动物学报５４（６）：１００５—１０１３，２００８ Ａｃｔａ Ｚｏｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ 基于线粒体Ｃｙｔ ｂ基因部分序列的中国东方蜜蜂 不同地理种群的系统发育＊ 高鹏飞 赵慧婷 张春香 姜玉锁 山西农业大学动物科技学院，山西太谷０３０８０１ 摘要从线粒体ＤＮＡ水平上对中国境内东方蜜蜂不同地理种群的系统发育进行研究，为保护和合理利用这一 宝贵的蜂种资源提供理论基础。对我国１Ｏ个省市的２１群东方蜜蜂ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔ ｂ基因片段进行了扩增、测序，并 以意大利蜂、卡尼鄂拉蜂、印尼蜂作为外群进行序列分析。采用Ｍｉｎｉｍｕｍ．Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ方法构建系统进化树。 结果显示：扩增片段长度４２９ ｂｐ；在得到的２１条同源序列中，共检测出１３个变异位点，其中转换数为９，颠换 数为４，并且变异位点大都发生在密码子的第三位，无碱基插入或缺失；聚类分析结果显示西方蜜蜂、印尼蜂和 东方蜜蜂各为的蜂种；在中国东方蜜蜂群体中，吉林、海南和云南的东方蜜蜂各为一个的类群，其它 地区的东方蜜蜂为一个类群［动物学报５４（６）：１００５—１０１３，２００８］。 关键词 蜜蜂 东方蜜蜂 遗传多样性 ｍｔＤＮＡ细胞色素ｂ Ｍｉｎｉｍｕｎｌ—Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ Ａｐ／ｓ ｃｅｒａｎａ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｔＤＮＡ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ＧＡＯ Ｐｅｎｇ—Ｆｅｉ，ＺＨＡ０ Ｈｕｉ—Ｔｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈｕｎ—Ｘｉａｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｙｕ—Ｓｕｏ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ ０３０８０１，Ｓｈａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔ《 ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｄａｔｕｍ ｔｏ ｐｒｏｔｅｃｔ ａｎｄ ｒａｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐ ｔｈｅ却 ｃｅｒａｎａ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ，ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ却 ｃｅｒａｎａ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ， ｔｈｅ ｐａｒｔｉａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ｏｆ ２１ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｏｆ却／ｓ ｃｅｒａｎａ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ １０ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ却 ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ ａｎｄ却 ｍｅｔｔｆ￣ｅｒａ ｄｏｗｎｌｏａｄｅｄ ｆｒｏｍ ＧｅｎＢａｎｋ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ｍｉｎｉｍｕｍ—ｓｐａｎｎｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｓｐｅｃｉａｌ ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｎ￣ｈ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗａｓ ４２９ ｂｐ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ２１ ａｎａｌｙｚｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ １３ ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｉｔｅｓ，ｏｆ ｗｈｉｃｈ ９ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ，４ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｖｅｒｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ ｏｒ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔ ｂ ｇｅｎｅ ｏｆ ２１ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｏｕｔｇｒｏｕｐｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ却 ｎｉｇｒｏｃｉｎｅｔａ，却 ｍｅｌｌｆｉｅｒａ ａｎｄ Ａｐ／ｓ ｃｅｒａｎａ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｊｉｌｉｎ，Ｈａｉｎａｎ ａｎｄ Ｙｕｎｎａｎ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ【Ａｃｔａ Ｚｏｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ５４（６）：１００５—１０１３，２００８ｊ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｈｏｎｅｙｂｅｅ，Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｍｔＤＮＡ，Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ，Ｍｉｎｉｍｕｍ－Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ 东方蜜蜂（Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ Ｆ．）广泛分布于亚洲， 从阿富汗到中国，从日本到印尼南部（Ｒｕｔｔｎｅｒ， 种间竞争上处于劣势，加之数十年来自然生态条件 的恶化，我国东方蜜蜂的分布范围不断缩小，部分 １９７８）。我国境内的东方蜜蜂分布于除、内蒙 古北部外的全国各省、自治区，是原有蜂种中分布 地区面临濒危的境地。深入了解我国境内东方蜜蜂 的系统发育关系，对于保护和合理开发利用这一宝 贵的蜂种资源具有十分重要的意义。 业已证明，线粒体ＤＮＡ是研究蜜蜂系统发育 范围最广、经济价值最高的蜂种。然而，自上世纪 初西方蜜蜂（Ａ． ＺＺ ｒａ Ｌ．）引进以来，由于在 ２００８．０６．Ｏ１收稿，２００８．１０—１０接受 ＊山西省留办基金项目（Ｎｏ．２００３０５１），山西省教育厅开发项目（Ｎｏ．２００３３７）资助［Ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｗｅｒｅ ｆｕｎｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｇｒａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｏｆｉｃｅ ｏｆ ｆＳｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２００３０５１）ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２００３３７）］ ＊＊通讯作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ） Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｓ．