第卷年第期水红产学报 月万压卫 五区七 犷仍的先综气述。一一浮鱼类免疫学研究的进展杨先乐中国水产科学研究院长江水产研究所姗叮方毋沈’ ! 瀚。。。孔。万东艺撇,。九倪书,了尤艺尤。鱼类免疫学是从脊椎动物免疫学鱼类微生物学以及鱼类组织学等学科中分划出来的最近二十多年来它发展很快已形成一门新的学科本文力图对该领域的发展现状和趋势作一概要的综述一鱼类免疫学发展简史鱼类免疫学的研究开始于本世纪初六十年代以后才有了较大的发展段它大约经厉了以下四个阶。夕二艺萌芽期本世纪四十年代以前年卫厄粥和首先发现普通丁缪几、坦等能产生凝集抗体由此众多的关于真骨鱼类凝集抗体的报告奥,架王二肋朋汰哟揭开了鱼类免疫学研究的序幕在这一时期人们还对真骨鱼类的胸腺进行了探讨。阴丽“,卜幻发现粘液中存在着某种抗体温度能影响抗体的产生并预计鳗弧声‘‘存在多种血清型沙正疫苗研究热潮四十年代初疖疮病疫苗口服成功吐蛇又掀超了一时的鱼用缓慢期四十年代未至五十年代由于研究垂金的不足和一些磺胺药物抗菌素在鱼病防治上使用成功便刚刚形成的鱼类免疫防洽热潮在这期间又冷落下来鱼类免疫学发展缓慢形成期六十年代至七十年代这是鱼类免疫学发展的黄金时期年学者记匀吸出版了第一本鱼类免疫学尔后丑盯又编著了一本以论述应用免疫学为主珊这时期介绍理论和分子免疫学为辅的鱼类免疫学“,新书研究内容涉及该学科的各个方面鱼类免疫学雏形形成碑年疖疮病疫苗首次在美国获准进行商品化生产为鱼类免疫学的发展树立了一个重要的里程发展期八十年代以后扮年在美国西维几尼亚州里塘吩首次召开了鱼用疫苗和血清制品学会检阅了鱼类生物制品诊断和防洽鱼病的伟大成就年美国和欧洲又成立了数家鱼类生物制品公司鱼用疫苗开始了大规模的商品化生产比 的邪年在巴黎又举行了一次国际性鱼类疫苗接种研讨会对鱼类免疫学的基础理论和应用进行了较全面的总结鱼类免疫学因此迅速发本文承湖北卫生职工医学院姚念句副教授上海水产大学黄琪谈副教授金丽华先生长江水产研究所左文功副研究员审阅谨此致谢收稿年月洲年月汪洲日年月修改展水产学报卷这一时期的特点是借用先进的技术和手段丰富和发展鱼类免疫学理论并使其应用进一步深化二免疫应答的细胞组织和器官及其免疫应答的基本过骨鱼类免疫应答的主要组织和器官有肾特别是前肾脾胸免疫应答的主要组织和器官限消化道的琳巴组织血液和淋巴等的致密器官哪〕的研究皿玩 通过对娃司。。阅艺发现胸腺是最早形成的淋巴组织其次是肾脾形成较晚真骨鱼类的胸腺是由胸腺细胞原始淋巴细胞及其结缔组织形成它的外表有一层被膜其间有一些直径大约微米的小孔作用尚不十分明了可能是抗恤。二原进入胸腺的一个通道胸腺在鱼类免疫应答中的作用还不完全清楚切除胸腺丛甄苗二‘宕砒 !有似乎并不影响硬头蹲的移植排斥甚至还能刺激鲤鱼和硬头鲜的抗体形成〔人认为胸腺主要承担着细胞免疫功能真骨鱼类的前肾有致密的血管网它包括许多造血组织和淋巴乡胞丛以及噬黑色素细胞和淋巴细胞鱼类的脾也跟哺乳动物一样由红髓和白髓组成其间充满椭圆 形的淋巴小结内含大量的淋巴细胞巨噬细胞和噬黑色素细胞。玉甄理 很多事实证明真骨鱼类的前肾和脾与体液免疫有关其巾前肾起着很大的作用成加五了阮均哭。幼真骨鱼类也有发达的淋巴系统蝶鱼川,洲。。。亡川时、拟的淋巴约占整个血液的一。男 此外鱼类的肠道粘膜中也存在着淋巴细胞鱼类淋巴细胞的异质性鱼类参加免疫应答的细胞主要有巨噬细胞和淋巴细胞鱼类淋巴细‘亡胞异质性问题早在七十年代就提出来了“印科学家通过大量的试验现在已经证明了鱼类具有类似哺乳动物的淋巴细胞和淋巴细胞“盯时 响灿坛 !盯 。才 !