２０１３年第８ 肉牛主要细菌性疾病的诊治及疗效评价 胡长敏 程淑芳 彭清洁 陈颖钰 姜鹏 郭爱珍Ｈ １．华中农业大学动物医学院／华中农业大学农业微生物国家重点实验室／ 国家肉牛牦牛产业技术体系疾病控制功能研究室，武汉４３００７０； ２．湖北省畜禽育种中心，武汉４３００７０ 摘要为了解我国肉牛细菌性疾病发生情况，本研究通过出诊和接诊肉牛场病例，采用临床症状观察、病理 解剖检查和病原菌分离鉴定，对多个肉牛场的细菌性疾病进行了确诊。结果表明，肉牛场病例以呼吸道症状为 主，以多种病原混合感染居多，牛支原体为导致肉牛发病的重要病原。 关键词肉牛；细菌性疾病；混合感染；牛支原体；诊治；疗效评价 随着我国肉牛养殖规模的不断壮大，北牛南运、 大豆肉汤（ＴＳＢ）培养基（均按照试剂说明配制）购自 北繁南育日益普遍，肉牛各种疾病也随之而来，如何 ＢＤ公司；类胸膜肺炎菌（ＰＰＬ０，即支原体）肉汤粉、 高效防控肉牛疾病成了养殖业的一大难题［１－引。 酵母粉、琼脂粉等购自ＢＤ公司；ＭＥＭ培养基购自 ２０１２年５月至２０１３年４月，笔者团队接诊了广东、 Ｓｉｇｍａ公司；马血清购自Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；精氨酸购自 江西、山东、吉林、湖北等地２０个肉牛场的病例，对 上海伯奥生物科技有限公司。按照石磊等［１］所用方 采集的病料进行了细菌学检测，结合实验室检测结 法配制支原体液体与固体培养基，但培养基中未加 果作出确诊，同时提出治疗方案，并进行疗效评价。 １ 醋酸铊溶液。 本文分析了１ ａ内肉牛场临床病例的诊治情况，旨 １．３细菌分离培养 在阐明当今肉牛流行的主要细菌性疾病，并为临床 按彭清洁等［３］描述的方法，取小块组织样本，将 牛病的防控提供参考。 其切面在ＴＳＡ平板上进行涂抹、划线，然后将培养 １材料与方法 皿倒置于３７℃恒温箱内培养１２￣２４ ｈ。观察优势 菌落的形态，并取优势菌落转接纯化，革兰氏染色后 １．１病料收集 油镜下观察细菌形态。 从２０１２年５月到２０１３年４月，华中农业大学 １．４病原茵的１６Ｓ ｒＤＮＡ鉴定 动物医学院／国家肉牛牦牛产业技术体系疾病控制 用无菌牙签挑取分离纯化的细菌菌落，放人预 功能研究室接到来自广东、江西、山东、吉林、湖北等 先装有适量灭菌水的无菌离心管，煮沸１０ ｍｉｎ，冰 地２Ｏ个肉牛场的发病报告，笔者团队根据发病情 浴ｌ ｍｉｎ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心３０ Ｓ，取上清作为ＤＮＡ 况、临床症状和剖检病变作了初步诊断，并采集病变 模板。使用１６Ｓ ｒＤＮＡ通用引物及扩增条件进行 最明显的组织作为实验室检测病料。 ＰＣＲ扩增［４］，回收ＰＣＲ产物，与ｐＭＤ一１８Ｔ载体连 １．２培养基 接后送上海生物工程技术服务有限公司测序。获得 胰蛋白胨大豆琼脂（ＴＳＡ）培养基及胰蛋白胨 的测序结果置ＧｅｎＢａｎｋ中进行同源性比对，参照对 收稿日期：２０１３－０６—２４ ．基金项目：现代农业（肉牛／牦牛）产业技术体系专项（ＣＡＲＳ一３８）；农业公益性行业科研专项（２０１００３０６０）；宁夏科学技术厅重大科技专项 （宁夏肉牛呼吸疾病综合症及皮肤病防控技术研究与示范）。 ＊通讯作者 胡长敏，男，博士，副教授。 ．１Ｏ．试验研究 饲料２０１３年第８ 比序列同源性的高低鉴定菌株。 １．５牛支原体的分离鉴定 由表１可知，有呼吸道症状的占６Ｏ ９，６，单纯腹 泻症状的只占５ 。 病牛主要病变集中在胸腔和肺部。轻者可见肺 按石磊等［１］描述的方法，分别将小块肺组织样 ２．