００１＠１６３．ｅｃｒｕ ⑥２００８动物学报Ａｃｔａ Ｚｏｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ １００６ 动 物 学 报 ５４卷 的重要工具，在西方蜜蜂的遗传多样性和亚群体分 化方面得到了广泛的应用（Ｍｏｒｉｔｚ ｅｔ ａ１．，１９９４； Ｇａｒｎｅｒｙ ｅｔ ａ１．，１９９５；Ｄｅ ｌａ Ｒｔｉａ ｅｔ ａ１．，１９９８；Ｂｏｕｇａ 水平乃至科水平的系统发育信息，因而近年来已被 广泛应用于昆虫的系统学研究。目前己对膜翅目 （Ｃｏｌｌｉｎｓ ａｎｄ Ｇａｒｄｎｅｒ，２００１；Ｐａｒｋｅｒ ａｎｄ Ｋｉｓｓｉｎｇ，２００２； ｅｔ ａ１．，２００５）。研究方法从最初的探测蜜蜂样本的 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉｄｒｏｙｄ，２００４）、直翅目（任竹梅等， ２００２；Ｒｅｎ ｅｔ ａ１．，２００４）、双翅目（Ｋａｓｔａｎｉｓ ｅｔ ａ１．， 整个线粒体基因组的性酶切位点，到ＰＣＲ扩 增线粒体基因组的片段，用性酶切位点或序列 探寻变异。通过对整个线粒体ＤＮＡ的性酶切 ２００３；Ｄｕｓｆｏｕｒ ｅｔ ａ１．，２００４）、鞘翅目（黄菲，２００４； Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｖｏｇｌｅｒ，２００４）、鳞翅目（Ｔｏｒｒｅｓ ｅｔ ａ１．， 分析，首次对东方蜜蜂线粒体ＤＮＡ变异进行的研 究表明，东方蜜蜂分为三种类型：亚洲型（样 ２００１；吴冬霞等，２００７）、同翅目（Ａｉｋｈｉｏｎｂａｒｅ ａｎｄ Ｍａｙｏ，２０００）、半翅目（Ｐｆｅｉｌｅｒ ｅｔ ａ１．，２００６；代金 本来自日本、泰国、马来西亚、婆罗洲和南印度）、 吕宋岛型和安达曼群岛型（Ｓｍｉｔｈ，１９９１）。随后的 研究多集中在线粒体ＤＮＡ ｔＲＮＡ “．ＣＯＩｌ基因区（包 括ｔＲＮＡ 基因部分、非编码区完全序列和ＣＯＩｌ基 因５ 端）。采用１０种性酶对东方蜜蜂的 ｍｔＤＮＡｔＲＮＡＬ￣ｕ＿ＣＯＩｌ基因进行ＲＦＬＰ分析，可将其分 为日本类群，尼泊尔一越南一泰国北、中部类群， 韩国一对马岛类群，中国类群，泰国南部类群 和菲律宾类群（Ｄｅｏｗａｎｉｓｈ ｅｔ ａ１．，１９９６）。采用：｛Ｅ编 码区序列比较，可以将东方蜜蜂分为：亚洲型 （样本来自印度、尼泊尔、北部泰国、中国、 韩国和日本）；Ｓｕｎｄａｌａｎｄ型（样本来自Ｓａｍｕｉ岛、 马来亚半岛、爪哇、巴厘、龙日岛、弗洛勒斯岛和 帝汶岛）；巴拉望型；吕宋一棉兰老岛型（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｈａｇｅｎ，１９９６，１９９９；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａ１．，２０００）。对菲 律宾的三个大岛和米沙鄢群岛巾的４个小岛的东方 蜜蜂线粒体ＤＮＡｔＲＮＡｊ￣＂－ＣＯＩＩ基因的ＰＣＲ产物的限 制性酶切分析和序列比较，共检测到４个单倍型 （Ｃｅｌ、Ｃｅ２、Ｃｅ３和Ｃｅ４），其中Ｃｅｌ出现在棉兰老 岛和米沙鄢群岛，Ｃｅ２限于吕宋岛，Ｃｅ３和Ｃｅ４仅 出现在巴拉望（Ｄｅ ｌａ Ｒ６ａ ｅｔ ａ１．，２０００）。对中国境 内不同地理型东方蜜蜂线粒体ＤＮＡｔＲＮＡ ．ＣＯＩＩ基 因多态性和核ＤＮＡ的ＡＦＬＰ分析，首次从分子水平 上证明了海南东方蜜蜂为东方蜜蜂的一个新亚种 （姜玉锁等，２００７ａ，２００７ｂ）。此外，通过对泰国境 内东方蜜蜂线粒体ＤＮＡ ＣＯｌ—ＣＯＩＩ、ＳＳＨ ｒＲＮＡ、ｌｓｕ ｒＲＮＡ和ＡＴＰａｓｅ６ ＡＴＰａｓｅ８基因的ＰＣＲ产物进行的限 制性酶切分析表明，泰国东方蜜蜂可分为北部、半 岛和Ｓａｍｕｉ岛三个种群（Ｓｉｈａｎｕｎｔａｖｏｎｇ ｅｔ ａ１．，１９９９； Ｓｉｔｔｉｐｒａｎｅｅｄ ｅｔ ａ１．，２００１；Ｓｏｎｇｒａｍ ｅｔ ａ１．，２００６）。 细胞色素ｂ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ６，简称 ６）是线粒 体氧化呼吸链的重要成员，其基因的结构和功能在 ｍｔＤＮＡ的１３个蛋白质编码基因中被了解地最清楚， 且进化速度适中，较短的一个片段就能包含从种下 霞，２００５）、原尾目（Ｓｈａｏ ｅｔ ａ１．，２０００）、蜻蜓目 （Ｓｉｍｍｏｎｓ ａｎｄ Ｗｅｌｔｅｒ，２００１；张大治，２００５）等部分 昆虫类群进行了研究。但有关东方蜜蜂Ｃｙｔ ｂ基因 序列及分子系统学的研究报道尚属空白。 本研究对来自中国境内１０个省市１５个采样点 （见表１）的２１群东方蜜蜂线粒体ＤＮＡ细胞色素ｂ 基因部分编码区进行序列分析，并以意大利蜂 （Ａ．ｍｄｔ￣ｆｅｒａ ｌｉｇｕｓｔｉｃａ）、卡尼鄂拉蜂（Ａ．ｍａｔＶｅｒａ ｃａｒｎｉｃａ）和印尼蜂（Ａｐｉｓ ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ）作外群，构建 分子系统树，以期从分子水平上获得东方蜜蜂种群 问的相互关系，并为其系统发育的研究与利用提供 基础数据。 １材料和方法 １．１材料来源 本试验所用样本采白全国１０个省市地区，共 ２ｌ群东方蜜蜂（２００３．３—２００４．１０），除福建、江西 和北京的样本取自人工饲养的标准蜂箱外，其他均 为传统饲养法饲养的自然蜂群。在每个点分别采３ —５群蜂，每群随机采５０—１００只，放人无水乙醇 （分析醇）中，置一２０￣Ｃ的冰箱保存至ＤＮＡ提取。 １．２基因组ＤＮＡ提取 采用常规的酚一氯仿抽提法，从每群蜂中分别 随机取出１只工蜂个体，取其胸部肌肉，提取每只 个体的基因组ＤＮＡ，采用０．８％的琼脂糖凝胶电泳 检测各模板有无降解；紫外分光光度计检测ＤＮＡ 浓度和纯度，一２０℃保存备用。 １．３ Ｃｙｔ ｂ目的基因片段的ＰＣＲ扩增 参照ＧｅｎＢａｎｋ上公布的东方蜜蜂线粒体ＤＮＡ ｂ的序列（登录号：ＡＦ０５９３４７），用Ｐｆｉｍｅ￣．０ 设计引物，上游引物为：５ 一ＴＧＡＧＧＴＧＣＡＡＣＡＧＴＡ． Ａ Ｉ ＡｃＡＡＡ一３ ；下游弓Ｉ物为：５ 一ＴＧＣ ＩＴＡｃＴＣＡＡＴ． ＴｒＴＡＣＧＧＴＧＣ一３ ，引物由北京奥科生物技术有限公 司合成 ６期 高鹏飞等：基于线粒体ｃｒｔ ｂ基因部分序列的中国东方蜜蜂不同地理种群的系统发育 １００７ 表１用于线粒体分析的蜜蜂样本 Ｔａｂｌｅ １ Ｈｏｎｅｙｂｅｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔ ａｎａｌｙｓｉｓ １．４ ＰＣＲ产物纯化、测序 ＰＣＲ产物电泳割胶回收，用凝胶纯化试剂盒 （上海华申能）进行纯化，将其中２１份样品委托北 京奥科生物技术有限公司采用正反链双向测序，测 海南东蜂 ＨＮＨＫ 海南海口 序仪为ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３７３０型。眦 一 一 一 ｌ耋 脚Ａ．ｃｅｒ￣ｉｚｏ，ｉｎ Ｈａｉｎａｎ Ｈａｉｋｏｕ Ｈａｉｎａｎ 广东东蜂 广东广州 ＧＤＧＺ Ａ．￣ｅｌ＇ａＤ，ａ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ 福建东蜂 福建福卅『 Ａ．Ｃｅｌ＇Ｏ，Ｄ，Ｏ，ｉｎ Ｆｕｊｉａｎ Ｆｕｚｈｏｕ Ｆｕｊｉａｎ 云南东蜂１ 云南西双版纳 Ａ．ｃｅ，０ｎ０ ｉｎ Ｙｕｎｒｌａｒｌ Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ Ｙｕｎｎａｎ 云南东蜂２ 云南保山 Ａ．ｃｅｌ＇ｏ，ｎａ ｉｎ Ｙｕｎｎａｉｌ Ｂａｏｓｈａｎ ＹＬｌｒｌｎａｒｌ 江西东蜂 江西南昌 Ａ．ｃｅｒａｔｚｏ，ｉｎ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｊｉａｎｇｘｉ 四川东蜂 四川宜宾 Ａ．ｃｅｇ＇ｏ，ｎａ ｉｎ Ｓｉｅｈｕａｎ Ｙｉｂｉｎ Ｓｉｃｈｕａｎ 甘肃东蜂 甘肃天水 Ａ．ｃｅｒｏ，ｍ ｉｎ Ｇａｎｓｕ Ｔｉａｎｓｈｕｉ Ｇａｎｓｕ 山西东蜂１ 山西沁水 Ａ．ｃｅｒ￣Ｌ￣ｏ，ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ Ｑｉｎｓｈｕｉ Ｓｈａｎｘｉ 山西东蜂２ 山西沁源 Ａ．ｃｅｌ＇ｏ，Ｉｒｌａ， ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ Ｑｉｎｙｕａｎ Ｓｈａｎｘｉ 山西东蜂３ 山西左权 Ａ．ＣｅＩ＇Ｏ，ＩＺＯ，ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ Ｚｕｏｑｕａｎ Ｓｈａｎｘｉ 北京东蜂 北京房山 Ａ．ｃｅｌ＇ｏ，ｎ￣ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆａｎｇｓｈａｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ 吉林东蜂１ 吉林桦甸 Ａ．