反相高效液相色谱法测定中药中薯蓣皂苷元

第２１卷第１期　２００２年１月　分析试验室　Ｃｌｍｌｅｓｅ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆＡｎａｌｙｓ　Ｖ０ｌ　２１．Ｎｏ．１　２００２—１　反相高效液相色谱法测定中药中薯蓣皂苷元　杨文远　，熊楚明　（宁夏大学化学科学与工程系，银川７５００２１）　摘要：用反相高效液相色谱法分离并测定了穿山龙、粉革薄、胡芦巴、七叶一枝　花、山药等５种中草药中的著蓣皂苷元。建立了中药中薯蓣皂苷元的波相色谱　分离测定方法。色谱条件：ＯＤＳ柱，甲醇一水（９５＋５）为流动相，紫外检测波长２Ｏ９　ｎｍ　关键词：高效液相色谱法；薯蓣皂苷元；中药　中国分类号：０６５７．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００哪加（２０。２）０１—００７４－０２　薯蓣皂苷元俗称薯蓣皂素，系异螺旋甾烷的衍　生物，是近代制药工业台成各种甾体激素的重要原　料…。我国含薯蓣皂苷的植物资源丰富＿２ｊ，扩大药　源开发势在必行。其含量测定方法有重量法、比色　ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５℃　１．２测定方法　１．２，１标准溶液的配制与线性实验准确称取干　法、库伦滴定法、光密度计法、红外光谱法、薄层扫　描法［３，４　２等。本文用反相高效液相色谱法直接分　离测定了５种中药中的薯蓣皂苷元，获得了满意的　分析结果，具有较好的通用性。　１实验部分　１．１仪器与试剂　燥后的薯蓣皂苷元标准品，用流动相溶解，制备成　含量０．２０、０　６０、１．００、１．４０、１．８０、２．００　ｎ￣ｖ／ｍＬ薯蓣　皂苷元的系列标准溶液。按照所述的色谱条件将　上述系列标准溶液各进样５　ｖＬ，以薯蓣皂苷元的峰　面积Ａ对浓度ｃ（ｍ　ｍＬ）进行回归，褥回归方程Ａ　＝２７４５５．４４　ｃ一５６４．１８，ｒ＝０．９９９６。结果表明在　０，２　ｍｓ／ｍＬ一２．０　ｎ￣ｖ／ｍＬ浓度范围内呈良好线性。　高效液相色谱ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ．６Ａ系统，ＳＰＤ．　６ＡＶ可变波长紫外检测器，ＳＬＣ－６Ａ系统控制器，Ｃ．　Ｒ３Ａ数据处理系统，ｕｖ．２６５紫外．可见分光光度计　（以上为日本岛津公司产品）；ＣＳＦ－１Ａ超声波发生　器（上海超声波仪器厂）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ溶剂过滤系统　（美国密滤膜公司）。　薯蓣皂苷元标准品（美国Ｓｉｇｍａ化学公司）．纯　度为９９．９８％；５种中药样品均由宁夏自治区人民　１，２　２样品溶液的制备样品经干燥、粉碎后准　确称取１　ｇ，置索氏提取器中用６０　ｒＩ１Ｌ　９５％乙醇提　取至馏出液无色　然后将乙醇提取液于旋转蒸发　器中回收溶剂，残渣加２０　ｒＩ１Ｌ　２　ｍｏｌ／Ｌ　ＨＣＩ加热回　流２．５　ｈ　冷却溶液，不必过滤分离，直接用３０　ｒＩ１Ｌ　氯仿分３次回流萃取，每次１５　ｍｉｎ。台并氯仿萃取　液于旋转蒸发器中回收溶剂，残渣用流动相溶解并　定容为１０Ⅱ１Ｌ，制成样品溶液，样品溶液经０．４５　肿有机滤膜过滤后供进样用。　１．２．３样品测定在与标样分析相同的色谱条件　下，将样品溶液进样，每次５　ｇＬ，由Ｃ－Ｒ３Ａ数据处　理系统绘出样品谱图（见图１）。　２结果与讨论　医院药剂科提供，并经宁夏自治区人民医院何富章　药师鉴定。甲醇、９５％乙醇、盐酸、氯仿均为优级　纯或分析纯。　色谱柱：Ｓｈｌｍ－ｐｏｃｋ　ＣＬＣ．０ＤＳ　１５０×６０　１１１１１１，５　，带保护柱。甲醇．水（９５＋５）为流动相，用前以　０．４５肿微孔滤膜过滤，并经超声脱气处理。检测　波长：２０９　ｍｎ；灵敏度：０．０４　ＡＵＦＳ；流速：１．０　２．１样品测定结果　用已知浓度的薯蓣皂苷元标准溶液作标准，以　＊收稿日期：２００１．０４－０５；修订日期：２００１—０６－２７　作者简介：杨文远（１９６４一），男，高级工程师　——７４——　维普资讯 http://www.cqvip.com

