果蔬中还原糖与总糖的测定

一、实验目的

1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 2、学习分光光度计的原理和操作方法。 3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理。 二、实验原理

总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。

多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。 三、实验器材 1、材料：梨

2、仪器：分光光度计、恒温水浴锅、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶（100mL×2）、玻璃漏斗、量筒、研钵、锥形瓶、试管、移液管、pH试纸 3、试剂：

蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。 标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几滴甲苯作防腐剂）。 6mol/L HCl溶液

20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100mL。 四、实验操作

1、葡萄糖标准曲线的绘制：

取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按下表加入各试剂

试剂 管号 标准葡萄糖溶液/ml 蒸馏水/ml 蒽酮试剂/ml A620nm 0 1.0 4.0 0.1 0.9 4.0 0.2 0.8 4.0 0.3 0.7 4.0 0.4 0.6 4.0 0.5 0.5 4.0 0 1 2 3 4 5 置冰水浴中5min 煮沸10min，冷却后室温放置10min，在620nm处比色 以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。 2、样品中还原糖的提取和测定

称取1g梨，加蒸馏水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温约30min（使还原糖浸出），取出置于离心管内，5000r/min离心10min，冷却后定容至100mL。

吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 3、样品中总糖的提取、水解和测定

称取1g梨，加蒸馏水水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解30min，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性，取出置于离心管内，5000r/min离心10min，然后用蒸馏水定容至100mL。

吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 六、计算

按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）。

C1V1 W(还原糖)= 100%

mC2V2 W(总糖)= 0.9100%

m（乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。） 其中： W（还原糖）：还原糖质量分数（%） W（总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL） C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL） V2：样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量 五、实验思考

1、应用蒽酮法测得的可溶性糖包括哪些？

2、干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？ 3、了解可溶性糖含量在植物生理研究和实际上有什么意义？