ｃｅｔ＇￣１ｉｚａ ｉｎ．１ｉｌｉｎ Ｈｕａｄｉａｎ Ｊｉｌｉｎ 吉林东蜂２ 吉林安图 Ａ．￣ｅｌ＇ａｎｏ，ｉｎ Ｊｉｌｉｎ Ａｎｔｕ Ｊｉｌｉｎ 吉林东蜂３ 吉林辉南 Ａ．ｃｅｒａｎｃｔ ｉｎ Ｊｉｌｉｎ Ｈｕｉｎａｎ Ｊｉｌｉｎ 每一样品的反应总体系为５０肚ｌ：其中模板 ＤＮＡ（５０ ｎｇ／ｔ￣１）１．６ ｌ，１０×ｂｕｆｆｅｒ ５ ｌ（含Ｍｇ２ ）， ｄＮＴＰ（ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＴｒＰ各２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）４ 肚ｌ，上游引物（１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ）１．６ ｔＡ，下游引物（１０ ￣ｍｏｌ／Ｌ）１．６ ｌ，Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（２．５ Ｕ／ｔ－ｄ）０．５ ｌ，灭菌三蒸水３５．７ ｌ。扩增条件为：９５℃预变性 ５ ｒａｉｎ，然后９５℃变性３０ ｓ，５６ ｏＣ复性１ ｒａｉｎ，７２￣Ｃ 延伸１ ｒａｉｎ，３２个循环，最后７２￣Ｃ延伸１０ ｒａｉｎ。扩 增产物采用１．０％琼脂糖凝胶电泳检测。 １．５序列分析 用Ｃｏｎｔｉｇ Ｅｘｐｒｅｓｓ软件对测序结果进行正反链序 列的互补检测，并参考原始序列图进行人工核对、 校正，经过计算机和人工校正后，确定出无误的序 列。校正后的序列保存为Ｆａｓｔａ格式。所有的序列 再一起用ＭＥＧＡ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０软件（Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａ１．， ２００７）中的Ｃｌｕｓｔａｌ 排序，生成供系统发育分析 的矩阵，用ＭＥＧＡ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０软件计算遗传距离， 分析序列的碱基组成、差异百分比及变异位点数。 系统树的构建采用Ｍｉｎｉｍｕｍ—Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ方法， 通过ＴＣＳ软件（Ｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａ１．，２０００）进行聚类分 析。 ２结 果 ２．１ ＰＣＲ扩增结果 ２１群东方蜜蜂的总ＤＮＡ ＰＣＲ产物用１．０％的 琼脂糖凝胶电泳检测，以ＤＬ２０００为分子量标准， 得到了约４００ ｂｐ的扩增产物（包括引物长度），带 型清晰明亮且无杂带，经重复试验后，稳定性良 好，电泳检测结果如图１。 ２．２序列组成与特征分析 测序结果经正反链拼接校对后，２１个东方蜜 蜂的序列长度均为４２９ ｂｐ，无碱基的插入或缺失。 按照采样点不同，向ＮＣＢＩ网站提交序列，序列登 录号为：ＥＦ１８００９０一ＥＦ１８００９５、ＥＦ４６７４３７、ＦＪ２２９４７１ 一 ＦＪ２２９４７３、 ＦＪ２２９４７５、 ＦＪ２２９４７６、 ＦＪ２２９４７８ 一 ＦＪ２２９４８０。拼接后的序列经Ｃ］ｕｓｔａｌ ＩＶ排序，并用 ＭＥＧＡ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０转换格式后，计算各序列的碱基 组成，所得到的２１个东方蜜蜂ｃｙｔ ６基因部分片段 中Ａ、Ｔ、ｃ和Ｇ碱基平均含量分别为３３．０％、 ４４．０％、１３．８％和９．２％，其中Ａ＋Ｔ的含量为 ７７％，明显高于Ｇ＋ｃ含量２３％。就每个氨基酸密 码子来看，碱基组成在不同位点差异较大。第三位 点Ａ＋Ｔ平均含量最高，达９３％，第一位点和第二 位点Ａ＋Ｔ含量差别不大，分别为６９．９％和 ６７．９％，另外，第三位密码子Ｔ碱基使用频率特别 高（５１．５％），而Ｇ碱基使用频率很少（９．２％）， 反应出ｃｙｔ ６基因在密码子的使用上具有偏好性 （表２）。 1008动物学报卷101OOObO0Ob75525●00bp0b0bpOObpppp图1．部分扩增产物的电泳检测结果EIectrOphoresFig1isresultsOfPCRprOductsf}OmpartiaIsanlples表2东方蜜蜂0f6基因部分序列不同密码子位点碱基频完全相同的。广东与吉林桦甸群体的序列差异最9，率(％)Tpa大Nuc，碱基差异数为。整体上看，各地区东方蜜蜂印尼蜂与东方蜜ble2leOtjdeofrequenciesofdifferentcOdonsitesfor碱基差异变化不大同源性较高35，。artiaJ(≯6genefAp括cP，甄阼口蜂平均碱基差异数小(32)49．．与海南蜜蜂碱基差异数最。西方蜜蜂与东方蜜蜂平均碱基差异数52．83，与印尼蜂平均碱基差异数5。23系统发育树的构建选择西方蜜蜂的两个亚种意大利蜂(A∞m．脚Zfi居mz西Ms￡icn)、卡尼鄂拉蜂(．以．脚Zf咖m，ic。)和印尼蜂(46n☆脚inc抛)作为外群与采21个东方蜜蜂咖Tcs部分序列进行多重比对后，，用软件包构建系统发育树，如图3。从聚类图中可以看出一每两个相邻点均代表有一选择西方蜜蜂的两个亚种意大利蜂(Acom．个突变位点产生，，没有突变的种群首先聚到。胱Zz派m妇删ic口)、卡尼鄂拉蜂(．A．榭ZZ咖m，起中间不出现连接东方蜜蜂。、印尼蜂和西方蜜ico)和印尼蜂(An堙rociw、纽)作为外群、序，蜂形成了明显的三大分支大致可构成221、个东方蜜蜂聚类后北京和山西左权的、列登录号分别为M87052EFl84046AFl81609，个聚类簇，江西与所测图2。21条东方蜜蜂序列进行同源比对条东方蜜蜂序列比对中va，结果见13东方蜜蜂组成原始蜂群；广东福建、四川、甘在21共检测到肃、山西沁源和山西沁水的东方蜜蜂构成了第1聚，个变异位点数(30％．riabIesites)，占总位点数的。类簇聚在其中广东及山西沁水的东方蜜蜂又相对；，单碱基变异位点数为个转换()。4个鸭变异位点中包，各形成的分支一云南、海南和吉林的东方蜜蜂，括9nansition，)4个颠换，起，形成了聚类簇，II但海南和吉林的东方。(TransverSion‘，rv在429个碱基序列比对结果中蜜蜂又从中分出形成的分支印尼蜂与所测个，21条东方蜜蜂序列变异位点数为21413讨论15西方蜜蜂两个亚种与所测5东方蜜蜂序列平均变异位点数为21个本试验所得到的东方蜜蜂条伽6f查询西方蜜蜂c'，个地理种群的，21。个东方蜜蜂序列与3，3个外群蜂序列两两问个东方蜜蜂跏，基因扩增序列长度均为29bp通过NcBI碱基差异见表为川表中显示0—216基的全基因序列发现427bp一，这一片段之问+，因片段的碱基差异为301。．9个不等平均碱基差异在c”6全序列中的位置处于855bp，其中，同一地区的两个东方蜜蜂群体的0。是相对靠后的一段序列，。在所有序列中23％，A+T平序列完全相同、，碱基差异数为，另外，福建与四、均含量为明显高于A+77％G+c。为表现出AT含量，甘肃、山西沁源群体间江西与山西左权北G+c含量，与其它科目的昆虫相比71％其京群体间，吉林安图与辉南群体间的碱基序列也是T含量偏高如直翅目山稻蝗为(任竹梅6期高鹏飞等：基于线粒体c如6基因部分序列的中国东方蜜蜂不同地理种群的系统发育1009i■；；；!；：j!ii；!i；i；；；；：；jj一f；；；；；i；；!ii；ii；；；!；i!：；；}．uuu．。．．．．．．。．．。．。．．．．．Ⅲd昌：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：昌：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：＆g譬曼：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：jHj：：EP：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：¨q8：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：'鼍j芦：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：?…毒：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：；：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：■’‘‘。‘．．．．．．．．．．．pq。‘p‘‘■．．．．．．．．．．．．．．．．．．■‘‘’‘’’。‘‘‘‘‘。q．．．．．．．．．．}ii；!!；；；ij!i：；i；!；!；：：；；!