第２２卷第２期２０１３年４月中国组织化学与细胞化学杂志ＣＨｌＮＥＳＥＶ０１．２２．Ｎｏ．２ＡＤｒ．２０１３ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹＡＮＤＣＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义鲍正齐肖玉周张长春吴敏李永昊周建生（蚌埠医学院第一附属医院骨科，安徽２３３００３）目的探讨ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７在骨肉瘤中表达及临床意义。方法检测１０８例骨肉瘤石蜡包埋组织中ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平，统计分析其与患者临床病理因素和预后之间的关系。结果骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ的阳性率为６８．５２％，ｐ２７的阳性率为２６．８５％；ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平与骨肉瘤病理分级、软组织浸润、远处转移、Ｅｎｎｅｋｉｎｇ分期及患者整体生存期有关（Ｐ＜ｏ．０５）；ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白阳性组骨肉瘤患者５年存活率显著低于阴性组；而ｐ２７蛋白阳性组患者５年存活率显著高于阴性组（Ｐ＜Ｏ．０５）。Ｃｏｘ多因素分析提示软组织浸润及远处转移状态、病理分级、Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期、ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平是影响骨肉瘤患者预后的危险因素（Ｐ＜ｏ．０５）。结论ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平是判断骨肉瘤患者预后［摘要］的新指标，联合检测ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平对骨肉瘤的进展、预后判断有重要意义。［关键词］骨肉瘤；（中图分类号］细胞周期蛋白Ｅ；ｐ２７；（文献标识码］Ａ转移；预后Ｄ（）Ｉ：１０．３８７０／ｚｇｚｚｈｘ．２０１３．０２．０１６Ｒ７３８．１ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａＢａｏＺｈｅｎｇｑｉ，ＸｉａｏＹｕｚｈｏｕ，Ｚｈａｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ＴｈｅＦｉｒｓｔ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ａｎｄｔｈｅｉｒｃｌｉｎｉｃａｌＣｈａｎｇｃｈｕｎ，ＷｕＭｉｎ，ＬｉＹｏｎｇｈａｏ，ＺｈｏｕＪｉａｎｓｈｅｎｇ＋ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＢｅｎｇｂｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ａｎｈｕｉ２３３００３，Ｃｈｉｎａ）ｌｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｏｆＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎ１０８ｏｒｗｉｔｈｅｘＥｌｉｖｉｓｉｏｎＴＭｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａｓｐｅｃｉｍｅｎｓ．Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈ０１０９ｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｗａｓｓｔａｔｉｓ—ｏｒｔｉｃａｌｌｙａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈＣｈｉ—ｓｑｕａｒｅｔｅｓｔ．Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｔｈｅｅｘ—ｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥ，ｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｈｅｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈＣｏｘｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＩｎｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ，ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｔｅｉｎｓｗｅｒｅｒａｔｅｓｏｆＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏ—ｗａｓｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｓ６８．