七鳍司工留最近又应用单克隆抗体技术再一次证明了蛙鳞鱼类斑点叉尾细云乙。‘祝畔姗户耽时。和鲤鱼具有这两种类型的淋巴细胞 邻带。 鱼类免疫应答的基本过程颗粒或可溶性抗原进入鱼体后‘时通过巨噬细胞的吞噬或胞饮作用时成!送至肾和脾吸收积累 !舰如吧 。信息传递给淋巴细胞后使淋巴增殖从而形成体液和细胞免疫目前尚未在鱼类的胸腺中发现巨噬细胞和异体抗原即使胸腺在免疫应答中有一定的作用而且存在着能与抗原相偶联的细胞曲二‘盯而块川 鱼和哺乳动物一样抗原进入机体后有一段潜伏期这时血清中的抗体很少或没有鱼类对病原体的免疫保护力也很低的抗体然后释玫到血液中在适宜条件下抗原刺激一段时间后在鱼类的肾脏和脾中产生相应。。粥纽这时称效应期安德森鱼类的免疫应答从潜伏期到效应期的长短受环境而变化依鱼种而不同二 !哪至反杨先乐等 。免疫原进入鱼体的途径是人们所关注的一个问题争议也较大七邪七认为在浸泡和喷雾免疫中鳃对抗原的吸收起着主要的作用其次是侧线尤其是蛋白质等颗粒性抗原鳃对它的通透性较可溶性抗原大然而。等。容卫卿。胎了 训助 骆等得到的结论却恰恰相反他们认为鱼的后部是抗原吸收的主要场所场还认为皮肤在抗原吸收中也有很大的作用送至脾中(Evely。邻生)在口服免疫中抗原被肠的第二段所吸收经巨噬细胞吞噬后三.非特异性体液因子鱼类的非特异性体液因子在免疫保护中起着一定的作用但目前尚难对它们准确估计因为某些因子的保护作用大小随种类而异;它们的物理性质起动机制以及在免疫应答中的作用方式还知之甚少较常见的非特异性体液因子有:.1补体鱼类的补体系统是由多种蛋白质组成存在于血清中它不同于哺乳动物的补体对热很敏感犷C0分钟即可灭活鱼类补体也存在着补体激活第二通路(Lu甸anenko&h皿k~取:杨先乐鱼类免疫学研究的进展273它的主要作用是导致细胞溶解协助抗体杀灭病原体芝反应性蛋白很多蝶科鱼类具有C反应性蛋白它能使真菌细菌和寄生虫中的糖类和磷酸脂产生沉淀(lo&F卜切反rd与哺乳动物不同的是鱼类的c反应性蛋白是组成血清的成份之l以侣)C反应性蛋白在琼脂双向扩散试验中能产生跟抗体一样的沉淀线心响玩一因而用琼扩检测血清抗体要备加小a.3干扰寮它的产生受温度影o据测定被病毒感染的硬头醉在1扩C时连天才有干扰素产生而15C却只要2天(Do助n留4)溶菌酶它是一种水解酶存在于鱼类的粘液血清和巨噬细胞中鱼类溶菌酶的活性与季节有鱼类干扰素是一种重要的抗病毒感染因子主要由巨噬细胞所分泌关血清中的溶菌酶一般来自嗜中性细胞和单核细胞而粘液中的溶菌酶来源尚不清楚因为分泌粘液的杯状细胞中并不含有溶菌酶天然溶血素溶菌酶能杀死病原微生物使鱼获得保护鱼类血清中存在着一种小分子的蛋白质夭然溶血素它可能是一种酶能溶解ll外源红细胞有人推测它具有杀菌作用但目前尚未证实(Chire—。。司.黔四细胞免疫ht枷i飞,83)1时成邻的在研究疖疮病疫苗时发现鱼类存在着细胞免疫反应他指出该疫苗能加强鱼类的细胞免疫类似T细胞的吞吸细胞在杀菌中起着很大的作用对鱼类细胞免疫的研究还很肤浅盯6;El且。.u改分挤。n飞同种异休移植物排斥(压生甲饥Bdhm毗成业已发现真骨鱼类存在着迟发型超敏反应0r、&Sooer(Batmngor。鑫混合淋巴反应(又til碗.,sm明这都是由细胞介导的因为目前还缺乏细胞免疫被动转移试验的证据巨噬细胞移动抑制(泣恤机娜蛇0)等现象并具有淋巴细胞毒素但不能充分证但有一定的免疫保护力很多学者认为某些免疫鱼未能检测到休液抗体这是细胞免疫作用的结瓶林义浩等(1983)用P且A免疫刺激治疗草鱼后分离出一种特殊的血清蛋白成份6它与细胞免疫功能相联系1。