；；!；；lj!；ii：i；；!；；!；：；；；《；；；；：；jjjiii；；!jij!；；；；；；：ij；!；!：；iii!；￥ij；；㈡；i；l!；!i；§i：：!!：!：：：：：：!：!：!!j；；j：ii；；；ji；：；i15：；；；；i；i；：!；；!；；；；：j；jjj：：5；!；；；ii；；；；；；!j；!；；；：：fj!；iiij；!；；!；!；i：；：；；：jiij；!；；i；!；；i!；；：；；i；!；；l；；i；；；；；；ii；!；：；：i：i：：；l；j；ii；；；；；；；；；i；；!!；；}i；；：；!；；；ii；iii；!；；!；i；i!jij!；；!；；j!；：!；；i；!ij!l；ij；；；；；：；j；；!；；!ji；ijj}；i；!：；；；；；j；i；!；!；；；：；；lii!；；；i；j!；；：；；!；；ij：；；i；；；；；；；；；；i；；；!；j!；；j!；j；i：；：!j!；；j：!；!；；；；；：：i}!；；；；；；i；；；：；i；i!；；!jjj；；；；!ii；j；j；；；；；!；；；：i；；；ji；ii；：：；i；!；i!j；i；；i；；}；!i；：；；ji；j；；；j；i!；i!；；l；；；j!；!；；!；!；；；j!；：；；；；jjjijj!；；；；i；；!；!；；；；i；：!；!；；；；；；；!；；!i；_；；i；；；!；旺三二三二三三三二墨jjii!；；；；!；!；：j：；；!；j：ji：jl；；；!；；j；；；；；；：；；：；；!；；；；；i；；；ii；；；j!j；；；；；；；；i：：；：：j；；：!；；；：!；；：；；ijji；；；；；；；；；!；!!；；!i；；；；；；i；；!i；；；ij；；；；；；；；；；；ji；liii!；i；i；；i；j!；；：；；!；；!旺三二二二二三三三j；；：I；；；!；；；；i；；i；!j；；j；；!；；：ii；；；；!；；；ii：；：：；!；；；；；!；：l；!!；；；i；；：：!!；；；；；；：；；；旷■__—___—一l；：；ii；；；i；；；；；；；：；；；!；j目；jjjjjj：jjjjjjjjjj叫!jjl；!：；；：；；；；；；j!；i；!；!!；!；i!j!ii；!；j；；；j；；；；；；；!；ii；：；；；：；；i；；；；!；；!ii：；；i：i；i!；!；；!j；；；!!!；i；；；；}：!；!；!；；；ij：：!；!i!；；!：；；i；；；；!iji；；!；；；；；：：；；；；ij；!；；i；；；jj；!；；；；：；；；jj；!；：；i：；；；!；j!j；；：；；!；：iii；；；l：；!；；；；j!；；；；；!；!；；；i；；；iii；i；；；!；!；：；；!；jjj；；i!；!：；；：!!i；；：：；；i!：!：：盯——■■了呵———㈠；5；；：；!；j；：!j；；；：；j!；：ji；；：ji!i!；!；jij!；；；；；；ilj；i；；；!；jii；；ii!；!i；；；；；；；；；；!!；!：；；：；；；j；；；!jj；j；；；：；；；ji；；；；!ji!；；j!；：；；；；!；i；j；!j；!ij；!；；§i；；；；；ij：i!：；!j；ij；；j；；；i；5；；；!；：!；；j；；；：；；；；；；ijjEii；；；：：：i；j；：j!；i；j!；；!l：!；；；；ji!；；!；；i；：；；；；；il；；；；!；i!：!；；；；i：；；；；；!；；i；；；；；；；；；!；；：：：；；!j：ji；；!；；；；：《；j；；i；；!；；i；；：：ijj；；!；j；；；；；；；；；；；；；；j!l!j；jji；；；；；i；i；i!；；；；；；j!；；；：：!!；j!；；!：；i；；!；；；}i；i；；!!；!；；!；!；ji；；；!j；旺：iii：iiiiii!；i；i!■jjj；i!；jii；i；!；i；ji；ij；jjij；；；；；j；j!；；；；!ii；iij!j!；；；i；i!；：j：；l；；；；ji；i；；；；；；j；!；；；；jjij；；；i!；；；；；；i：；；；；；■jjiii；；!ii!iii；jjj睦；；i；ii；iiiiii；ii!■j；；i!；；；；；；；j；!!；!!；i；i!；；；；j；i；!；；；ii；!；；；；：；；；lj：；!；!j：j；；j；；；；j；；：；；il；；；；；；；；：!；：!ii!；j：：；；ji!!：；；ij；!；：；i；；!；!；；；：i6z!；ij；；；i；；i；：；；；；；；；j；；；!l!!：；：；；!；；：；i；：：：!；i!；!l!!；i：i；；j；j；；；；；；；dq；；唾迥昧制藤恤静杠3垂}由懈脚j!!—as∞。笛詈。目j；!ii；；；!；；；；；i；!；i；；jj!i；ij；：!；i；；；i!i；；；；i；；ii盱—罂■■■■『『『_3是了{，息导sⅡ名目IlI厶0d—u]争a蛊：一占舒辞一Id!；!lii!：；：；；ij；；j!；；；：i；j；；i!；；；；；：!；；；；；；；；；!j!；；；；；!i；：；ii；；ji；j；；!；；；j；i：!：!!!!：；i!：；：jjjij!；；；；；i!：；；；；j；；i；；：；；；；j；；!ij；；；!；；i；；j!；；ii!i；；；；：ijjj；i!i!；；；；i；；睦i!；iiiiiii；j；i!!；i!；i；ii；：卫jj!i：；；；i；：；；；：；；；：!!!：：jjjj；；；；；；；；!i；i；：j；ii；ijjj}j：；!；；ii!ji!；ji；ji；!i；ji；；；；i；j!；i；j!ji；；iji；∈E；；；；；；；!i；!；；e!；；；；；；；：：l；i!；；；；；；i；；；；j；!；；；：!；i!；；!；；；；；；；；j；j!!j；；!；；；；；；；：；；；；；；!ij：；!；；!；；：i!；；!；i；!；；；；；i；；!；；；ii!}；；；ii；；；；!；!；；；；!；；；j!；；；；：i!；!j；i；；；§；：i!；：!j15j；；i；；；!!；：i；；；jj；ii；；；l：；!；；；；；；i：；!；：!；!j■；；!；；；j!jij：!j!ii；j!j；：j；；《!j!；：!；i；；!；；j；i；i：：：i!i：：：：：!：!：：i，jji；；：：；；ei!；：；；；!jj!：j；；；；i；；ijjiiji；；iii；j；；；ji；i!；；!jjl；：；；；!：i；；!；；i!；；!；!；：：；；：j；；；；j：；!；；；j；i；!jl；!!；j；i；；；；；；；ji：j!!；；；；!il!i；!i；；!i；；；i!；；；；jj!；；j；；}!；；i：i；!；；；l；；；j；!jij；!；：；；ji：；；!；；；；；；j；；；；}ji；；!；；；jij!；；；；；；ji；!j；j!；jj；!；；；；!；；jii；；；ijfji；j；；；：；5!；i；ij：；；!；!；；盯■—可可可可可可■田!；!ii!ji；；i；；；i!j!j；；j；；；!；l；i；；：j；!j；；：：；；j；：j；；j!}：；：；!j；i：：i!；；i；；；；；；：；。。；：；：：；!；jii!i：i；；：；i；；；!ij!；j：：i；j；：i：；i；!；：；j—i。懿i。羹》。塾N糕黼黼勰；熟l樊鞭鞣酬黼熬l樊㈧鞣戮瞧；㈣l婆茹曾１ＯｌＯ 动 物 学 报 ５４卷 糕咻删郴筐盆 世迎避 譬． ０ 【＿ ∞ 卜＿【 Ｈ ＿【 寸 磊 墨 ２ ｌｆ Ｎ＿【 Ｉｌ ．是譬嚣． Ｊ０等∞∞ ０ ∞ ｎＨ 遗 黑 ＾． ｜ｃｚ．蔷 §警１ ． １ ＩＩ ｌｎ ｌｎ ０ Ｉｎ Ｉｎ ｎ 寸 ．ｚＨ１： ． １Ｉ ＿＿ Ｉ ｎ ０ ｎ ｖ、 寸 ｌｎ 寸 ｎＩｎ 寸 ｎ卜 ｏｏ Ｉ ｌ０ 卜 ｎ １ ０ ｌｎ 卜 ｌｎ ０ ｌｌｎ 卜 Ｉ０ ０ ｌｎ 卜 导 等 ｌ Ｈ －＿ ＿＿ 卜 ０ ｌ０ ＿＿ 卜 、。 ０ １ ０ ０ 一 ＿＿ 一 卜 寸 ０ ｌ ０ ０ ０ 一 一 ＿＿ 卜 寸 ＿＿ ０ ＿＿ ０ ０ ０ ｎ ｎ 葛 辱 尊 ｖ１ １ ０ ．（ＩＨ１ ＝： ＿【．∽色耸 －＿ ０ ．∞ ｘｓ．９Ｉｃ－，１ ０ Ｚｘ∽当０ ． ｔｎ ∽耋．ｓＬｓ。＿ｃＩ‘ｚ１．∞ 葛 导 雩 －ｌ１．ｕ蚕 Ｉ ．一 一 Ｃ＜ｌ ｃ－，Ｉ ｎ ＿＿ Ｉｎ 寸 寸 Ｉｎ ０ ０ ＿＿ ＿＿ ｃ－，Ｉ ｃ－Ｉ， －＿ ｎ ｌｎ 寸 寸 ０ ｎ ｎ ｎ 寸 Ｃ＜ｌ ｌｎ ｎ ０ ＿＿ ０ ０ ０ ０ －一 卜 、。 导 ｃ－，Ｉ ０ ０ ０ ０ －一 卜 寸 ｎ ｎ ｃ－Ｉ， ｎ ｎ ｎ ｎ ｏ。 ｏｏ 导 ｎ 寸 寸 Ｉｎ ｌｎ Ｉｎ 寸 、。 寸 寸 ｏｏ 卜 卜 导 导 ｎ 寸 寸 ．ｎ Ｉｎ Ｉｎ Ｉｎ 寸 寸 寸 ｏｏ 卜 卜 导 导 ２ ＝ ｃ－，Ｉ 兰 宝 昌 ６期 高鹏飞等：基于线粒体ｃｙｔ ｂ基因部分序列的中国东方蜜蜂不同地理种群的系统发育 １０１１ ／ ＼ 图３ Ｍｉｎｉｍｕｍ－Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ方法构建的聚类树 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ Ｍｉｎｉｍｕｍ・Ｓｐａｎｎｉｎｇ Ｎｅｔｗｏｒｋ ｆｒｏｍ Ｔａｂｌｅ ３ ｂｙ ｔｈｅ ＴＣＳ ｓｏｆｔｗａｒｅ 等，２００２），蜻蜓目差翅亚目昆虫为６９．