生物制药

Ana M. Azevedo, Paula A.J. Rosa, I. Filipa Ferreira and M. Raquel Aires-Barros

学院的生物技术和生物工程,生物与化学工程中心,Instituto cnico Te´优越,Av. Rovisco Pais, 1049-001 Lisbon, Portugal

治疗使用创造了一个蛋白质的需求量增加可行、经济的方法——以及下游两个过程.然而,吸引了大量投资的上游过程和商业的关注,却忽视了下游加工生产瓶颈问题,造成变形是生产费用的边缘了。本文着重论述了利用双水相萃取作为一种选择的下游加工具有治疗作用的蛋白质。它是一种发展潜力和良好的液-液萃取技术纯化生物分子,如单克隆抗体,增长因素和激素,相结合的高选择性和生物相容性与一个简单的放大以及连续化操作方式。 当前一些下游处理生物制药

大量的需求具有治疗作用的蛋白质(表1),为疾病的治疗需要高剂量和/或慢性管理局(例句。375毫克/平方米/周的治疗的利妥昔壁炉架细胞淋巴瘤[1])受到了关注潜在生产能力的不足,这又反过来也愈演愈烈的压力,提高细胞文化生产力[2]。

先进的分子生物学已导致生产率增加细胞系通过优化配方和饲料交货的媒体策略。过程控制、生物反应器设计与宿主细胞工程也已经在改善上游过程具有显著影响的因素[2]。抗体titres,例如,已经增加了几毫克十年前到几克每升,据报道titres今天已达到27 g / l。 不过,而上游的生产率增长符合需求,对改进的下游过程却受到冷遇,因为生物制药公司不愿意更换新的的长期过程。这是一个生产瓶颈,导致生产成本正在转变到下游加工[3]。事实上,下游的过程生物制药生产可以占全国总人口的80%的制造成本[4]。作为结果,需要(我)改进过程,并因此经济学和效率降低成本;(二)满足日益增长的需求为高质量的所要求的市场的发展是迫使批准more-efficient及高性价比的分离和提纯方法要跟上任何上游收益。在本文中,我们将讨论的可行性,利用双水相萃取法处理生物制药的下游。 除了色谱还有什么呢？

下游加工通常包括四个阶段,即、回收率、分离纯化、抛光。然而,它相对容易识别瓶颈的过程。具有恢复、隔离和抛光只占总额的百分之二十,主要下游成本过程中发现了选择性的局限性,目前占主导地位的纯化步骤用色谱法[5,6],占> 70%的下游成本,主要由于成本和相对长一些媒体的生产周期。此外,目前正在推行色谱发展上游没收,并超出其物理和经济极限[7]。然而,高分辨率层析分离允许在一个步骤,一直埋头苦干的人对蛋白质的分离,特别是在生物制药行业,在高程度的纯度是必需的。例如,该平台的纯化,单克隆抗体(mAbs)通常包括三个色谱步骤;蛋白质:一种色谱捕捉和两个色谱抛光步骤一步清除剩余的宿主细胞蛋白,high-molecular-weight聚集物,小分子清脆的物种,DNA和淋溶蛋白质:一种[8]。

Non-chromatographic提出的方法能够有效替代一些色谱步骤只要最后净化不受损害。描述了该系统的一些有前景的方案,在文献上,包括,亲和力降水],[9、10双水相萃取(如分区)[11日、12日],高性能的切向流过滤、膜色谱[13]],[14、15高梯度磁打捞[16][17]和结晶。这些替代技术,特别是针对双水相的划分,并设法避免高通量有关的问题,与大多数色谱支持,比如费用高,容量有限和diffusional局限性。此外,已经有一些报告的提纯工艺的生物制药产品,不包括任何色谱步骤[18至21]。然而,使用色谱分离的基础上模拟移动床(SMBs)或单体目前出现了大的承诺。具体地说,该组织领导下Morbidelli最近探索利用一组的可能性的六色谱柱不断净化生物分子,如mAbs,使用所谓的多列(MCSGP逆流溶剂梯度纯化过程[22])。

表1。什么是生物制药?