５２％ａｎｄ２６．８５％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ１ｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｓｕｃｈｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｐａｒｅｎｃｈｙｍａｉｎｆｉｌ—ｔｒａｔｉｏｎ，ｄｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｐａｔｈｏｌｏｇｙｄｅｇｒｅｅ，ａｎｄＥｎｎｅｋｉｎｇｓｔａｇｅｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｆｏｒａ１１）；ｂｕｔａｇｅ，ｇｅｎｄｅｒ，ｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｓｉｔｅ，ｄｉａｍｅｔｅｒａｎｄｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃｔｙｐｅｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥｏｒｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ（Ｐ＜０．０５ｎｏｔｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｐ＞０．０５ｆｏｒａ１１）．ＡｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎＣｙ—ｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅｏｖｅｒａｌｌ５一ｙｅａｒ—ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｈｅＣｙｃｌｉｎＥｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｗａｓｍｕｃｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ，ａｎｄｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅｐ２７ｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５ｆｏｒａ１１）．Ｃｏｘｍｕｌｔｉｆａｃｔｏｒｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｐａｒｅｎｃｈｙｍａｉｎｆｉｌ—ｏｒｔｒａｔｉｏｎ，ｄｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｐａｔｈｏｌｏｇｙｄｅｇｒｅｅ，Ｅｎｎｅｋｉｎｇｓｔａｇｅ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｙｃｌｉｎＥｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ（Ｐ＜Ｏ．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｍａｙｂｅｎｅｗｍａｒｋ—ｅｒｓｆｏｒｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，ａｎｄｉｔｉｓｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｄｅｔｅｃｔＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎ／ｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ；ＣｙｅｌｉｎＥ；ｐ２７；Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ骨肉瘤（Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）是青少年（１０—２５岁）最常见的原发于骨髓内的高恶性肿瘤，又称成骨肉瘤，［收稿日期］２０１２－１１—１０［修回日期］２０１３－０１—１７［基金项目］蚌埠医学院院基金资助（ＢＹ０８６６）［作者简介］鲍正齐，男（１９８１年），汉族，主治医师。＊通讯作者（Ｔｏｗｈｏｍｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｓｈｏｕｌｄｈｅａｄｄｒｅｓｓｅｄ）其病程短而进展快，在临床诊断骨肉瘤的病例中，约８０％已经发生了血道转移［１］。细胞周期蛋白Ｅ（Ｃｙ—ｃｌｉｎＥ）是细胞周期中Ｇ１期和Ｓ期重要调节因子，ｐ２７蛋白是细胞周期中负性因子，两者的表达异常可以引起肿瘤的发生［２。３］。