６％ （Ｄｕｓｆｏｕｒ ｅｔ ａ１．，２００４），半翅目椿亚科昆虫为７０％ （代金霞，２００５）。在密码子的不同位点，碱基组成 表现出较大的差异。在所有群体中，密码子第三位 上碱基Ａ、Ｔ的比例明显高于Ｇ，这反映出ｃｙｔ ｂ 基因在遗传密码的使用上存在偏好。 碱基替换是ＤＮＡ序列最重要的进化方式，替 换类型可分为转换（ＴＳ）和颠换（Ｔｖ），ＴＳ／ＴＶ比 值即Ｒ值是序列进化的一个重要参数。在ＤＮＡ进 ＋Ｔ含量有关。 从整体的碱基差异数来看，中国东方蜜蜂各种 群间的碱基变异不大，最大差异数为９，海南、吉 林东方蜜蜂同其它地区的东方蜜蜂差异较大。同一 地域不同群体间的ｃｙｔ ｂ基因序列完全相同，不同 地域间也存在序列完全相同的现象。造成这种现象 的原因可能是由于所研究的这段 ｂ基因序列是 相对保守的，大多数东方蜜蜂种群间没有达到足够 的变异，要想更充分体现出各种群间的相互关系， 需要延长扩增ｃｙｔ ｂ基因的长度或结合选择进化速 度更快的遗传标记来进行研究。 通过ｃｙｔ ｂ基因４２９ ｂｐ序列所构建的聚类图可 化过程中，转换发生的频率要比颠换高的多，这是 由于分歧较近的物种间编码区ＤＮＡ序列较多发生 同义突变的结果。２１条东方蜜蜂 ｂ同源序列 中，共检测出ｌ３个变异位点，其中有９个位点发 生了转换，４个位点发生了颠换，其中转换主要以 Ｃ—Ｔ、Ｔ—Ｃ为主，有２处发生了Ａ／Ｔ颠换，Ｔ／Ｇ 以看出，东方蜜蜂和外群一西方蜜蜂、印尼蜂之间 存在明显的遗传分化，组成了三大分支，其中东方 蜜蜂与印尼蜂的亲缘关系较近，与西方蜜蜂的亲缘 关系相对较远，西方蜜蜂的两个品种——意大利蜂 和Ｃ／Ａ之间的颠换数各为１处，序列中没有发生 Ｇ／Ｃ颠换。从发生变异的位点来看，绝大多数都发 生在密码子第三位，这可能与密码子第三位的高Ａ 与卡尼鄂拉蜂聚在一起，仅发生一处碱基突变（Ｔ一 ３４８一Ｃ）。 ｌＯ１２ 动 物 西方蜜蜂与东方蜜蜂是公认为最具经济价值的 两大蜂种，而印尼蜂在过去被认为是属于东方蜜蜂 集团的，在１９９６年召开的亚洲养蜂研究协会上被 确立为是蜜蜂属里一个新的蜂种（姜玉锁，２０００）。 从本研究中两个蜂种 ｂ基因部分序列的碱基差 异和聚类结果看，印尼蜂与东方蜜蜂之问分歧度较 大，应当分属不同的蜂种。这与通过对生活在苏拉 威西岛上印尼蜂（Ａｐｉｓ ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ）和东方蜜蜂， 以及来自印度尼西亚、菲律宾的东方蜜蜂（非重叠 分布区）的线粒体ＤＮＡ非编码区序列数据和ＡＦＬＰ 分析所得出的结论相一致（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａ１．，２００３），也 与先前通过形态特征（Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ ｅｔ ａ１．，１９９５； Ｄａｍｕｓ ａｎｄ Ｏｔｉｓ．１９９７；Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ，１９９７）和生物学 特性（Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ ａｎｄ Ｏｔｉｓ，１９９６，１９９８）比较所获 得的结论相一致。但与西方蜜蜂比较，印尼蜂与东 方蜜蜂的亲缘关系更近，说明印尼蜂是从东方蜜蜂 分化出来的。 东方蜜蜂不同地理种群之问存在一定的分歧。 聚类关系中，较为突出的是海南和吉林两个种群的 东方蜜蜂，它们都通过较高的突变与其余地区的东 方蜜蜂分离出来。吉林东方蜜蜂属于东南沿海型蜂 种，谭垦等（２００４）通过形态学数据的多变量分 析，认为吉林长白山地区的东方蜜蜂体型上接近韩 国、日本的东方蜜蜂。从序列碱基变异可以看出， 吉林省三个地区的东方蜜蜂与其它地区东方蜜蜂差 异都很高，形成了一个独特的生态型。海南东方蜜 蜂可能是由于长期的海岛隔离使得海南东方蜜蜂形 成了一个较为特殊的类群，这与杨冠煌（１９８６）， 龚一飞等（２０００）通过形态学分析和姜玉锁等 （２００７ａ，ｂ）选用ＡＦＬＰ分子标记技术及线粒体基因 序列标记技术分析所得到的结论相一致。 除吉林和海南东方蜜蜂外，我国学者对云南东 方蜜蜂进行了形态学及分子生物学研究，结果表明 云南东方蜜蜂种群中许多形态性状特征表现出较明 显的地理变异性，指出云南地区是亚洲东方蜜蜂分 布的“交混区”和“分化区”，是亚洲东方蜜蜂从 南到北分布的中间过渡带地域（谭垦，２００１）。有 学者对云南省ｌ７个地（州、市）９２个县１２４个点 的东方蜜蜂进行形态测定及生物学特性观察，认为 云南南部的东方蜜蜂属于印度亚种，而西北部地区 的东方蜜蜂属于亚种（匡邦郁、李有泉， １９９９）。本次研究由于缺乏周边国家及地区的 东方蜜蜂数据作为参考，因此未能证实云南的东方 蜜蜂与其它东方蜜蜂群体之间的区别。目前中华蜜 学 报 ５４卷 蜂还处于封闭饲养状态，各个地方的种群的基因交 流不是很频繁，在本研究中，从山西３个不同地区 所采集的东方蜜蜂样本（左权、沁源和沁水），形 成了不同的生态型，说明中华蜜蜂遗传多样性比较 丰富。而本研究所采集的样本有局限性，没能充分 说明由于地形、气候、海拔等条件对中华蜜蜂的影 响，关于中国东方蜜蜂的遗传多样性评价还有待进 一步研究。 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ） Ａｉｋｈｉｏｎｂａｒｅ ＦＯ，Ｍａｙｏ ＺＢ，２０００．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｒｅｅｎｂｕｇ （Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ：Ａｐｈｉｄｉｄａｅ）ｂｉｏｔｙｐｅｓ．Ｂｉｏｍｏ１．Ｅｎｇ．１６（６）：ｌ９９— ２０５ Ｂｏｕｇａ Ｍ，Ｐａｓｃｈａｌｉｓ Ｃ，Ｈａｒｉｚａｎｉｓ，Ｋｉｌｉａｓ Ｇ，Ａｌａｈｉｏｔｉｓ，２００５．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｃｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｈｏｎｅｙｂｅｅ ｍｅｌｌｆｉｅｒａ （Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ：Ａｐｉｄａｅ）ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｅｅｃｅ ａｎｄ Ｃｙｐｒｕｓ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ—ＲＦＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｍｔＤＮＡ ｓｅｇｍｅｎｔｓ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ３６：３３５— ３４４． Ｃｌｅｍｅｎｔ Ｍ，Ｐｏｓａｄａ Ｄ，Ｃｒａｎｄａｌｌ ＫＡ，２０００．ＴＣＳ：ａ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏｇｒａｍ ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｇｅｎｅ ｇｅｎｅａｌｏｇｉｅｓ．Ｍｏ１．Ｅｃｏ１．９：１６５７—１６６０． Ｃｏｌｌｉｎｓ ＡＭ，Ｇａｒｄｎｅｒ ＬＭ，２００１．Ｐａｒｔｉａｌ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｓｉｘ Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ ｏｆ ｔｈｅ ｅａｓｔｅｒｎ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ．Ｈｅｒｅｄｉｔｙ ９２（６）：５１９— ５２１． Ｄａｉ ＪＸ，２００５．Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍａｔｏｌｏｇｙ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔｓ．Ｓｉｃｈｕａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｌｏｇｙ ２７（２）：６２—６７（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｄａｍｕｓ ＭＳ，Ｏｔｉｓ ＧＷ，１９９７．