定义

生物制药是medicinalproducts们,包括rapeutics和体内,诊断中,有一个内在的制造生物性质、利用现代生物技术，利用基因工程技术,特别是生产技术(或hybridoma不朽的antibody-secreting融合细胞的淋巴细胞和骨髓瘤细胞株(67])。第一个生物药剂学要投放市场是人类重组胰岛素,批准于1982年,标志着一个新时代的开始,专为制药工业。从那时起,超过350生物制药批准的监管机构[68],有超过600化合物在发展和在临床试验中,包括重组蛋白,单克隆抗体、核酸及整个细胞。 市场

生物制药产品的市场是增长最快的国家之一,细分的制药行业,以及传统药物的疗效是减少和人口的老化,新疗法的需求也在增加。行业是如此专注于发展新biotechnology-derived产品。年销量的几种生物制药已经超过1亿美元[69]。2006年,全球市场对生物制药大约价值500亿美元左右(70],预计将超过900亿美元到2010年[71]。 双水相萃取

双水相体系(ATPSs自发地形成了混合)的水溶液在结构上两个不同的组件,如两种聚合物或聚合物和盐,超过某一临界浓度。Albertsson以来的开创性工作(23)，水内提取已成功地应用于下游加工的几种生物化合物,如蛋白质,核酸和氨基酸等。因为大部分主要由两个阶段的水,而且大多数聚合物稳定的蛋白质三级结构的影响[24],这些系统提供一个生物相容性的环境,为生物材料。此外,在这个过程中,允许一体化的澄清、浓缩和在仅一步纯化及其放大是容易的,可靠的[25]。此外,传统的设备用于化工液液萃取,例如mixer-settlers、柱连接器和离心接触器,就可以很容易地适用于双水相萃取[第二十六条、第二十七条]。

然而,一种应用在processscale ATPS制约了系统的复杂度结合到分区机制尚不清楚和方法的发展是相当经验[28]。的确,在一个分区的生物化合物不仅取决于ATPS的生物分子的物理化学性质,如表面疏水性、收费和大小,还取决于系统组成。虽然一般规则已被描述[28],错综复杂的化学和物理间的相互作用,参与了均分过程(e.g.electrostatic和范德华力、氢键、疏水相互作用和影响的行为)做出经过一个特定的生物分子的唯一性。然而,这也意味着一种化合物的分区,你也可以操纵的这样一种方式,它应该有可能完成他们的目标生物分子含有更少的杂质的局面,例如,通过改变特定的参数,包括相位分量和盐浓度、高分子材料,聚合物分子质量的pH值和离子强度,或通过添加亲和配体系统。用一种机器人高通量筛选的方法,它是可能的影响,测试系统的组成、聚合物分子量、离子强度、酸度和补充的化合物在短时间内划分系数(29岁)。

另外,实验的设计(DOE),如代理店或中心复合设计,也可以是有用的筛选和优化工具分割目标生物,让一种快速评价不同参数的影响,并有可能产生的相互作用,而不需要改变一个参数在某段时间内[51 - 60]。另一个因素阻碍了开采在生物制药产业已经ATPSs高成本的一些聚合物,特别是间右旋糖酐(大约500美元/公斤[34])。然而,几个提出了可行方案作为替补出场,包括原油、羟丙基淀粉,蜡右旋糖酐淀粉或甚至盐如磷酸盐、硫酸盐和柠檬酸。ATPSs组成的聚合物和盐已经被广泛的使用,是一个吸引人的具成本效益的替代polymer-polymer系统过程中使用的一种并不昂贵的相位分量。然而,高消费的phase-forming部件,因此,其对废水处理是一个相关的问题,为这些系统的应用进行了大规模的。虽然聚乙二醇被生物降解,而且无毒、盐处理(如磷酸盐)可能造成麻烦。然而,相位元件的回收利用的可能能最大限度地减少这些。大所需数量的纯水的应用在下游加工这些系统的生物也可以是一个非常重要的关注。然而,由于纯水的预估成本的大型生物科技公司可能会低至0.2 / L美元[35],该约束是容易克服。