古哪d的免疫鳗鱼后测得每个铭1)用灭活的迟钝爱德华氏菌苗(Ed。,由名....白细胞的吞噬指数为678一16仍而正常鱼只有231并测得血清的调理指数为629证实了鳗鱼具有。o叹鳍&K.(1细胞免疫的功能五.体液免疫1真骨鱼类的免疫球蛋白目前多数人认为真骨鱼类只有一种免疫球蛋白类似于哺乳动物的殆M它由两条重链和两条轻链组成一个单体在血清中通过连接链J四个单体形成一个四聚体〔丧1)的单体址M类型(工l沮它的沉降系数除了195和165外还存在75和6的轻链分子量一般为19000但也存在着22000生000及26000三个异型(Lobb。亡成.动真骨鱼类抗体哭生)鱼类免疫球蛋白的半衰期受温度影响如果有少量抗原持续刺激鱼体期就比实际上长得多(如鲤鱼可达一年以上)(DO介犯nea丘上的免疫球蛋白孤记功种抗体;Cl(1971)发现依氏石斑鱼(而使免疫球蛋白不断合成这样它的半衰哭如)然而也有人认为真骨鱼类存在着两种以存在着一种由址M分化而来失去了u链(197)0发现螂鱼血清中存在着抗原性和电泳图谱各不相同的两云￡而犷a)幽沉降系数为5命名为址N的免疫球蛋白哪夕碗l哪卿￡但是到目前为止尚无任何人证实鱼类的这些免疫球蛋白与哺乳动物的址G或其它已知的址类型是同源的粘液杭体aHr。i飞972;泞eu“algM工鱼类的抗体除了存在于血清组织液中外还存在于肠道皮肤和鳃的粘液中(孤、此h0““才az也只发现类似五eT&G协此的类型(F城c璐1;D。砌n鱼类的粘液抗体血清抗体(而二n&王L‘111曲y时司.七汉计e渺。‘川有人认为它来自于邻1)也有人认为它是粘膜的浆细胞所分泌(残。。u嗡它的来源目前尚有争执(1981)沂3)心bb&Cle功.七Lo滋s一eier‘才al~.(土铭在)提水产学报拐卷表1鱼类的免疫球蛋白与哺乳动物IgM比较ersootween月‘handhucm孙inf19址beTbl1oa项分子结构构抗原决定簇簇分子量沉降系数数重链类型重链分子量量准轻链分子准口man真骨鱼类软r黔鱼类哨乳动物四个单休构成的四聚体体五个单体构成的五聚体1O五个单体构成的五聚体体)5一l叮)870019尽09的弓)妞)〔)0〕(〕0习1919吕类似07泌链类似协链万,协链)尸:心〕灯蜘鱼)〔一〔。(蹄宜)。(一(人0019230入))半衰粼(日)免疫球蛋广自了n含尾(皿g0]8℃)几4〔)5(人))l)(3。。一6的.4一3t)g断鱼)台1977;]7匙吻爵)).万;r60加生一吸万)):〕rson资寒乍来舔乃l能4ai蛇场;Ell从拄L日1几r执等出了鱼类存在着分泌性免疫系统的假说性免疫球蛋白(址S)他们指出鱼类的皮肤和胆汁中存在着一种由局部产生的分泌它们在结构上与血牙青中的免疫球蛋白有较大的区别并且用间接莹光抗体技术从硬头蹲的粘膜浆细胞中检测出了这种免疫球蛋白抗体产生的一般规律(1)与哺乳动物和鸟类相比鱼类抗体形成期较长抗体滴度增高较慢z。。卫1i。冷水性鱼类则更长更慢些(E汪a助。‘毗盯2;呱i秘&D骂。粗山五er哭3;杨先乐等在初次应答巾鱼类抗体持续期较长据测定初次免疫后的草鱼对0注射嗜水产气单胞菌(A群口。洲韶.z尽瓜二。f二名已3);用弧从亦口夕从招)疫苗的河蝉〔的个月后血凝抗体才回到基础水平(E淦a武时哪.。巴了j卫菌疫苗免疫的硬头醇姊周后仍能从血清中检测出相应的抗体()二ndert配幻自人v恤」鱼呼肠孤病毒的中和抗体第80天时仍具较高水平(杨先乐等0巧(1粥的首先报导鲤鱼对牛血清白蛋白具有免疫回忆反应之后已先后证明卿鱼娜鱼p&压ldc功a及n有类似的反应(Tiulnl.