但目前其与骨肉瘤之间的关系尚不清楚，本研究采用免疫组织化学万方数据１６２中国组织化学与细胞化学杂志第２２卷ＥｌｉｖｉｓｉｏｎＴＭ染色法检测１０８例骨肉瘤中ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白的表达水平，并分析其与患者临床病理因素及预后的关系，探讨其在骨肉瘤发生发展及侵袭转移中的作用和临床意义，为骨肉瘤的预后判断提供新的指标。材料和方法１．患者资料收集蚌埠医学院第一附属医院临床病理科２００３年６月到２００７年６月存档石蜡包埋经典型骨肉瘤组织１０８例。所有患者在接受广泛或根治性切除术前均未接受放疗、化疗及免疫治疗，且具有完整的临床、病理及随访资料，在实施过程中得到患者及人体试验伦理道德委员会（蚌埠医学院）同意。病程１—４个月，平均２．５２±０．１５个月，其中男性６７例，女性４１例；年龄６—７５岁，平均２３．０５±３．２５岁，其中＜２３岁５５例，≥２３岁５３例；低度恶性（Ｇ１）２６例、高度恶性（Ｇ２）８２例；有软组织浸润５１例、无浸润５７例；有远处转移（包括肺转移）４９例、无远处转移５９例；肿瘤部位：膝关节附近５８例（股骨下端３４例、胫骨上端２４例），颌骨３２例（上颌骨２２例、下颌骨１０例），其他部位１８例（肱骨上端９例，腓骨３例，锁骨３例，胸骨３例）；组织分型：成骨细胞型５５例，成纤维细胞型２７例，成软骨细胞型２６例；按Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期：Ｉ期２３例，Ⅱ期４０例，Ⅲ期４５例。２．试剂和方法鼠抗人单克隆抗体ＣｙｃｌｉｎＥ（ＳＣ一５６３１０）购自美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，浓度为１：１００；即用型鼠抗人单克隆抗体ｐ２７购自北京中杉金桥公司，ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照。采用免疫组织化学Ｅｌｉｖｉ—ｓｉｏｎＴＭ染色法，每例连续切片数张４ｔ＊ｍ厚，烤干，置于二甲苯溶液及不同浓度的乙醇中脱蜡至水洗。免疫组化染色操作步骤按试剂盒说明书进行，ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白主要表达于骨肉瘤和骨软骨瘤细胞的细胞核。其结果按照双侧评分标准检测①每张切片随机观察１０个高倍视野，每个视野计数２００个细胞；②阳性细胞＜１０％为０分，１０一５０为１分，５１－７５为２分，＞７５为３分；③细胞不着色０分，浅黄色１分，黄色２分，棕褐色３分；④两者分数相乘０～１分为阴性，≥２分为阳性，所有切片均由２位资深病理医师读片评定。３．随访所选病例随访至患者死亡或截止２０１２年１０万方数据月，随访时间为３—８４个月，自首发症状至患者死亡之间的时间定义为总体存活时间（Ｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅ，ＯＳ），其有７人失访。４．统计学分析采用ＳＰＳＳｌ９．０统计软件进行数据分析。Ｃｙ—ｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白的表达水平与骨肉瘤患者临床病理因素之间的关系采用卡方检验；ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白阳性与阴性表达组患者５年生存率之间的差异采用Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ和Ｌｏｇ—ｒａｎｋ法比较；ＣｙｃｌｉｎＥ，ｐ２７及临床病理因素与患者预后之间的关系采用Ｃｏｘ多因素分析，Ｐ＜ｏ．０５为差异有统计学意义。结果１．ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白表达水平与骨肉瘤患者临床病理因素之间的关系ＣｙｃｌｉｎＥ主要表达于骨肉瘤瘤细胞胞核（图１Ａ），呈棕褐色颗粒样物质。ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白在１０８例骨肉瘤组织中７４例阳性表达，其阳性率为６８．５２％（７４／１０８）。ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白的表达水平与骨肉瘤的病为８６．５９％（７１／８２）；软组织浸润组阳性率为９０．２０％（４６／５１），未浸润组为４９。１２％（２８／５７）；远处转移组阳为７５％（３０／４０），１ＩＩ期为９３．３３％（４２／４５），组间比较２．ｐ２７蛋白与骨肉瘤患者临床病理因素和Ｃｙ—ｃｌｉｎＥ蛋白之间的关系ｐ２７主要表达于骨肉瘤瘤细胞胞核（图１Ｂ），呈棕与性别、年龄、部位，肿瘤直径和组织学类型无明显（２５／５７）；远处转移组阳性率为２．０４％（ｉ／４９），未转移组（１／４５），组间比较差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ。００１）（见表理分级、软组织浸润、远处转移和Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期相关（Ｐ＜０．０５），与性别、年龄、部位，肿瘤直径和组织学类型无明显相关性（Ｐ＞０．