单克隆抗体(mAbs)

mAbs已被描述为大自然的生物弹头在他们能够目标和消除外国和从身体异常代理商[36]。他们为一个抗原特异性有巨大的临床价值和犯错误治疗药物与一鸣惊人的潜力。事实

上,mAbs已成为一个增长最迅速的一类疗法和丰厚的收入将增加从6.84亿美元左右13.77 2004年2011年美元仅在美国就[37]。目前,26 mAbs批准了美国食品及药物管理局(FDA)治疗巨量的疾病,包括癌症、自身免疫、炎症紊乱,器官移植排斥反应、传染性疾病及心血管疾病,而且会有更多的是在临床和临床前试验。一个ATPS提取中抗体的构成一个有趣的替代传统的下游加工的抗体,大部分的研究工作发表到目前为止利用要么是polymer-salt系统[38-40]或功能化polymer-polymer系统[12,30岁,41岁的42]。大部分的策略依靠提高抗体对分割阶段(PEG-rich上部),因为大多数杂质隔断优先底部阶段。图表1和2说明策略用于polymer-salt和polymer-polymer系统,分别加以深入探讨如下。 Polymer-salt系统的mAbs下游加工

最早的一种描述使用一种polymer-salt ATPS的纯化,mAbs为可追溯到1992年的工作在Sulk et al .[43],他形容的三阶段法是分离的IgG1免疫球蛋白G1(mAb从hybridoma)细胞培养上清。净化达到了使用双水相萃取过程,随后进行了浓度吸附色谱法和thiophilic一步。使用这一过程中,总收率在IgG1是71%,有90%的复苏ATPS一步[43]。使用一个小分子盯住10达和高盐浓度(22%磷酸盐),这可能是抗体对目标的最上面的阶段,通过最小化,促进聚合物排除影响盐析。几年以后,在1996年,在Asenjo[38]研究小组提出了一个分为两步的过程(back-extraction)的提取和纯化的近亲繁殖,也从一hybridoma IgG1上清,那涉及一个提取的PEG-rich第一阶段的ATPS组成的盯住美元的汇率机制、磷酸盐和盐,其次是第二次提取一步一个新鲜的磷酸盐的解决方案。在这种情况下,一个low-molecularweight盯住美元的汇率也使用(1450 Da),而是因为一个更低的盐浓度的磷酸盐被选中,只有14%的加起来是非常必要的,以促进saltingout氯化钠的12%,并要收回大部分的抗体在上面的阶段。

经过一段时间的近10年时间,在此期间没有文献已经出版了ATPSs的使用为提纯的抗体,人们对该技术最近的成果,有可能引起的后果对替代下游加工方法需要。在2006年,Platis和Labrou[40]分区系统提出了一种双水相初始分馏的步骤mAb从转基因烟草提取物治疗。使用一个ATPS组成的盯住美元的汇率机制和磷酸盐缓冲在pH值5,三——四倍的净化与高恢复阶段(95%可信区间底部产量)达到了[40]。空调一步后,这下阶段载荷的一种蛋白质的一种色谱柱。虽然取得了类似的净化因素相比,有一种蛋白,踏着一层析水内的组合提取和蛋白质:一种色谱法不仅允许完全去除酚类、生物碱化合物从烟叶而且改善了亲和力柱的性能(40)。 2007年,我们小组发表了一系列的文件,使用ATPSs钢筋的潜力的初始净化的抗体。使用PEG-phosphate系统,结果表明,分割的转变阶段,对抗体可能在更少的杂质,是通过增加一个中立的盐的浓度,如盐、32个[11],同意以前发表的结果[38]。使用这些系统的潜力为提纯的抗体首先被证实人工混合蛋白质组成的人血清白蛋白及肌[32],然后扩展到的纯化,从中国仓鼠卵巢(抗体)和hybridoma细胞supernatants秋[11]。