人nde粼〕n。。ooi既&Fr皿能1盯。;人功br。‘a乙0二:、eri生;L压mer台腐.盯2;I职0ko次应答要经过较长的记忆时间(而Jrs。,一般来说它有以下特点:¹获得较强的二~&川玛‘,蛙蝉鱼类等也具;;妞a二d岔1邪。。z土980。;a工io次应答与初次应答抗体价的比率一般较哺乳动物低(如tn毓计.he‘川a乙二:鱼类(如硬头蹲)在某些时候二次应答与初次应答的抗体价几乎没有区别(o,nein乒胭p&还1山哪独。)有的)。;D。过Cr哭,这种二次应答抑制现象可能由于鱼类淋巴细胞增殖能力减弱所致(D温度的影响(Do。姗二~妞)免疫记忆还受六.影响免疫应答的因素免疫应答是一种极为复杂的生理现象受很多因素影响影响鱼类免疫应答的近要因索有:.:1抗原方面抗原的性质进入机体的途径以及抗原的剂量对免疫应答有显著影响研究表明鱿蹲鱼类对拢或缄的血蓝蛋白的免疫应答要远远强于牛血清白蛋白之间对绵羊红细胞的应答则介于二者u吮;198幻泣一般病毒和细菌等病原对鱼类都是较强的抗原抗原的使用剂量要适当扮(认\\为以每克鱼休重注射21。吠(空斑形成单位)给子量的V日s灭活疫苗时硬头蹲的成活率可达9。形;K’。。尾杨先乐等(19盯)测得草鱼出血病细胞培养灭活疫苗(8琏疫苗)的有效给予剂量为3一6l于TC工D广期杨先乐:鱼类免疫学研究的进展黔5亡卫jg时‘值得注意的是有的抗原使用剂量过犬会导致鱼类产生免疫耐受(A诚欲i二时以.t成哭2;Lonvane抗原之间还存在着相互竞争或激活作用(Dosla。&oatbrlemag、t蛤1;Tebbi〕斑cuor&人功b功滋u。(1972)首先发现了抗原间的相互竟争现象’二il(1邪11)0.用MSZ浦血)疫苗免疫硬头蹲噬菌体和灭活的杀娃产气单胞菌(过s。”苦az.发现初次免疫后后者能激活硬头蹲产生抗MSZ抗体而再次免疫后却得到了相反的结果仍有争议.K该画:时‘昭)助&e1981下娜七()凡t~n&卫巧er(1974)佐剂对鱼类免疫应答有无影响至今(1977)卫七rek&H盯9)那。二(1981)z82)or及皿t(19几七her(1983叱二(1983)加丘等认为佐剂能使抗原在鱼体内缓慢持续地释放促进抗原的吸收抗体的生成从而能提高免疫效果二on(195.增强巨噬细胞和浆细胞的活性加快。(1而材城时成.(1983)声协饥,34)等却得到了相反的结果,纽)认为在注射免疫中佐剂有增效作用而在浸泡与口服免疫『p效果尚未确定目前生产中应用佐剂的唯一例子是市场出售的疖疮病与弧菌病联苗机体方面4鱼的年龄和体重营养情况生理状态以及性别群体效应等均能影响鱼类免疫此后M习。7。二(19av盯了)率先探讨了硬头蹲的年龄体重与免疫应答的关系.(1981)进行了更深入的研究丛咭时哪阮。n二。,成.成(飞982)认为o探讨了硬头蹲和鲤鱼产生免疫应答的年龄而Jh卿。‘云免疫应答发生与否鱼的体重比年龄更重要n二及k亦4)(198在阐述鱼的生理年龄.(1973)对免疫应答的影响时说幼鱼易于接受免疫原而大鱼则易排除之〕el疫应答(Corl鱼群处于拥济状态下也会影响免疫应答产卵期的亲鱼对外界抗原不产生免刀u七ter。亡以认为这是因为拥挤外激素释放于水中可引起了免疫抑制的缘故环境方面影响免疫应答的主要环境因素有温度季节光周期以及溶解于水中的有机物重金属离子等免疫抑制剂温度是最里要的因素之一本世纪初人们就注意到温度能影响免疫应答但:比较详细的研究是从四十年代末才开始的目前主要的结论有¹生低温能延缓或阻止鱼类免疫应答的发各种鱼类具有不同的免疫临界温度一般来说温水性鱼类的较高冷水性鱼类较低;免疫临界温度还取决于鱼类原来接触的水域(温带/寒带)原来是否接触过同类抗原(玩初。