http://www.solarbio.com通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用说明货号：RP1100规格：25T/50T/100T保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。产品内容：试剂盒组成M-MLV(200U/ul)5×M-MLVBufferOligo(dT)16(10uM)RNasin(40U/ul)dNTPs(10mM)TaqPolymerase(5U/ul)10×PCRBufferRNase-freeddH2O说明书25次25ul100ul50ul12.5ul50ul12.5ul125ul500ul1份50次50ul200ul100ul25ul100ul25ul250ul1ml1份100次50ul×2400ul200ul50ul200ul50ul500ul1ml×21份产品简介：通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)适用于各种RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ulPCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以http://www.solarbio.comcDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。操作步骤：一、反转录反应1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：1-5ug总RNA或50-500ngmRNA2ulOligo(dT)16或2pmole基因特异性引物补RNase-freeddH2O至14.5ul2、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：4ul5×M-MLVBuffer1uldNTPs0.5ulRNasin1ulM-MLV3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。4、用RNase-freeddH2O将反应体系稀释到50ul，取2-5ul进行PCR反应。二、PCR反应1、按以下各组分配制50ulPCR反应体系：http://www.solarbio.com10×PCRBuffer5uldNTPs1ul上游引物（用户自备10um）1ul下游引物（用户自备10um）1ulRT反应产物2ulTaqPolymerase0.5ulddH2OxulTotalVolume50ul2、混匀后短暂离心，PCR仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。注意事项：1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。相关试剂：R1600DEPC处理水SR0060液相RNase清除剂http://www.solarbio.comR1200总RNA提取试剂盒SR0080RNAsaverRNA长效保存液R10505×RNALoadingBufferRP1200通用RT-PCR试剂盒(AMV)含MgPC2440RandomPC2450OligoT16D102010×DNA上样缓冲液T106050×TAE缓冲液
