微量维生素B9的电化学检测方法与制作流程

权利要求书

1.一种微量维生素B9的电化学检测方法，其特征在于，所述方法如下：

(1)将等体积浓度不同的维生素B9标准样品分别与BR缓冲液混匀，然后分别利用差分脉冲法

检测各维生素B9标准样品在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值，制定标准曲线；

(2)取待测样品与BR缓冲液混匀，然后利用差分脉冲法检测所述待测样品在杯芳烃丙酮饱和

溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得所述待测样品产生的电流信号值，最后根据所述待测样品产生的电流信号值及步骤(1)中制定的标准曲线，获取所述待测样品中维生素B9的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述BR缓冲液的浓度为0.001～2.0mol/L，pH值为1.0～9.0。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述杯芳烃丙酮饱和溶液修

饰的维生素检测仪传感器探头的制备方法如下：取10～50μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.05-1μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述杯芳烃丙酮饱和溶液修

饰的维生素检测仪传感器探头的制备方法如下：取30μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.03μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述维生素检测仪的富集电

沉积电位为-600～300mV，富集电沉积时间0～360s，初始电位为-500～100mV，终止电位为

100～1000mV，扫描速度为10～500mV/s，取样间隔为4～20mV，静止时间10～60s，休止电

位为200～600mV，休止时间为10～60s，量程为0.0001～50mA。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述维生素检测仪的富集电

沉积电位为200mV，富集电沉积时间为240s，初始电位为100mV，终止电位为1000mV，扫描速度为40mV/s，取样间隔为10mV，静止时间为20s，休止电位为300mV，休止时间为

30s，量程为0.0001～50mA。

技术说明书

一种微量维生素B9的电化学检测方法

技术领域

本技术属于维生素分析检测技术领域，具体涉及一种微量维生素B9的电化学检测方法，特别涉及检测血样、药物、食品等样品中的微量维生素B9。

背景技术

维生素B9是机体为维持正常生理功能必须由食物摄取的一类微量有机物，在胎儿生长发育过程发挥重要作用，缺乏B9可能导致严重的中枢神经系统发育障碍，如无脑儿或脊柱膨出或脊柱裂等，并可能出现巨幼红细胞性贫血。

目前，检测人体维生素B9含量的仪器和检测方法各有不同，主要紫外分光光度法、荧光分析法、高效液相色谱法等。其中，高效液相色谱法中的前处理技术繁琐耗时、需要较多有机溶剂，且血清需要量较大。目前应用于维生素检测的仪器有：韩国Younglin公司研制出了维生素分析仪，利用高效液相方法检测食品、药品中的各种维生素；德国拜发R-Biopharm公司利用荧光法生产出检测维生素的仪器。由于高效液相色谱仪、荧光分析仪等仪器价格昂贵，并且需要专门技术人员进行操作，检测方法繁杂，检测时间较长，所以不易推广。

技术内容

有鉴于此，本技术的目的在于提供一种微量维生素B9的电化学检测方法。

为达到上述目的，本技术提供如下技术方案：

1、一种微量维生素B9的电化学检测方法，所述方法如下：

(1)将等体积浓度不同的维生素B9标准样品分别与BR缓冲液混匀，然后分别利用差分脉冲法

检测各维生素B9标准样品在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值，制定标准曲线；

(2)取待测样品与BR缓冲液混匀，然后利用差分脉冲法检测所述待测样品在杯芳烃丙酮饱和

溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得所述待测

样品产生的电流信号值，最后根据所述待测样品产生的电流信号值及步骤(1)中制定的标准曲线，获取所述待测样品中维生素B9的含量。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，所述BR缓冲液的浓度为0.001～2.0mol/L，pH值为1.0～9.0。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，所述杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头的制备方法如下：取10～50μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.05-

1μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，所述杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头的制备方法如下：取30μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.03μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，所述维生素检测仪的富集电沉积电位为-600～300mV，富集电沉积时间0～360s，初始电位为-500～100mV，终止电位为100～1000mV，扫描速度为10～

500mV/s，取样间隔为4～20mV，静止时间10～60s，休止电位为200～600mV，休止时间为10～60s，量程为0.0001～50mA。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，所述维生素检测仪的富集电沉积电位为200mV，富集电沉积时间为240s，初始电位为100mV，终止电位为1000mV，扫描速度为40mV/s，取样间隔为

10mV，静止时间为20s，休止电位为300mV，休止时间为30s，量程为0.0001～50mA。

本技术的有益效果在于：本技术提供了一种微量维生素B9的电化学检测方法，该检测方法中将特定样品处理液与杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头配合使用，再进一步优化检测条件，最终能够更加灵敏、快捷、准确的检测微量维生素B9，且应用范围广，可用于血样、药物、食品等样品中微量维生素B9的快速检测。其中，经过杯芳烃丙酮饱和溶液修饰后的维生素检测仪传感器探头(即经杯芳烃丙酮饱和溶液修饰后的玻碳电极)，能够更加灵敏、准确的检测维生素B9，因为杯芳烃与相应大小的物质特异性结合，能够增加维生素B9检测的灵敏性和准确度；通过优化样本处理液的浓度及pH值，能够降低检测过程中的电流，能够使用较高的灵敏度进行检测，有助于检测更低浓度，从而使准确度更高；所优化的检测条件能够稳定地检测样品，使检测范围更宽，检测浓度更低。该方法简单易操

作，且检测时间较短，无需专门技术人员进行操作，易推广。

本技术的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本技术的实践中得到教导。本技术的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