uy时碗.0对于了3)温度影响免疫应答的机制。史七(1948)认为低温会浆细胞释放抗体当温度下降到免疫临界温度n岔七叭iot嘛之下时抗体的滴度会迅速下降这时体液免疫系统则失去了防御疾病的乍甭;而认为只要鱼类在初次接触抗原时有一短暂时间在免疫临界温魔之上(如鲤鱼置于25℃3一4天)那么抗体的形成就不再受温度的影响因为免疫活性细胞的吞噬捕获清除抗原的作用以及抗体的合成和释.放都可在低温下进行»温度不仅能影响体液免疫而且也能影响细胞免疫协劝细胞的成熟和释a放对温度是敏感的(彻t句在趁类生长的适宜温度下.。快抗体滴度越高达到峰位的时间也越短(John、n‘哪0!ion&MUgr田”涅度越高免疫应答越七执能力.免疫学防治目前鱼类九岌仿治的主要内容是研制鱼用疫苗进行人工免疫以增强养殖鱼类对传染性炭病的抵死苗常采用化学灭活鱼用疫苗的研制方法热灭活和紫外线照射灭活的方法减毒疫苗获:的;º利用敏感的细胞系连续得的方法有¹从不敏感的其它鱼类分离出天然的减毒株(皿n。亡配二erga:rd一JorgeIsV减毒株(传代减毒如R。V土娜。从不敏感的织胸系传代减毒如e乱V飞VHSV的巩株(玩儿1ke五么。‘成.。)以上方法获得减毒活疫苗是一个盲目过程机率小费时.。如果用单克隆抗体技术进行筛选可能是一条成功的捷径(Co诅n时嘛目前商品化生产和实验室研究的疫苗有1鱼用疫苗研究现状6种其中病毒病疫苗6种.病疫苗9种寄生虫病疫苗1种(表2)鱼用疫苗(特别是病毒病疫苗)尚还存在免疫效果不够稳定细菌成本较高缺乏合理有效方便的给子途径等问题有待克服水表2T扭b疫苗名称le2Resea产学报13卷鱼用疫苗的研究及应用概况吕offishva。。妞e助handpPli伪t】no主要免疫途径(1)(2)(1)(2).现仅用于实验室针对的病原体体状最初报道者者靠鑫誉胰脏坏死死IrNVVHSVSV盯7)病毒性出血败血症疫苗苗鲤春病病毒疫苗苗传染性造血器官坏死症疫苗斑点叉尾绷病毒毒病疫苗草鱼出血病疫苗有灭活疫苗和Raev‘乳(肛)减毒疫苗与Ve日ter旧nr-萨d16咖(盯)往印(1)(1)(2)(1)(2)实验室免疫效果一般减毒疫苗免疫效果较好但安全性差已被禁用飞Volf衡Q(1062)孟怕。bIHNV〔粗VV了yer盯6)时川.有灭活疫苗与减毒疫苗均仅用于实验室加mb(1盯3)FRV丑dt。口rd时抽抽(1)(1)(2)有组织浆和细胞培养灭活疫苗两种日本高汉效等(1佣0)退钝爱德华氏菌疫苗斑点叉尾细肠道败血症疫苗苗弧菌病疫苗苗红嘴病疫苗苗协犷d。品疫苗应市(1)(2)已有试验性商黝ng击K叩(1981)E.“r撼时口了‘近期内可能形成商品化生生产有商品化疹苗应市有单价双价多价等类型S冶拙d(19韶))Antip。(ID著艺瀚尹感玖乙位口r。&r。a犷倪仍(1)(2)(3)(4)夕d了““76)Y‘7琳蛛勿,似心脚ri(1)(2)(3)(4)有商品化疫苗应市有商品化疫苗应市仅用于实验室(I舌Klont公洲石)日s疖疮病疫苗嗜水产气单胞菌病疫苗s通归ro仍口”在s仍的幼‘加刃面(1)(2)(3)过夕d犷耐协(1)(2)(4)歇h却(19良))。reu昌la柱状曲挠杆菌病病疫苗细菌性肾脏病疫疫苗类结节症疫苗苗多子小瓜虫病疫苗a心云己rr万了既感右c口忑压李犷创书泊初(1)(2)(3)起步国外研究不普遍国内正ce犷如仍丑翻浦仍加t翻们习r材公aZs哪辐价aPa召士洲犷以艺(1)研究刚起步(1朋0)印n己容。