PEG-phosphate系统产生的高浓度废水流间的磷酸盐,,众所周知,它是有强烈的对环境的冲击。为了克服这一,我们发现取代磷酸盐与一个可生物降解的盐,如柠檬酸分离,从而导致类似[39]。为PEG-phosphate所描述的系统,以增加其浓度的盐也把分割IgG从下往上爬的阶段PEG-citrate系统。因此,通过改变浓度的盐,它可在目标的隔断IgG阶段用更少的杂质。 我们最近提出了一个两步提取使用PEG-citrate ATPS净化从澄清hybridoma IgG上清,那里的主要杂质是血清白蛋白。使用这一过程中,总收率在IgG 99%以上,最后是蛋白质纯度为96%为95.3%。在第一步、IgG提取到顶部的阶段,而在使用15%氯化钠的第二个步骤是re-extracted、IgG阶段通过减少到新鲜柠檬酸盐的浓度减少到5%[39]。系统的PEG-citrate也被用于部分净化IgG从秋的细胞上清[44]。在这一特定的情况下,由于无血清培养基,用于细胞培养目标的加入氯化钠的隔断IgG到顶部的阶段是没有必要的,因为IgG蛋白质被发现和溶质在不同的发展阶段在缺乏氯化钠。研究者在citrate-rich从而得以恢复阶段,是一种有74%提取率为97%,约占总蛋白质的纯度等方面的内容。为进一步纯化,疏水相互作用色谱

(HIC)用来利用高浓度的盐。最后的抛光,达到了,这使得“size-exclusion色谱法去除多余的盐和IgG蕴[44]。

系统中使用的策略来提高PEG-salt抗体的隔断,每当这是PEG-rich阶段需要达到一个选择性的净化机理,分析了图1及包括使用低分子量盯住美元的汇率机制的分子与盐浓度的增加或。要获取更详细的信息关于ATPS组成、性能,读者主要是指表S1在线补充材料伴随这个手稿。

Polymer-polymer mAb净化系统

在一个ATPS组成,两个不同的聚合物结构,如汇率右旋糖酐静脉滴注,大多数蛋白质(包括抗体)隔断,更亲水,优先dextran-rich阶段。因此,加强对PEG-rich抗体亲和力的阶段,这两个终端羟基钉分子进行了修改,范围广泛的配体分子。这一策略并不可行,因为polymer-salt系统中高浓度的盐,这些面具任何亲和力或静电相互之间的配体和生物分子。

最早的一种描述配体的使用提高亲和力的提取亲和力抗体在ATPSs(即)可追溯到提取Asenjo及合作夥伴的工作[45],谁也用钉连接到一个作为配体蛋白抗体亲和力的约束。然而,蛋白质的功能化盯住A是一种复杂和昂贵的过程,这使得这一策略,而不适合进行大规模的工业应用。次年,Birkenmeier孙俐。[46]描述了协议用于制备一种iminodiacetate(IDA)-PEG与各种不同的金属螯合物的选择性分离纯化的双水相萃取蛋白质。在一个PEG-dextran ATPS,更换20%的盯住美元的汇率机制由PEG-IDACu 2 +导致十倍的增长在分割系数的抗体。 Ziljlstra et al.[47，48]发展了一种萃取发酵,在使用ATPSs和秋hydridoma动物细胞(细胞)都生长在底部阶段、IgG后来前阶段。这个程序允许不仅就地回收IgG而且一体化的生产过程中,上游和下游的IgG2a[49]。该萃取发酵过程进行了系统的组成和polymer-polymer右旋糖酐改性的一种染料盯住美元的亲和力配体(1 A6XL拟态绿色)[42]。