第２１卷第１期　分析试验室　Ｖｄ．２１　Ｎｏ．１　２０Ｏ２年１月　ＣｈＪ／￣Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｍｄ：￣ｉｓ　Ｌａｂ　ｗ　２００２—１　外标法进行定量，测定了５种中药中薯蓣皂苷元的　标回收率。　含量，结果见表Ｉ。表中同时列出了每个样品的加　表１样品测定结果殛回收率Ｉｎ＝３）　仙．１　缸０ｆ霜ｒ叩ｋ　ｄｅ岫舢血蜘柚ｄ舶蚰”叮ｙ（Ｈ＝３）　个吸收峰，其ｕｖ　Ａ一为２０９　ｎｍ　确定以２０９　ｎｎｌ为　检测波长，所得样品谱图呈现分离情况良好，薯蓣　皂苷元谱峰附近杂质峰较少，不干扰测定，效果最　好。　本研究建立的薯蓣皂苷元分离、测定的色谱方法不　仅限于中药的分析，也适用于多种野生或栽培植物　中开发薯蓣皂苷含量较高的药用植物的分析　参考文献　０　５　１０　１　５　［１］国家医药管理局中草药情报中心站编．植物药有效　ｔ／ｍｉｎ　成分手册．北京：人民卫生出版社，１９８６．３５８　围１样品（穿山龙）色谱围　：２］南京药学院编．药物化学．北京：人民卫生出版社．　Ｆ　．１　ａ玳蚰曲嚼ｍｍ　０ｆ　ｄｌ帕帅　卿　∞Ｍ　１９７８．５４８　１一薯蓣皂苷元　：３：抄世炎等．中草药有效成分分析法（上册）．北京：人　民卫生出版社，１９８２．１７７　２．２精密度实验　［４：剂玉珍等．中成药，１９９２，１４（１０）：３５　在上述相同色谱条件下，取同一样品（穿山龙）　６份，每份各１　ｇ，平行提取、水解、萃取后每次进样　ＲＰ・Ｉ硼　Ｃ￣ｌｅｇｅｒｍｉＭｔｌ￣ｍ　０ｆ　ｄｉ嘴窖即．ｍ　ｉｎ　ａｌ　船　５　，分别测定各次峰面积Ａ、保留时间　Ｒ，并求其　ｍ。ｌｌｋ．ｍａｌ　ｈｅｒｂｓ　ＹＡＮＧ　Ｗｅｎ．ｙｕａｎ　ａｎｄ　ＸＩＯＮＧ　Ｃｈｕ　平均值和ＲｓＤ，求得Ａ的平均值为４６３７２，ＲｓＤ为　咖（Ｄｅｐ口ｍ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　２．２７％，ｆＢ的平均值为１３，２９，ＲｓＤ为Ｉ．０９％。　Ｎｉｎｇｘｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ　７５∞２１），Ｆｅｎｘｉ　Ｓ￣ｙａｎ　２．３提取方法的筛选和优化　ｓｈｉ，２００２，２１（１）：７４—７５　经多种条件实验筛选和优化。结果表明用　ＡｂｓＩ１　ｔ：Ｄｉａｓｇｅｎｉｎ　ｉｎ　ｆｉｖｅ　Ｃｈｉｒ，ｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｈｅｒｂｓ　９５％乙醇回流提取，２　ｍｏｌ／Ｌ　ＨＣＩ回流水解后直接　（ｄｉｏｓｅｏｔｅａ　ｎｉｐｐｏｎｉｅａ　ｍａｋｉｎｏ，ｄｉｃ￣ｅｏｒｅａ　ｈｙｐｏｇｉａｕｃａ　ｐａｌｊ　用氯仿回流萃取的方法，皂苷元产率高，精密度和　ｂｉｎ，ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｅｍｕｎ－ｇｔａｅｅｕｎａ　Ｌ．，ｐａ　８　ｐｏｌｙｐｈｙＵａ　回收率均理想，并使分析过程得以简化。　Ｓｍｉｔｈ．，ｄｉｏｓｃｏｔｅａ　ｏｐｐｏｓｉｔａ　ｔｈｕｎｂ．）ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ａｎｄ　２．４最佳检测波长选择　ｄ￣ｅｎｎｉｎｅｄ　ｂｙ　ＲＰ　ＨＰＬＣ．　Ａｎ　０ＤＳ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　提高分析方法灵敏度，选择最佳吸收波长是关　ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ（９５＋５）ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｕｓｅｄ，ａｎｄ　键。为此，首先测定了薯蓣皂苷元标准品甲醇溶液　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２０９　ｎｍ　的吸收光谱，测得其在１９７　Ｉ１ＩＩｌ一２２３　ｎｒｎ区间有一　Ｋｅｙｗｏｒ￣：ＨＰＬＣ：Ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ；Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｈｅｒｈ　一７５—