乙名c心乙落记a(1)(2)(3)仅用于实验室仅用于实验室K(1)(2)屯。。da(1朋1)I亡从勺。p从沉犷‘sr刃aler.叙乙寸价环s(19胎注射(2)浸泡(8)口月技(4)喷雾.3免疫途径疫苗的给予途径主要有注射口服浸浴和喷雾注射免疫能有效地利用抗原使其均匀地分布在鱼体中获得较高的免疫效果并能利用佐剂的作用提高和延长免疫应答反应对某些疫苗它是唯一有效的给予方式但该方法会因注射操作而使鱼体受伤且需较多的劳动力对较小的.oh都on拍。d&Joh乃吕二成口服时鱼注射也很不方便(E”1,m&及t铭1;A骆3)g廊0免疫尽管存在着免疫效果较差疫苗消耗量大等缺点但因它实施方便不受时间地点和鱼的大小对鱼无损伤仍引起了人们的高度重视等口服免疫成功的报导目前仅有少量的关于弧菌病疫苗疖疮病疫苗h二插入法用灭活的弧菌疫苗免疫红大麻哈鱼(伽coh尹cr为了避免前消化道分泌物对抗原的破坏卿n&A功姐d类结节症疫苗这一发现为(1加助通过肛门,凡a)获得了较好的免疫效果期口杨先乐;鱼类免疫学研究的进展27了服免疫开拓了广阔的前景他们认为若用某种胶囊包被疫苗使其避免胃液或胆汁的破坏那么只需较少的抗原就可获得较理想的免疫效果浸泡和喷雾均作用鱼体外部能导致相同的免疫应答基本属功皿d&卫render(1976)将鱼高渗处理后用牛血清白蛋白浸浴开创了浸泡免疫的先于同一种类型例;接着C犷oy时川用稀释的弧菌疫苗直接浸泡红大麻哈鱼又获得了成功与此同时喷雾。舍。二Go。后来降到。m免疫的方法亦开始研究起初喷雾所用的压力是6翰Z一1吨了也同样有效〔uH&人mend(1盯7)浸泡和喷雾免疫因处理时间短所需疫苗量少使用方便效果较好而成为目前市售疫苗的最主要给予途径.aT七0秒疫苗的吸收是并不增加;高渗对吸收效果不显著;疫苗的吸收量与温度和鱼的大小有关1198幻曾对影响浸泡免疫的因素作过研究卿&玩姗(八.免疫学诊断他发现浸泡时间超过从30年始人们就应用血清学方祛诊断细菌性和病毒性鱼病对鱼病早期诊断起到了很大的作用近十多年来由于人兽医诊断新技术的渗透细菌学病毒学和组织病理学的诊断方法正逐步被快沉淀反应(琼脂扩速准确的血清学诊断技术所取代目前常采用的方法有:血清中和试验凝集反应散免疫对流电泳等)补体参与的反应免疫标记检测方法(免疫荧光技术免疫酶技术法)以及免疫电镜等(表4)放射免疫测定此外花环试验移动抑制试验巨噬细胞吞噬功能试验等体外细胞免疫测定法也曾用来进行鱼类免疫学诊断表苏几种主要的鱼类血清学诊断方法T.ble3血清学诊断技术名称常用类型细胞病变法法灵敏度高特异性强但费时操噬斑减少法作麻烦琼脂扩散对可靠方便特异性强但灵敏度度流免疫电泳低班ainserodi昭sonistofishdisea姗应用范围特点相对血清杭体最灵敏度度低检测量(卜g/ml)血清中和试验验沉淀反应补体结合合1少102s310e各种色类病毒病劝VHS病卫PR弧菌红嘴痴疮病等灵敏度高但存在自然溶血嗜异异性系统干扰等问题10丈护0一1IPN以及疖疮病病等细菌性鱼病病凝集反应直接血凝简单迅速准确但应用有一定接血凝被动动的局限性血凝协同凝集反应O阅疡病卿鱼溃细菌性肾脏病弧菌病疖疮病红嘴病等IHN卫N免疫荧光光;但存在直接接方便迅速已广泛应用荧光抗体法着试剂不稳定特异性差有自发荧光需一定设备等问题间接10。200IpN细菌性肾脏病疖疮病爱德华氏氏病哨水产气单胞菌病等放射免疫测定酶联免疫吸附试验(EL「S入)灵敏度高特异性强迅速一定没备应用不广泛但需需1护1尸IFN等灵敏度高特异性强迅速方便有应用前景,沪1酬CCV弧菌病疖疮病红嘴病爱德华氏菌病等资料来源:Ah此五宜。