最近,我们的团队,在协作与Syncom(http://www.syncom.nl)的性能进行了评价几种功能化盯住美元的汇率机制的分子占领的人类抗体从秋的细胞上清[12,50]。配体含有起诉,疏水性或亲密群体的筛检,无论在形式的自由配体或作为phase-forming组件。板的下半截是双的,自由配体(TEG)分子二乙二醇改性,mercaptoethyl glutaric酸、磺酸钠(机电),aminoquinuclidine吡啶(AQ1嘧啶和triazine -),基于组。此外,PEGmoleculeswere glutaric-acid改性、氨基- - - -、嘧啶、机电、苯-和triazine-based团体和作为phaseforming组件。在自由配体、TEG)显示diglutaric酸(TEG-COOH越高亲和力抗体,对蛋白质提取率和纯度96%的95%能实现(约50]。关于功能化的盯住美元的汇率机制,取得了可喜成果得到glutaric酸、氨基和苄团体,提取的产量和蛋白质> 90%纯度的75%(约50]获得了。

ATPSs小说的发展包括使用所谓的“漂亮的聚合体,在外界刺激会产生反应,例如温度、酸碱度及电场。我们最近指出,一个ATPS组成的右旋糖酐和thermo-responsive乙烯、乙烯共聚物(EOPO氧化oxide-propylene),可用于提纯的人类抗体[41]。TEGCOOH转移的加入的划分从dextran-rich IgG阶段向EOPO-rich阶段由于有利的抗体分子的静电作用。这事以后,首先提取、抗体可回收利用在一个分开的窜升阶段和聚合物相分离temperature-induced 52暖[41]。使用这些聚合物作为一种替代盯住美元的汇率机制不仅允许后恢复的聚合物热相分离技术以及后续的重用为另一个ATPS又可以使生物分子的浓度在窜升阶段(图3)。盒2总结了网络参数,提高了分割的抗体。 胰岛素样生长因子I

I(IGF-I胰岛素样生长因子)是一种多肽激素,是类似的分子结构对胰岛素,这有一个重要的角色,并且继续在童年成长在成年人中,有合成代谢的影响IGF-I调节胰岛b-cell成长、生存和新陈代谢,防止1型糖尿病,[51]。IGF-I的纯化,由双水相萃取是经常eferred在文学作为整个行业的ATPS[52-成功案例和专利],因为它已被Genentech(http://www.gene.com)发布[55]。

重组人IGF-I积淀在大肠杆菌periplasma涵体的形式,可以通过chaotropes之前(2米)和尿素(10毫米的还原剂在碱性条件下[pH值二巯基苏糖醇),而不需要10][56]机械同质化。该原位solubilization产量的提高回收率从发酵IGF-I肉汤温度的降低而减小后续离心效率的一步都由于增加粘度和密度的大部分的解决方案。作为一种替代澄清一个双水相萃取步骤,使IGF-I,研制出了与细胞碎片能够分割[56]到对面阶段。是一个多因素的实验方法,用于确定条件优化分割IGFI到顶部的相位和生物量底部阶段使用一个ATPS组成的盯住美元的汇率机制和钠的硫酸盐[31]。优化后的ATPS被成功地用于净化以英文为母语的一般,从大量IGF-I极致味道以大小范围10 ~ 1000 L[56]。在大型(1立方米),全球产量的原位solubilization来自两IGF-I ATPS步骤为70%,与纯度为97%[56]。 表2。选择性因素,upper-phase回收中的抗体

通常,蛋白质是亲水的分子和内因有较高的密切关系,更亲水相(如下，polymer-salt盐相阶段系统和extran polymer-dextran系统)。因此,有选择性地萃取的抗体可以实现提高到更疏水性的分区 PEG-rich阶段(通常都是上部阶段),它可以通过使用: 低聚合物分子量