０５）。ＣｙｅｌｉｎＥ在骨肉瘤病理分级为Ｇ１级者阳性率为１１．５４％（３／２６），Ｇ２级性率为９５．９２％（４７／４９），未转移组为４５．７６％（４７／５９）；在Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期工期阳性率为８．７０％（２／２３），ＩＩ期差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，见表１）。褐色颗粒样物质。ｐ２７蛋白在１０８例骨肉瘤组织中２９例阳性表达，其阳性率为２６．８５％（２９／１０８）。ｐ２７蛋白的表达Ｓ水平与骨肉瘤的病理分级、软组织浸润、远处转移和Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期相关（Ｐ＜０．００１），相关性（Ｐ＞ｏ．０５）。ｐ２７在骨肉瘤病理分级Ｇ１级者阳性率为７６．９２％（２０／２６），Ｇ２级为１０．９８％（９／８２）；软组织浸润组阳性率为７．８４％（４／５１），未浸润组为４３．８６％为４７．４６％（２８／５９）；在Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期Ｉ期阳性率为６５．２２％（１５／２３），１Ｉ期为３２．５％（１３／４０），Ⅲ期为２．２２％第２期１）。鲍正齐等．ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义ＣＩ１６３２６．１３６－３１．６４１），５年存活率为４．０５％（３／７４）；Ｃｙ－Ｓｐｅａｒｍａｎ相关性分析显示在骨肉瘤患者中Ｃｙ—ｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白之间呈负相关，Ｒ＝一０．５７９，Ｐ（０．００１（见表２）。３．生存分析在随访的１０８例骨肉瘤患者总体生存时间（ＯｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｃｌｉｎＥ蛋白阴性组ＯＳ为６３．９８０±２．３９７（９５％ＣＩ５９．２８１—６８．６７８），５年存活率为５５．８８％（１９／３４）；ｐ２７蛋白阳性组患者ＯＳ为６４．６４３±２．６３０（９５％ＣＩ５９．４８７－６９．７９８），５年存活率为６５．５２％（１９／２９），阴性组０Ｓ为３０．５６０±１．５１０（９５％ＣＩ２７．６０１—３３．５１８），５年存活率为３．８０％（３／７９）。组问比较差异均有统计学意义（ＰｄＯ．００１），生存曲线见图２Ａ，２Ｂ。ｔｉｍｅ，ＯＳ）大于等于５年者有２０．３７％（２２／１０８）。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ和Ｌｏｇ鼬ｎｋ分析显示ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白阳性组骨肉瘤患者０Ｓ为２８．８８９±１．４０４（９５％’！，・，．Ｉ：巴％，．●‰●１Ｂ【￡¨—臼¨目③⑤图１骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白的表达（ＥｌｉｖｉｓｉｏｎＴＭ×４００），ｌＡ骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白表达；１Ｂ骨肉瘤组织中ｐ２７蛋白低表达。图２骨肉瘤患者ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白阳性及阴性组表达组总体生存曲线（ｎ一１０８）。２ＡＣｙｃｌｉｎＥ蛋白阳性及阴性组患者总体生存曲线；２Ｂｐ２７蛋白阳性及阴性组患者总体生存曲线。Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｔｉｓｓｕｅ（ＥｌｉｖｉｓｉｏｎＴＭＸ４００）．１Ａ．０ｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｙ—ｃｌｉｎＥｐｒｏｔｅｉｎｉｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｔｉｓｓｕｅ．１Ｂ．Ｌｏｗ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｔｉｓｓｕｅ．Ｆｉｇ．２ＴｈｅｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｃｕｒｖｅｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｉｎＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｏｒｏｒｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ（ｎ一１０８）．２ＡＯＳｓｕｒｖｉｖａｌｖｉｒａｌｃｕｒｖｅｓｃｕｒｖｅｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｉｎＣｙｃｌｉｎＥｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｏｒｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ；２ＢＯＳｓｕｒ—ｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｉｎｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ．万方数据１６４中国组织化学与细胞化学杂志第２２卷表２１０８例骨肉瘤患者中ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７肿瘤部位（膝关节附近组、颌骨部位组与其他部位蛋白之间关系（Ｔ／一１０８）组）、组织类型（骨母细胞型、纤维母细胞型与软骨母Ｔａｂｌｅ２ＴｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆＣｙｅｌｉｎＥａｎｄｐ２７ｐｒｏｔｅｉｎ细胞型）、肿瘤直径（≥５．０ｅｍ组与＜５．０ｃｍ组）、软组ｉｎ１０８ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓ（竹＝１０８）织浸润（浸润组与无浸润组）、远处转移（转移组与无转移）、病理分级（Ｇ１级组与Ｇ２级组）、Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期（工期组Ⅱ期组与Ⅲ期组）、ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７（阴性组与阳性组）等因素引入Ｃｏｘ模型进行多因素预后分析，结果显示ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白表达水平、病理分级、软组织浸润、远处转移及Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期是４．多因素预后分析影响骨肉瘤患者预后的因素（Ｐ＜Ｏ．０５，表３）。将性别（男与女）、年龄（＜２３岁组与≥２３岁组）、万方数据第２期鲍正齐等．ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义１６５表３Ｔａｂｌｅ３ＶａｒｉａｂｌｅＧｅｎｄａｒＡｇｅＡｎａｔｏｍｉｃｌｏｃａｔｉｏｎＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｔｙｐｅＤｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ）ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｅｇｒｅｅＰａｒｅｎｃｈｙｍａｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎＤｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓＥｎｎｅｋｉｎｇｓｔａｇｅＣｙｃｌｉｎＥＤ２７１０８例骨肉瘤患者ＣＯＸ多因素生存分析１０８ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａＳｉｇ．Ｏ．１４３ＭｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｓｕｒｖｉｖａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＢＳＥ０．２４１０．２２７Ｏ．１４６Ｏ．１４３Ｏ．２２５０．４４７Ｏ．４４３０．３９９Ｏ．２４３Ｏ．４１７Ｏ．４４９Ｗａｌｄ２Ｏ１ＯＯ８６６１７５２１３ＯＯ４５１６１ｄｆＥｘｐ（Ｂ）ＵＰ０．７０２Ｏ．９９４１．２１７１．０００１．０４０３．７０６Ｏ．３３６０．３６３０ＯＯＯＯ１ＯＯ１ＯＯｏｏＤｏｗｎ１．１２７１．５５２１．６２１１．３２４１．６１５８．９０８０．８００Ｏ．７９３一Ｏ．３５３一Ｏ．００６０．１９７０．０００Ｏ．０３９１．３１０一１＿０９２—１．０１５０．８０８—１．１２７—１．０６２Ｏ．９８００．１７８０．９９７Ｏ．８６３０．００３０．０１４０．０１１０．００１Ｏ．００７Ｏ．０１８７４６９２１６４８２．２４３Ｏ．３２４Ｏ．３４６３．６０８１．１２７ｌ－５５２６蝎∞叭巧∞弘¨∞蝎够７讨论ｐ２７蛋白与关键的ＣｙｃｌｉｎＥ－ＣＤＫ２复合物紧密结合，使其活性受到抑制，从而使细胞周期停滞在Ｇ１期不细胞周期（ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ）是细胞物质积累和有丝的循环过程，通过各种细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）和相应的细胞周期蛋白依赖性激酶（ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ—ｋｉｎａｓｅ，ＣＤＫｓ）组成的蛋白激酶复合物调节细胞增殖，包括染色体复制和细胞，而肿瘤是细胞增殖紊乱的疾病［４］，研究表明肿瘤发生中ＣｙｃｌｉｎＥ—ＣＤＫ２在Ｇ１／Ｓ期的转折中起着重要作用口］。ＣｙｃｌｉｎＥ基因定位于１９号染色体的ｑ１２到ｑ１３区域，它所编码的蛋白质属于细胞周期蛋白家族，其表达水平的升高始于Ｇ１中期，细胞从Ｇ１期通过点“Ｒ”（Ｐｏｉｎｔｏｆｎｏ能进入Ｓ期，无法进行有丝［１引。