aKioram(15)l比。,成(1粥5)首先应用单克隆抗体技术鱼类免疫学诊断技术出现了新的飞跃比u.se建立了分泌抗IHNV的杂交瘤细胞系Ml且NV‘Wl接着人还。w。此h。云哪(l铭6)又建立了一株皿d1”n(198句也获得了抗耶尔森氏菌(y群。落她邝戚盯宕杂交瘤细胞皿ti)和杀蛙产气单胞菌的单克隆杭体近几年来.单克隆抗体技术的应用为鱼类免疫学诊新和血清试剂商品化生产创造了条件.此外女(1男5)用DN人分子杂交检测斑点叉尾纸病毒开辟了鱼病诊断的更新前景水产学报13卷九鱼类免疫学发展趋势至今鱼类免疫学的知识还很不系统发展和丰富鱼类免疫学的任务还很艰巨笔者认为鱼类免:疫学今六发展的主要方向是一方面进行基础理论的研究逐步弄清鱼类免疫的基本原理填补空白对、:加强应用研究应用免疫学中的一些异常结果进行解释;另一方l用新发现的退论汇导应用实践通过应用研究丰富免疫学基础理论鱼类的免疫器官(特别是胸腺)和哺乳动物相比有很大的差异它们的确切作用还应更深入的研究;很多试验结果证明鱼类存在着类似哺乳动物的B绍胞和T细胞下一步的主要任务是对这两种细胸进行分离以确认它们与哺乳动物的异同及它们在体液免疫和细胞免疫中的作用;目前公认鱼类的免疫球蛋白只有殆M一种除此之外是否存在着其已类型和亚类;鱼类抗感染的防御机制还有很多疑卢尚需正确地解释鱼类细胞免疫的资料还很贫乏它的机理特点J的关系fr在感染中的作)饱以及与休液免疫之l等问题尚需查清粘液抗体在鱼类免疫中有一定的地位它的产生和作用是今后研究的一个课题;免丧球蛋白能.。;了。。‘川否通过卵黄转移很多试验均未成功(川11。lC哭1)这一现象是否存在xre影响鱼类免疫应答的因素除了温度研究得较多之外其它因素如日照性成熟度步研究.水域环发等尚待进一:4)当前疫苗商品化生产状况与鱼类养殖规模还很不适应其主要困难是¹有些疫苗在大面积使(用时免疫效果欠佳;º成本太高邻分细菌疫苗不能大规模生产;»减毒疫苗还缺乏安全性保证;¼缺乏:简易高效经济的接种途径鱼用疫茵的发展正面临着一种严峻的挑战有人认为开发鱼类疫苗不如u。-生;Plu进行品种改良加强饲养筒理鱼病监测和药物防治他们对校苗发展前景不太乐观(Mlrml〕哭幻要克服疫苗研制中所遇到的困难还有很多荃础工作要做如病原体分子生物学及鱼用疫苗免丧机制的研究探索茹选彼免疫原性减毒变异株的简单方法提夜浸抱与口服免疫效果导鸽年鱼类.r我国省拨款乳。万台币进行鱼类疫益的研究JHxV基因工程疫苗的研究(海博美国奥立岗州立大学梁程娇安己着手进行廿NV和笔者认为。,3)内也开始研究草鱼出血病基因工程疫苗反苗的研究一定会闯过难关展现出关好的前景动鱼类免疫学诊断已经荞示出生命力今后的主要任务是进一步完善和发展仗诊折试剂商W化诊断程序标准化诊断仪器简单化确快速的待点在诊断中不仅能够定性分析而且能够定量分析充分发挥它准。。1朋执)指出鱼类免疫学所研究的对象是十分复杂的各种鱼类的免疫亩答都有着一定的特殊性要获得一个准确的爷案几很不容易的川血(1邪2)也告诫研究者们吕{子定的结果作出鱼类免疫学的一般结i仑是十分轻率的因此对鱼类免疫半进行深入地探讨和研究元艰辛的然而又是非常必要的参安德森考文一22献触芍7张寿山华鼎可译)牲鱼类免疫学农业出版社(京)杨先乐等林义浩等朋6并鱼出血病细炮培养灭活疫苗研究初步报告草鱼出血病免疫氛激防治的研究淡水渔业一5卫五A免疫刺激治疗草鱼的血清蛋白分析淡水渔少卜能陈汇马锡」98尘免疫学基铂陈秀男郭光雄图的:于九人民卫生出版社(京)疫苗在鱼病防治上的应用中国水产(台淹)主n:32一3认威比较免疫学力岛苏九鱼颊0免疫特性鱼病研究劝争21以水C七i加r产学报r七uo七(aB13卷乙仍o时心.tlesoPmen七ofadevln102:1202‘1207.ibe人nte恤responsadyr~reoouconetlbdyPdt宜l拍rost”‘名inbow舀ndonrr2)a‘d助‘g.