通过降低聚合物分子量的影响,排除在上层阶段的划分,提出的减少蛋白质有所增加。在polymer-salt系统,它已发现通过使用分子量低(换句话说超过1500达。1450),这是盯住美元的可能目标抗体与上部的阶段。对于更高的分子量,抗体分区特别是对底部阶段(例如PEG3350)。

高离子优势

在高离子的长处,盐析效应是负责的析出的蛋白质。一个中立的盐的加入到一个ATPS生产增加了离子强度的系统,特别是salt-rich阶段。额外的离子强度会支持的一方或其降水分区的生物分子polymerrich阶段。在PEG-salt系统,它是可能的目标的隔断抗体进入PEG-rich阶段采用氯化钠浓度高于12%(w / w)。

低pH值

对polymer-rich萃取蛋白质是典型的增强相酸碱值高于pI。然而,由于可能的变性,这是不可行的,抗体,这有一个pI约9。此外,当盐被用来支持回收中的抗体PEG-rich盐析效应是显性阶段,并因此能在最大程度上使用的酸碱值低于pI经验者优先考虑。酸性的使用价值增加的电子斥力,从而减少聚集和沉淀。

亲和配体

在polymer-polymer系统,将更喜欢dextran-rich抗体亲和配体的阶段,除非是用来增强亲和力的PEG-rich阶段。Polymer-polymer系统也已经被成功的应用于恢复IGF-I PEG-dextran提取物,包括从整体和聚乙烯醇、聚氯乙烯pyrrolidone-dextran alcohol-ethanol-PEG表演,和类似的PEG-sodium硫酸盐ATPS能实现[55]。

人类生长激素

人类生长荷尔蒙(hGH)是一个单一的多肽链的二硫化物 191个氨基酸组成和分子量的债券和pI 22000达5.3附近。它已经被用来治疗hypopituitary和软骨发育不全的或其他条件造成的低水平的hGH生产[57]。

从净化人类生长激素大肠杆菌涵体结合使用一种原位solubilization一步一步的双水相萃取与描述成鹿和同事[53]。一个ATPS组成的盯住美元的汇率机制、钠硫酸盐允许的回收率在85% PEGrich人类生长激素后的阶段,solubilization人类生长激素后又出现了4 Murea,10 mMDTTand20 mMglycine at alkalinepH[55].

双水相萃取一个多步骤,在缺乏chaotropic agents,被Hayenga[57]和Valax描述成净化人类生长激素。Par分区在研究人类生长激素的ATPS组成的10%,10%的盯住美元的硫酸铵,4600 100 mMTris缓冲pH 7.2和100毫米氯化钠显示为PEG-rich高亲和力阶段,产量高于98%。该系统是一个一般和操作,阿法拉伐磁盘堆栈离心机,连续加工,它使1500 L的发酵肉汤[57]。 另一种randomcopolymer ATPS组成的环氧乙烷、环氧丙烷(EOPO)和一种蜡质淀粉开发了Geneteach是一个主要的提取步骤纯化重组的hGH[5]。Persson和我的同事发,使用发现双水相萃取技术在最初的恢复具有hGHfroman大肠杆菌匀浆对传统的澄清,因为它使得一步离心只有去除悬浮物而且减少宿主细胞的DNA和蛋白质。此外,在观察——顶端的阶段,其中包括hGH,是supernatants清晰和更稳定的thanclarified[5]。它也表明polymer-rich引起feedstreamsthat阶段随着进一步的downstreamsteps arecompatible新型阴离子交换色谱法等,而澄清supernatants不得不被稀释前进一步的加工。此外的可行性,提出了hGH双水相萃取是一种规模论证的一万个L[5]。 胰岛素