Ａ ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｐ ｃｅｒａｎａ Ｆ．ａｎｄ Ａｐｉｓ ｎｉｇｒｏｃｉｒｗｔａ Ｓｍｉｔｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ２８： ３０９—３２３． Ｄｅ ｌａ Ｒｆｉａ Ｐ，Ｓｅｒｒａｎｏ Ｊ，ＧａｌｌＯｎ Ｊ，１９９８．Ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｃａｎａｒｙ Ｉｓｌａｎｄｓ ｈｏｎｅｙｂｅｅｓ ｍｅＵ ｒａ．Ｍｏ１．Ｅｃｏ１．７：１５４３— １５４７． Ｄｅ ｌａ Ｒｆｉａ Ｐ，Ｓｉｍｏｎ ＵＥ，Ｔｉｌｄｅ ＡＣ，Ｍｏｒｉｔｚ ＲＦＡ，Ｆｕｃｈｓ Ｓ，２Ｏｏｏ．ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ却 ｓ ｃｅｒａｎａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ．Ｈｅｒｅｄｉｔｙ ８４： １２４—１３０． Ｄｅｏｗａｎｉｓｈ Ｓ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｊ，Ｍａｔｓｕｋａ Ｍ，Ｋｉｍｕｒａ Ｋ，１９９６．ＭｔＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ａｐ／ｓ ｃｅｒａｎａ ｕｓｉｎｇ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎ￣ｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ２７：４０７—４１３． Ｄｕｓｆｏｕｒ Ｌ，Ｌｉｎｔｏｎ ＹＭ，Ｃｏｈｕｅｔ Ａ，Ｈａｒｂａｃｈ ＲＥ，Ｂａｉｍａｉ Ｖ，Ｔｒｕｎｇ ＨＤ， Ｓｅｎｇ ＣＭ，Ｍａｔｕｓｏｐ Ａ，Ｍａｎｇｕｉｎ Ｓ，２００４．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｓｌａｎｄ ａｎｄ ｃｏｎｔｉｎｅｎｔａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ （ＣｅＩｌｉａ） Ｍｎ如ｉｃｕｓ（Ｄｉｐｔｅｒａ：Ｃｕｌｉｃｉｄａｅ），ａ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｍａｌｒａｉａ ｖｅｃｔｏｒ ｔａｘｏｎ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａ．Ｍｅｄ．Ｅｎｔｏｍｏ１．４１（３）：２８７—２９５． Ｇａｒｎｅｒｙ Ｌ，Ｍｏｓｓｈｉｎｅ ＥＨ，Ｏｌｄｒｏｙｄ ＢＰ，Ｃｏｒｎｕｅｔ ＪＭ，１９９５．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｆｉａｌ ＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｒｏｃｃａｎ ａｎｄ Ｓｐａｎｉｓｈ ｈｏｎｅｙ ｂｅｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｍｏ１． Ｅｃｏ１．４：４６５～４７１． Ｇｏｎｇ ＹＦ，Ｚｈａｎｇ ＱＫ，２０００．Ｔａｘｏｎｏｍｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｏｎｅｙｂｅｅ．Ｆｕｚｈｏｕ： Ｆｕｚｈｏｕ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ Ｓ，１９９７．Ａ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｔｗｏ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｃａｖｉｔｙ－ｎｅｓｔｉｎｇ Ｈｏｎｅｙ Ｂｅｅｓ ｏｆ Ｓｕｌａｗｅｓｉ．Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ．Ｐｈ．Ｄ．ｔｈｅｓｉｓ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｕｅｌｐｈ． Ｈａｄｉｓｏｅｓｆｌｏ Ｓ，Ｏｔｉｓ ＧＷ，１９９６．Ｄｒｏｎｅ ｆｌ ｉＪｇｈｔ ｔｉｍｅｓ ｃｏｎｆｉｒｍ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｓｔａｔｕｓ Ａｐ／，ｎｉｇｒｏｃｂｗｔａ Ｓｍｉｔｈ，１８６１ ｔｏ ｂｅ ａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｒｏｍ和 ｃｅｒａｎａ Ｆ．，１７９３，ｉｎ Ｓｕｌａｗｅｓｉ，Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ２７：３６１—３６９． Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ Ｓ，Ｏｔｉｓ ＧＷ，１９９８．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｄｒｏｎｅ ｃａｐｐｉｎｇｓ ｏｆ ａｐ／＊ｅｅｒａｎａ ａｎｄ Ａｔ）ｉｓ ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ．Ｊ．Ａｐｉｃ．Ｒｅｓ．３７：ｌｌ—ｌ５． Ｈａｄｉｓｏｅｓｉｌｏ Ｓ，Ｏｔｉｓ ＧＷ，Ｍｅｉｘｎｅｒ Ｍ，１９９５．Ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃａｖｉｔｙ—ｎｅｓｔｉｎｇ ｈｏｎｅｙ ｂｅｅｓ（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ：Ａｐｉｄａｅ）ｉｎ Ｓｕｌａｗｅｓｉ，ｉｎｄｏｎｅｓｉａ．Ｊ．Ｋａｎｓａｓ Ｅｎｔｏｍｏ１．Ｓｏｃ．６８：３３９～４０７． Ｈｕａｎｇ Ｆ，２００４．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｍｔＤＮＡ ｂ ｏｆ Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌｉｄａｅ．ＭＤ ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｈｕｇｈｅｓ Ｊ，Ｖｏｇｌｅｒ ＡＰ，２００４．Ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ ａｃｏｒｎ ｗｅｅｖｉｌｓ（ｇｅｎｕｓ Ｃｕｒｃｕｌｉｏ）ｆｒｏｍ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｆｉａ ａｎｄ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍ ｏｆ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ｄａｔａ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．３２（２）：６０１—６１５． ６期 高鹏飞等：基于线粒体 ｂ基因部分序列的中国东方蜜蜂不同地理种群的系统发育 １０１３ Ｊｉａｎｇ ＹＳ，２０００ Ａｄｖａｎｃｉｎｇ ｏｆ ｔａｘｌｏｇｙ ｏｆ ｈｏｎｅｙｂｅｅ．Ａｐｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：６—７（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｊｉａｎｇ ＹＳ，Ｌｊｕ ｗｚ，Ｚｈａｎｇ ＣＸ，Ｑｉａｏ ＬＹ，Ｚｈｕ ＷＪ，Ｚｈａｎｇ ＧＸ，Ｇｕｎ ＣＪ， ２ｏｏ７ａ．ＡＥＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ａｒｅａｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．Ａｃｔａ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ５０（２）：１４４—１５２（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｊｉａｎｇ ＹＳ，Ｚｈａｏ ＨＴ，Ｊｉａｎｇ ＪＢ，Ｃａｎ ＧＱ，Ｚｈａｎｇ Ｇｘ，Ｚｈｕ ＷＪ，Ｇｕｎ ＣＪ， ２ｏｏ７ｂ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｍｔＤＮＡ ｔＲＮＡ－（１ｅｕ）一ＣＯＩｌ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ａｒｅａｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．Ｓｃｌｅｎｔｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ ４０（７）：１５３５—１５４２（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｋａｓｔａｎｉｓ Ｐ，Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ Ｅ，Ｇｏｕｌｉｅｌｎｍｓ ＧＮ，Ｔｓａｋａｓ Ｓ，Ｌｏｕｋａｓ Ｍ，２ｏｏ３ Ｍａｃｒｏｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ ｒｇｏｕｐ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｔＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．２８（３）： ５１８—５２８． Ｋｕａｎｇ ＢＹ，Ｌｉ＂／Ｇ，１９９０．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ５（４）：２２４—２２９ （Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） Ｍｏｒｉｔｚ ＲＦＡ，Ｃｏｒｕｕｅｔ ＪＭ，Ｋｒｙｇｅｒ Ｐ，Ｇａｒｎｅｒｙ Ｌ，Ｈｅｐｂｕｒｎ ＨＲ，１９９４． ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａＩ ＤＮＡ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ａ ｉｃａｎ ｈｏｎｅｙｂｅｅｓ（Ａｐｉｓ ｗｅｌｌ 名ｒａ Ｌ．）．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ２５：１６９—１７８． Ｐａｒｋｅｒ ＪＤ，Ｋｉｓｓｉｎｇ ＳＷ，２００２．Ｍｎｉｃｅｕｌａｒ ｅｖｉｄｅｒｉｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｗｏｒｋｅｒｌｅｓｓ ｓｏｃｉａｌ ｐａｒａｓｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔ ｇｅｎｕｓ Ｐｏｇｏｎｏｍｙｒｍｅｘ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．５６（１０）：２０１７—２０２８． Ｐｆｅｔｉｅｒ Ｅ，Ｂｉｔｌｅｒ ＢＧ，Ｒａｍｓｅｙ ＪＭ，Ｐａｌａｃｉｏｓ—Ｃａｒｄｉｅｌ Ｃ，Ｍａｒｋｏｗ ＴＡ，２００６． Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ａｔｏｍａ ｒｕｂｉｄａ ａｎｄ Ｔ． ｒｅｃｕｒｖａ （Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ： Ｒｅｄｕｖｉｉｄａｅ： Ｔｒｉａｔｏｍｉｎａｅ）ｆｒｏｉｎ ｔｈｅ Ｓｏｎｏｒａｎ Ｄｅｓｅｒｔ ｉｎｓｅｃｔ ｖｅｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈａｇａｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｒａｓｉｔｅ Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．４１（１）： ２０９—２２１． Ｒｅｎ Ｚ，Ｍａ Ｅ．Ｇｕｎ Ｙ，Ｚｈｏｎｇ Ｙ，２００４ Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ Ｏｘｙａ （Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ：Ａｅｒｉｄｏｉｄｅａ）ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｒｔｉａｌ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｍｏｌ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．３３（２）：５１６—５２１． Ｒｅｎ ＺＭ，Ｍａ ＥＢ，Ｇｕｎ ＹＰ，２００２．Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｍｏｎｇ Ｏｘｙａ ａｇａｖｉｓａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ Ｃｙｔ ｂ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ａｃｔａ Ｇｅｎｅｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ２９（６）：５０７—５１３（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｒｕｔｔｎｅｒ Ｆ，Ｔａｓｓｅｎｃｏｕｒｔ Ｌ，Ｌｏｕｖｅａｕｘ Ｊ，１９７８ Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃａｌ—ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ０ｆ ｔｈ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ和 ｗｅｌｌ ｒａ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ９（４）：３６３ ３８１． Ｓｈａｏ ＨＧ，Ｚｈａｎｇ ＹＰ，Ｋｅ Ｘ，Ｙｕｅ ＱＹ，Ｙｉｎ ｗＹ，２０００．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌａ ＤＮＡ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉｄａｓｅ ＩＩ ｉｎ Ｃｒｙｐｔｏｐｙｇｕｓ ｎａｎｊｉｅｎｓｉｓ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ ａｐｔｅｒｙｇｏｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｉｎ Ｃｈｉｎａ １２（６）：４５—５２． Ｓｉｍｍｏｎｓ ＲＢ，Ｗｅｈｅｒ ＳＪ，２００１．Ｕｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｅｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ ｉｎ ｉｎｓｅｃｔｓ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ２０（２）：１９６—２ｌＯ． Ｓｉｈａｎｕｎｔａｖｏｎｇ Ｄ，Ｓｉｔｔｉｐｒａｎｅｅｄ Ｓ，Ｋｌｉｎｂｕｎｇａ Ｓ，１９９９．Ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｎｅｙ ｂｅｅ，却ｉｓ ｃｅｒａｎａ，ｉｎ Ｔｈａｉｌａｎｄ．Ｊ．Ａｐｉｃ．Ｒｅｓ．３８：２１ｌ一２ｌ９． Ｓｉｔｔｉｐｒａｎｅｅｄ Ｓ，Ｌａｏａｒｏｏｎ Ｓ，Ｋｌｉｎｂｕｎｇａ Ｓ，Ｗｏｎｇｓｉｒｉ Ｓ，２００１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｎｅｙ ｂｅｅ（Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ）ｉｎ Ｔｈａｉｌａｎｄ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ａ ｌａｒｇｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｌｎｓｅｃｔｅｓ Ｓｏｃｉａｕｘ ４８：２６６—２７２． Ｓｍｉｔｈ ＤＲ，１９９１．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ａｎｄ ｈｏｎｅｙ ｂｅｅ ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ．Ｉｎ： Ｓｍｉｔｈ ＤＲ ｅｄ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ａｐｉｓ．Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ—ｒａｄｏ： Ｗｅｓｔｖｉｅｗ Ｐｒｅｓｓ．１３ｌ一１７６． Ｓｍｉｔｈ ＤＲ Ｈａｇｅｎ ＲＨ．１９９６ Ｔｈｅ ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａＸ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａ Ｊ Ｋａｎｓ．Ｅｎｔｏｍｏ１．Ｓｏｃ．６９： ２４９—３ｌＯ Ｓｍｉｔｈ ＤＲ，Ｈａｇｅｎ ＲＨ，１９９９．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ａｎｄ ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ』４ｐ ｃｅｒａｎａ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ：ｔｅｓｔｉｎｇ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．ｉｎ：Ｈｏｏｐｉｎｇａｒｎｅｒ Ｒ，Ｃｏｎｎｏｒ Ｌ ｅｄ．Ａｐｉｃｕｈｕｒｅ ｆ０ｒ【ｈｅ ２１ ｓｔ Ｃｅｎｔｕｒｙ．Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，ＣＴ：Ｗｉｃｗａｓ Ｐｒｅｓｓ， ６０—６８ Ｓｍｉｔｈ ＤＲ，Ｖｉｌｌａｆｕｅｒｔｅ Ｇ。Ｏｔｉｓ，Ｐａｌｍｅｒ Ｍ，２０００．Ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ａｎｄ Ａ．ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ ｍｔＤＮＡ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ ３ｌ：２６５—２７９． Ｓｍｉｔｈ ＤＲ，Ｐａｔｍｅｔ ＭＲ Ｏｔｉｓ Ｇ，Ｄａｍｕｓ Ｍ，２００３．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ａｎｄ ＡＦＬＰ ｍａｒｋｅｒｓ ｓｕｐｐｏｒｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ａｐ／ｓ ｎｉｇｒｏｃｉｎｃｔａ．Ｉｎｓｅｃｔｅｓ Ｓｏｃ． ５０：】８５一】９０． Ｓｏｎｇｒａｍ Ｏ，Ｓｉｔｔｉｐｒｍｍｅｄ Ｓ，Ｋｌｉｎｂｕｎｇａ Ｓ，２００６．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｎｅｙｂｅｅ（却 ｃｅｒａｎａ）ｉｎ Ｔｈａｉｌａｎｄ．Ｂｉｏｃｈｅｒｏｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４４（６）：２５６—２６９． Ｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｄｕｄｌｅｙ Ｊ，Ｎｅｔ Ｍ，Ｋｕｍａｒ Ｓ，２００７．ＭＥＧＡ４：Ｍｏｌｅｃｕｌｒａ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＭＥＧＡ）ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ １０．１０９３１ｍｏｌｂｅｖ／ｍｓｍ０９２． ＇ｒａｎ Ｋ，２００１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍｔＤＮＡ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｈ．Ｄ Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｔａｎ Ｋ，Ｇｅ ＦＣ，Ｚｈａｏ Ｒ，Ｈｅ ＳＹ，２００４ Ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｏｆ ｃｈａｎｇｂａｉｓｈａｎ Ａ．ｃｅｒａｎａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｅｅ（６）：８—９（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＧＪ，Ｏｉｄｒｏｙｄ ＢＰ，２００４．Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｅｕｓｏｃｉａｌｉｔｙ ｉｎ ｃｏｒｂｉｃｕｌａｔｅ ｂｅｅｓ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．３３ （２）：４５２—４５６． Ｔｏｒｒｅｓ Ｅ，Ｌｅｅｓ ＤＣ，Ｖａｎｅ—Ｗｒｉｇｈｔ ＲＬ，Ｖａｎｅ－Ｗｒｉｇｈｔ，Ｋｒｅｍｅｎ Ｃ，Ｌｅｏｎａｒｄ ＪＡ，Ｗａｙｎｅ ＲＫ，２００１．Ｅｘａｍｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｐｈｙｌｙ ｉｎ ａ ｌａｒｇｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｄａｇａｓｃａｎ ｂｕｔｔｅｒｌｆｉｅｓ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ：Ｓａｔｙｒｉｎａｅ：Ｍｙｃａｌｅｓｉｎａ）ｂａｓｅｄ ０ｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌａ ＤＮＡ ｄａｔａ．Ｍｏ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ．Ｅｖｏ１．２０（３）：４６０— ４７３． Ｗｕ ＤＸ，Ｈａｏ ＪＳ，Ｚｈａ ＧＰ，Ｃｈｅｎ Ｎ，Ｓｕ ＣＹ，Ｐａｎ ＨＣ，Ｚｈａｎｇ ＸＰ，２００７． Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｂｕｔｔｅｒｌｆｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｌｉｍｅｎｉｔｉｎａｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｆｉａｌ ｃｙｔｏｅｈｒｏｍｅ ｂ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｚｏｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２８（１）：１—８（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｙａｎｇ ＧＨ，Ｘｕ ＳＹ，Ｋｕａｎｇ ＢＹ，１９８６．Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ Ｆａｂ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｏｆ ｉｔｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ １（１）：８９—９２（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． Ｚｈａｎｇ ＤＺ，２００５．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｏｍｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ａｎｉｓｏｐｔｒｅａ（Ｏｄｏｎａｔａ）ｂａｓｅｄ ０ｎ Ｃｙｔ ｂ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ＭＤ ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）． 代金霞，２００５．线粒体 ｂ基因与昆虫分子系统学研究．四川动物 ２７（２）：６２—６７． 龚一飞，张其康，２０００．蜜蜂分类与进化．福州：福建科学技术出 版社． 黄菲，２００４．叶甲科昆虫线粒体细胞色素ｂ基因片段分子系统学 研究．陕西师范大学硕士论文． 姜玉锁，２０００．蜜蜂的分类学进展概况．养蜂科技６：６—７． 姜玉锁，刘文忠，张春香，乔丽英，朱文进，张桂贤，郭传甲， 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