附图说明

为了使本技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本技术作优选的详细描述，其中：

图1为实施例1中以不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值制定的标准曲线图；

图2为实施例2中以不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值制定的标准曲线图；

图3为实施例3中以不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值制定的标准曲线图；。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本技术的其他优点与功效。本技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本技术的精神下进行各种修饰或改变。

实施例1

检测血样中维生素B9的含量

(1)制作杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头

取30μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.03μm氧化铝粉打磨处理

的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可；

(2)将体积均为80uL浓度分别为5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L、80nmol/L的维生素B9标准样品，分别与1000uL浓度为0.05mol/L，pH值为6.5的BR缓冲液混匀，然后分别利用差

分脉冲法检测各维生素B9标准样品在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值，制定标准曲线，如图1所示，由图1可知，线性回归方程为y＝3.6275x+0.1037，R2＝0.9995，该方法最低检测浓度(终浓度)为5nM/L，检测范围为5-1600000nM/L，准确度为2.68％；其中，维生素检测仪的富集电沉积电位为200mV，富集电沉积时间240s，初始电位为100mV，终止电位为1000mV，扫描速度为40mV/s，取样间隔为10mV，静止时间20s，休止电位为

300mV，休止时间为30s，量程为0.0001～50mA；

(3)取80uL待测血样与1000uL浓度为0.05mol/L，pH值为6.5的BR缓冲液混匀，然后利用差分

脉冲法检测待测血样在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得待测血样产生的电流信号值，最后根据待测血样产生的电流信号值及步骤(2)中制定的标准曲线，获取待测血样中维生素B9的含量为24.56nmol/L；其中，维生素检测仪的富集电沉积电位为200mV，富集电沉积时间240s，初始电位为100mV，终止电位为1000mV，扫描速度为40mV/s，取样间隔为10mV，静止时间20s，休止电位为

300mV，休止时间为30s，量程为0.0001～50mA。

实施例2

检测血样中维生素B9的含量

(1)制作杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头

取10μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经0.05μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可；

(2)将体积均为80uL浓度分别为8nmol/L、16nmol/L、32nmol/L、nmol/L、128nmol/L的维生

素B9标准样品，分别与1000uL浓度为0.1mol/L，pH值为4的BR缓冲液混匀，然后分别利用差

分脉冲法检测各维生素B9标准样品在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值，制定标准曲线，如图2所示，由图2可知，线性回归方程为y＝4.7511x+2.5732，R2＝0.993，该方法最低检测浓度(终浓度)为8nM/L，检测范围为8-16000000nM/L，准确度为3.15％；其中，维生素检测仪的富集电沉积电位为180mV，富集电沉积时间300s，初始电位为-

200mV，终止电位为600mV，扫描速度为30mV/s，取样间隔为20mV，静止时间25s，休止电

位为400mV，休止时间为60s，量程为0.0001～50mA；

(3)取80uL待测血样与1000uL浓度为0.1mol/L，pH值为4的BR缓冲液混匀，然后利用差分脉冲

法检测待测血样在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得待测血样产生的电流信号值，最后根据待测血样产生的电流信号值及步骤(2)中制定的标准曲线，获取待测血样中维生素B9的含量为18.95nmol/L；其中，维生素检测仪的富集电沉积电位为180mV，富集电沉积时间300s，初始电位为-200mV，终止电位为600mV，扫描速度为30mV/s，取样间隔为20mV，静止时间25s，休止电位为400mV，休止时间为60s，量程为0.0001～50mA。

实施例3

检测血样中维生素B9的含量

(1)制作杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头

取50μL杯芳烃丙酮饱和溶液，滴于维生素检测仪传感器探头中经1.0μm氧化铝粉打磨处理的玻碳电极表面，待丙酮完全挥发干燥后即可；

(2)将体积均为80uL浓度分别为6nmol/L、12nmol/L、24nmol/L、48nmol/L、96nmol/L的维生素B9标准样品，分别与1000uL浓度为1.5mol/L，pH值为8的BR缓冲液混匀，然后分别利用差分

脉冲法检测各维生素B9标准样品在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得不同浓度维生素B9标准样品的电流信号值，制定标准曲线，如图3所示，由图3可知，线性回归方程为y＝4.6833x+0.5356，R2＝0.9987，该方法最低检测浓度(终浓度)为6nM/L，检测范围为6-16000000nM/L，准确度为4.28％；其中，

维生素检测仪的富集电沉积电位为-120mV，富集电沉积时间120s，初始电位为50mV，终止电位为800mV，扫描速度为100mV/s，取样间隔为5mV，静止时间45s，休止电位为600mV，休止时间为10s，量程为0.0001～50mA；

(3)取80uL待测血样与1000uL浓度为1.5mol/L，pH值为8的BR缓冲液混匀，然后利用差分脉冲

法检测待测血样在杯芳烃丙酮饱和溶液修饰的维生素检测仪传感器探头上发生氧化还原反应时产生的电流信号，获得待测血样产生的电流信号值，最后根据待测血样产生的电流信号值及步骤(2)中制定的标准曲线，获取待测血样中维生素B9的含量为31.2nmol/L；其中，维生素检测仪的富集电沉积电位为-120mV，富集电沉积时间120s，初始电位为50mV，终止电位为

800mV，扫描速度为100mV/s，取样间隔为5mV，静止时间45s，休止电位为600mV，休止时

间为10s，量程为0.0001～50mA。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本技术的技术方案而非，尽管参照较佳实施例对本技术进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本技术的权利要求范围当中。