行．结果稳定可靠． ．１仪器与试药 ｊ＝．海惠普１００２气相色谱仪；小金片由本所制剂室提供； 麝香酮为对照品．由中国药品生物制品检定所提供；无水乙 醇、苯均为分析纯。 ２ 色谱条件 ３ ３标准曲线的的绘制 取麝香酮对照品加乙醇溶解，制 成每毫升含１ｍｇ的溶液，分别吸取麝香酮对照品溶液０．２， ０ ４，０．６，０．８，１．０ｍＬ加乙醇稀释至２ｍＬ，取上述系列溶液 ２ Ｌ注入气相色谱仪，按上述方法进行测定．记录峰面积。 以峰面积积分值为横坐标．麝香酮量为纵坐标，绘制标准曲 线。回归方程为Ｙ＝４．０２×１０ ｘ＋０ ００８０．ｒ＝０．９９９６；线 色谱柱：ＳＥ一５４大口径石英毛细管（３０ｍ×０．５４ｍｍ）；检 测器：ＦｔＤ；色谱柱温度２００。Ｃ；气体流速：氮气１５ ｍＬ・ｍｉｎ ． 氧气３５ ｍＬ・ｍｉｎ ，空气３５０ ｍＩ ・ｍｉｎ ；气化室温度２５０。Ｃ， 收稿日期：２００Ｉ＿１Ｉ＿０ｌ 作者简介：余春霞，（１９７２～），女，河南省郑州市人，工程师，主要从事中药制剂与分析电话：０３７１ ６３２３４４８ ８９５