日On犯加山e峨m七bek1D旧冲.Z。。mnoentandnaturalpleeh,nolysii.J仍栩网叭.C五ine叮k加ot。阳.uor.口”。七(e化仍。夕a介d舰r‘a乙)过加Z留d仍州旧落go玩mi川atanoyboresnphoey‘oodlylmxt卯nsof钾ap加ralbllromrainbow一12:—ni0么rQ日.is加FhDI阳姗.—11一18July1983Plymout瓦Clme.日人hneEd)(Wrain加公心musineb.rdZ仍0ga‘wtrou士(B哪r‘)玩a冬22印.协tlon0Egtved七visurrin卿rVer协9.nIfeotionanddefenseemeh卜Proi咖dn朗ofFishSy-mPosi皿,..Wrg.的1rhylo卯ny01xm,oglobulin.~J。。七‘协ntCler二DuPoe双州宙粗彻了.‘协‘ar几kkerlbCeo.lunooCriJ.H.u山es右notehCVSGrarenah,....以uneo:刃。刃ns人B‘o乙币39一邱3er印阳infisha拍v她wJ尸落细l..rioe.T.eetionofavxrusvx吕vir‘公一eou协rbaenr朋2MolsisofaueSbeur..onaltib记ies.J.口.ro乙吕tn倪l右htl司口a运wir邵几一1(nana)XP众ef巧盯湘2ojB翻,n‘ns,rhabdovisur.rcu‘匆不a忍cgoturenadlnu.etion.IImmunog]Vbonlinso企thetheim.-名“unonog]Oue(刀邸了城诩)Tb犯妇blifpik一场.en七ltumnatsofCroy台人meodom0。以nizationtee伪s幽ueben日a过。p】恤g士o助b豹叩r.人奋ClemQotioinfilt日刀art10nL..0~eandik6mPertatureonfishT11ke耳lW厄v时公lD..一326.oeeererntlaleffeetso!,nyfiymp加yt抽to,nexty11iDffeeells.C郎忍J仍仍哪。乙990eh.niqueAqofscoekslmon(山corh,和a皿.e以考介c孙翻rra解ka)沙instvibi-o0mentandffeerntia七jnoof.NorthHo刀巨ndeyrtebraet.Lymphoeytesestiof七en...ortonEdD(JH)sh.玩inidfi叮PreevD.卜140E6slvlerl—I七ionof玩K恤如lnistna.饥仍创”o王2:157一16.时a忍tvir0入b‘bacterinont6hintestienofeyPrd纽i...fish刀翻Co仍p吕i-.60:eeletie皿tsnofathoemorwildyPtevirus日右几耐.ur日avrina七53.nademoaPrison01Po]yPePtieds邓七b旧515wit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