本研究结果显示ｐ２７蛋白在骨肉瘤组织中的阳性率为２６．８５％，提示在骨肉瘤组织中ｐ２７蛋白低表达，使其对ＣｙｃｌｉｎＥ—ＣＤＫ２复合物的抑制作用降低，从而逃脱了关键点的监视而进入细胞周期进行增生而导致肿瘤发生，并且随着骨肉瘤病理分级的升高、Ｅｎｎｅｋｉｎｇ临床分期的推迟，ｐ２７蛋白的表达水平逐渐降低；在软组织浸润和远处转移者，其表达水平也明显低于未浸润及转移者。我们推测可能当ｐ２７蛋白表达水平下降时，其阻滞细胞周期作用的减弱或缺失，使细胞出现异常的增殖和分化，促进骨肉瘤的形成及浸润和转移。多因素分析结果显示ＣｙｃｌｉｎＥ及ｐ２７蛋白的表达水平、软组织浸润、远处转移、病理分级和Ｅｎｎｅｋ—ｉｎｇ分期是影响骨肉瘤预后的危险因素（Ｐ＜０．０５）。进一步生存分析结果显示ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白阳性组患者５年存活率４．０５％显著低于ＣｙｃｌｉｎＥ阴性组患者５５．８８％（Ｐ＜０．０５）；而ｐ２７蛋白表达情况则相反，其阳性表达组患者５年存活率６５．５２％显著高于阴性组３．８０％（Ｐ＜０．０５），这和ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白在其他肿瘤中的表达情况及预后表现较为相似［１１１３］。ｒｅｔｕｒｎ）进入Ｓ，在细胞Ｇ１期末的Ｇ１／Ｓ期交界处达高峰，进入Ｓ期后开始下降，到Ｇ２／Ｍ期降为零。研究表明，ＣｙｃｌｉｎＥ在人类的多种肿瘤中表达显著升高，且与肿瘤的病理分型、侵袭与转移及预后密切相关［６。８］。本研究显示在骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白阳性率为６８．５２％，说明在骨肉瘤组织中存在ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白的高表达，此时处于增殖状态的细胞ＣｙｃｌｉｎＥ表达增加，然后激活ＣＤＫｓ，促进细胞进入Ｓ期，使其无限增生而导致肿瘤发生，且骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ表达水平与病理分级、是否发生软组织浸润和远处转移及Ｅｎｎｅｋｉｎｇ临床分期有关，即ＣｙｃｌｉｎＥ阳性表达的骨肉瘤具有更高的病理分级、更容易发生软组织浸润和远处转移及更晚的Ｅｎｎｅｋｉｎｇ临床分期，这种现象和ＣｙｃｌｉｎＥ在其他肿瘤组织的表现较为一致［９］，提示ＣｙｃｌｉｎＥ蛋白高表达可以作为肿瘤预后的标志及治疗的靶点。ｐ２７基因是抑制细胞Ｇｌ期的负因子，定位于人１２号杂色体的１２ｐ１２．０至１２ｐ１３．１交界处。综上所述，在骨肉瘤组织中ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白存在表达差异，可能在ＣｙｃｌｉｎＥ基因激活的同时伴有ｐ２７基因的失活，使得细胞在发育过程中过多的进入细胞周期，导致肿瘤发生乃至浸润转移，使得患者有较差的预后，ＣｙｃｌｉｎＥ和ｐ２７蛋白是骨肉瘤发生发展乃至浸润转移中较为关键事件，可以作为骨肉瘤预后判断的新指标。万方数据１６６中国组织化学与细胞化学杂志第２２卷参考文献［１］刘彤华主编．诊断病理学．人民卫生出版社，第二版，７９８［２］吴红莲，吕杰强．ｐ２７和ＣｙｃｌｉｎＥ在宫颈鳞癌表达及其与临床病理特征关系．肿瘤学杂志，２０１２，１８（５）：３６４—３６７Ｅ３］张志伟，汤国辉，赵强等．ＡＫＴ—ｐ２７Ｋｉｐｌ—ＣｙｃｌｉｎＥ在胃癌组织中的表达及意义．世界华人消化杂志，２０１１，１９（２１）：２２３３－２２４０［４］刘德培主编．医学分子生物学．人民卫生出版社，２０１０年再版，４８４ｒ５］ＬｉＸ，ＴａｎａｋａＫ，ＮａｋａｔａｎｉＦ，ｅｔａ１．ＴｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｃｙｃｌｉｎＥｇｅｎｅｂｙＥＷＳ－Ｆｌｉｌａｎｄａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｙｃ～ｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｎＥｗｉｎｇ’Ｓｆａｍｉｌｙｔｕｍｏｒｃｅｉｌｓ．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，２００５，１１６（３）：３８５—３９４［６］ＭｏｒｏｙＴ，ＧｅｉｓｅｎＣ．ＣｙｃｌｉｎＥ．ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００４，３６（８）：１４２４—１４３９［７］ＰａｙｔｏｎＭ，ＳｃｕｌｌｙＳ，ＣｈｕｎｇＧ，ｅｔａ１．ＤｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｙｃｌｉｎＥ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｐｒｉｍａｒｙｂｒｅａｓｔｔｕｍｏｒｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００２，２１（５５）：８５２９—８５３４［８２ＧｕｔｓｃｈＲ。