胰岛素是一种多肽激素所产生的b细胞的胰腺胰岛内,是两种不同的组成链连接在一起,通过disulphide债券总共有6000分子量达[59]。它有重要作用在调节血糖水平与发展产生了重要的影响蛋白质和脂类代谢[60]。

PEG-citrate分割的胰岛素ATPSs已被调查在不同pH值和不同的分子的重量(61)盯住美元的汇率机制。在各种境况下检查,显示出很大的亲和力胰岛素的PEG-rich阶段,虽然较高隔断系数进行了观测的高分子量和酸碱值的高于pI(5.6)。最好的性能得到了应用时盯住美元的汇率机制3350 pH中性或碱性[上图)。胰岛素的亲和力的polymer-rich阶段也证实在系统中是由聚乙烯共聚物的oxide-polypropylene块oxide-polyethylene氧化物(PEO-PPO-PEO)和磷酸[62]。胰岛素表现出较强的亲和力共聚物与比例高的环氧乙烷(80%)在酸碱值高于pI。 挑战和今后的发展趋势

它正逐渐被人们认识到一个更广泛的战略方法是必需的全方位地改善工艺性能和容量瓶颈缓解下游生物制药的净化。的主要优点之一的大型双水相萃取是它容易放大一起连续运行的可能性,用传统的液液萃取器,可以克服的一些局限性,色谱分离正面临着。此外,划分了ATPS的优势(我)平衡达到更快,因为蛋白质类划分是一个较小的程度上diffusionally控制和(2)回收蛋白质是促成因为这个系统的运作与较少的理论板比色谱系统[63]。修改的亲和力,对某一特定的蛋白质的phase-forming相功能化的组件,使得增加约束能力和选择性都构成了重大的进展,在这个地区。然而,这是唯一可行的为高附加值产品成本的最终产品不能补偿费用的phase-forming的化学物质。

ATPSs的未来包括进一步发展,符合成本效益的智能聚合物做出反应环境的变化(如酸碱度及温度)是能够改变构象,从而允许双方的恢复感兴趣的生物分子及高分子相反的阶段。另一项突破可能产生于一体的磁性颗粒,从而加快ATPSs相分离技术和提高的过程吞吐量[]。 成功的支持的证据的有效性和双水相萃取作为操作的下游加工具有治疗作用的蛋白质的很有说服力的。的确,双水相萃取法已成功应用是一个主要的净化回收一步蛋白质生物(大肠杆菌)来自不计分,赵(hybridoma与真核表达和转基因植物细胞)系统。主机的情况下,

在这样的展示中,蛋白质不计分倾向于积累的形式,ATPSs涵体后可用于具有机械或同时也破坏和将使不仅除去细胞碎片和主要污染物而且保存蛋白质的活动。然而,两大因素需要进一步解决ATPSs是为了全面认识作为替代下游处理生物制药。一个问题是有关这些系统的最大生产能力,具体地说,他们是否能处理高吞吐量supernatants没收或其是否会受限于溶解度问题。其他的关注与成本有关的这一技术在工业规模。一份详细的费用目前tablished比较程序和ATPS-based过程目前缺乏。作为首要回收装置操作,ATPSs被发现受到更少的成本效益比其他技术(切向流过滤和降水量)[65];然而,一个直接比较之间的离子交换色谱法的过程和一个ATPS透露潜在成本明显降低能实现色谱过程,替代一个ATPS[66]。 出处

主动A.M.A.承认的ncia Cieˆ2007年的葡萄牙人

为科学、技术和教育部高等教育(http://www.mctes.pt/)。“Fundac P.A.J.R.和I.F.F.¸一个˜承认了阿帕拉

ncia e Tecnologia Cieˆ'为博士研究生奖学金BD / 25040/2005和BD / 341/2007,分别。琼娜卡瓦略也承认A.M.A.期刊论文为所有的要求。

附录a .辅助资料

补充数据与此相关联的文章,可以发现,在在线的版本,在往10.1016 / j.tibtech.2009:。

01.004。