ＫａｎｄｅｍｉｒＪＤ，ＰｉｅｔｓｃｈＤ，ｅｔａ１．ＣＣ从Ｔ／Ｅｎｈａｎ—ｃｅｒ－ｂｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ｛ｂｅｔａ｝ＩｎｈｉｂｉｔｓＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎＭｏｎｏｃｙｔｉｃＣｅｌｌｓｂｙＡｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅＲｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａＰｒｏｔｅｉｎ／Ｅ２Ｆ／ＣｙｃｌｉｎＥ万方数据ＰａｔｈｗａｙｂｕｔＩｓＮｏｔＤｉｒｅｃｔｌｙＲｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒＭａｃｒｏｐｈａｇｅＭｏｒ—ｐｈｏｌｏｇｙ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１１，２８６：２２７１６—２２７２９［９］ＱｉａｏＸ，ＢｈｕｉｙａＴＡ，ＳｐｉｔｚｅｒＭ，ｅｔａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｈｉｇｈ—ｇｒａｄｅｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｅｓｉｏｎｆｒｏｍａｔｒｏｐｈｙｉｎｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌｗｏｍｅｎｕｓｉｎｇＫｉ一６７，ｃｙｃｌｉｎＥ，ａｎｄｐ１６ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．ＪＬｏｗＧｅｎｉｔＴｒａｃｔＤｉｓ，２００５，９：ｌＯＯ一１０７［１０２ＮｏｕｒｓｅＪ，ＦｉｒｐｏＥ，ＦｌａｎａｇａｎＷＭ，ｅｔａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２一ｍｅｄｉａｔｅｄｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐ２７Ｋｉｐｌｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｐｒｅｖｅｎｔｅｄｂｙｒａｐａｍｙｃｉｎ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９４，３７２：５７０—５７３［１１］ＴｒｏｎｃｏｍｎｅＧ，ＭｉｇｌｉａｃｃｉｏＩ，ＣａｌｅｏＡ，ｅｔａ１．ｐ２７ｋｉｐｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｇｒａｄｉｎｇｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｄｉａｇｎｏｓｅｄｏｎｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅ．ＤｉａｇｎＣｙｔｏｐａｔｈｏｌ，２００４，３０（６）：３７５—３８０［１２］ＨｉｒａｂａｙａｓｈｉＨ，ＯｈｔａＭ，ＴａｎａｋａＨ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｐ２７ｋｉｐｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒｅｓｅｃｔｅｄｎｏｎ—ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓ：ａｎａｌｙｓｉｓｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ１６ＩＮＫ４Ａ，Ｐｒｂ，ａｎｄｐ５３．ＪＳｕｒｇＯｎｃｏｌ，２００２，８１（４）：１７７－１８４［１３］ＢａｒｎｅｓＡ，ＰｉｎｄｅｒＳＥ，ＢｅｌｌＪＡ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ２７ｋｉｐｌｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｎｄｉｔｓｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．ＪＰｈａｔｈ０１．２００３，２０１（３）：４５卜４５９CyclinE和p27蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
鲍正齐， 肖玉周， 张长春， 吴敏， 李永昊， 周建生， Bao Zhengqi， Xiao Yuzhou， ZhangChangchun， Wu Min， Li Yonghao， Zhou Jiansheng蚌埠医学院第一附属医院骨科,安徽,233003
中国组织化学与细胞化学杂志
Chinese Journal of Histochemistry and Cytochemistry2013,22(2)
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