２病理变化 本、气管拭子、喉拭子涂于ＰＰＬＯ固体培养基表面， 并将小块组织样本放人到ＰＰＬＯ液体培养基中，均 部尖叶和心叶局部发生“肉变”。严重者肺部与胸腔 置于含５ ９，６的Ｃ０。的细胞培养箱培养。２～３ ｄ后， 有不同程度地粘连，肺表面有大小不等的灰白色干 观察液体培养基的颜色变化，并用光学显微镜观察 酪样坏死灶（有的形成脓包，刺破后有白色的脓汁流 固体培养基上的菌落形态。支原体可使ＰＰＬＯ液 出）；气管、支气管内有乳白色泡沫；胸腔有积液，液 体培养基由红色变为黄色，并且透亮；支原体在 体混浊；心包积液，呈透明黄色。 ＰＰＬＯ固体培养基上菌落应具有“煎蛋样”的典型 ２．３细菌学检测 特征。 对从２０个肉牛场采集的病料进行细菌学检测， 按１．４的方法鉴定１６Ｓ ｒＤＮＡ；按Ｓｕｂｒａｍａｎｉ— 发现在８个感染牛支原体的肉牛场中，混合感染多 ａｍ等［５］描述的ｕｖｒＣ基因ＰＣＲ方法鉴别牛支原体 杀性巴氏杆菌Ａ型的有１个，混合感染溶血曼氏杆 与无乳支原体。 １．６多杀性巴氏杆菌的ＰＣＲ分型 根据肖淦文等［４］报道的方法，用特异性的ＰＣＲ 菌的有３个，混合感染大肠杆菌和志贺氏菌的有１ 个。具体细菌学检测结果如表２所示。 表２病牛细菌学检测结果 对多杀性巴氏杆菌进行分型鉴定。 １．７病例的治疗和疗效评价 综合流行病学资料、临床症状、剖检病变和实验 室检测结果，确诊病例，提供治疗措施和综合防控方 案，并通过现场复诊、电话回访等评价治疗效果。 ２结果与分析 ２．１临床症状 所有发病肉牛都有相似的流行病学背景，肉牛 异地购进１周左右就开始出现临床症状。发病早 期，病牛表现为精神沉郁，流清鼻涕，咳嗽（阴雨刮风 天气或者早晚气温下降时，咳嗽会加剧），体温升高 至４１￣４２℃。随着病情的发展，病牛被毛粗糙，消 由表２可知，在各种病料中，以肺组织的分菌率 为最高，其次为喉拭子，最低的为鼻拭子；牛支原体 在肺组织上分菌率最高；在肺组织中除分离到牛支 瘦，有气喘、流脓鼻涕、拉稀、拉血等症状；有的病牛 原体外，还有多杀性巴氏杆菌Ａ型、芽孢杆菌、金黄 继发肢蹄病，表现为关节红肿、化脓，跛行，起卧困难 色葡萄球菌、变形杆菌及嗜水单胞菌，分菌率均为 甚至卧地不起；有的病牛继发结膜炎。病情发展到 后期，病牛肺部听诊有湿哕音，严重者极度消瘦、 衰竭而亡，死亡率达到４Ｏ （犊牛可达５０ ）。对 ８ ；大肠杆菌和溶血曼氏杆菌在肺组织上的分菌率 均为２３ Ａ；化脓隐秘杆菌在肺组织上的分菌率 ｏ为１５ 。 ２．４疗效评价 ２Ｏ个肉牛场中有１７个肉牛场的治疗效果确 实，消化道及呼吸道症状得到有效控制，７ ｄ后肉牛 场未出现新发病例，１５ ｄ左右牛群基本恢复正常。 有２个肉牛场未严格执行笔者团队提供的综合防控 ２Ｏ个肉牛场临床病例进行分析归纳，具体情况见 表ｌ。 表１ 肉牛疾病症状类型及发病率统计情况 方案，治疗效果较差。有１个肉牛场在初期治疗效 果确实，但后来继发其他传染病导致效果较差。 养殖与饲料２０１３年第８期 试验研究．１１． ３讨论 药（如盐酸扑敏宁等）；对于体质弱的牛应补充能量 （如可使用能量合剂：１Ｏ ９／６葡萄糖、三磷酸腺苷、辅酶 ３．１呼吸道症状为发病肉牛的主要症状 Ａ和肌苷）、维生素ｃ、复合维生素Ｂ等，结合强心治 从临床病例症状调查结果发现，呼吸道症状是 疗（如使用氧化樟脑注射液等）；对于腹泻肉牛可注 病牛的主要示病症状。部分病例有长途运输史，长 射阿米卡星等。对于久治不愈、呼吸极度困难的病 途运输带来的各种应激对疾病的发生有促进作用。 牛，建议淘汰。 ． 减少运输应激能降低发病率，但不能阻止发病［６］。 ３．２ 以牛支原体为主的多细菌混合感染为肉牛发 参考文献 病的主要原因 Ｅ１－］石磊，龚瑞，尹争艳，等．肉牛传染性牛支原体肺炎流行的初步 分析病原菌分离鉴定结果发现，牛支原体感染 诊断口］．华中农业大学学报，２００８，２７（４）：５７２． 、 是肉牛发病的主要原因，但临床上多病原菌混合感 ［２］连建华．牛病流行的现状及防治策略［Ｊ］．畜牧兽医科技信息， ２０１２（１１）：５２． 染现象经常出现。混合感染常使病情加剧、症状复 ［３］彭清洁，王冲，胡长敏，等．肉牛大肠杆菌、志贺氏菌与牛支原体 杂化甚至预后不良。Ｒａｄａｅｌｌｉ等［７］报道，混合感染 混合感染的诊断与分析口］．养殖与饲料，２０１２（１１）：３６—４１． 的常见病原菌包括多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌、 ［４］ 肖淦文，彭清洁，崔朋，等．肉牛牛支原体肺炎感染的细菌学研 昏睡嗜血杆菌、溶血性曼氏杆菌等；除此以外，大肠 究［Ｊ］．中国牛业科学，２０１２，３８（３）：２２—２６． 杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、芽孢杆菌、变形杆 ［５］ＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＭ ｓ，ＢＥＲＧＯＮＩＥＲ Ｄ，ＰＯＵＭＡＲＡＴ Ｆ，ｅｔ ａ１． Ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｗｌｓ ａｎｄ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ 菌等也被分离到。 ａｇａｌａｃｔｉａｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｕ￣ｒｒＣ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ３．３综合性治疗措施 Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，１９９８，１２（３）：１６１—１６９． 肉牛多病原菌混合感染的综合性防控措施包括 Ｉ－６］彭清洁，石磊，毛存志，等．抗应激处理对肉牛引入后发病的影 抗感染与对症治疗。抗感染方面，首选泰乐菌素、替 响［Ｊ］．中国牛业科学，２０１０，３６（５）：２２—２６． 米考星等对牛支原体敏感的药物；同时，应根据混合 ［７］ＲＡＤＡＥＬＬＩ Ｅ，ＬＵＩＮＩ Ｍ，ＬＯＲＩＡ Ｇ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ， ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ 感染情况，配合使用头孢噻呋钠等抗菌药物，以增强 Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｒｉｓ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｅａｌ ｃａｌｖｅｓ ａｎｄ ａｄｕｌｔ 疗效。对症治疗方面，对于体温升高的牛可用解热 ｃａｔｔｌｅ ａｔ ｓｌａｕｇｈｔｅｒ［Ｊ］．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８，８５ 药（如安乃近、复方氨基比林等）；对于喘气严重的牛 （２）：２８２—２９０． 应用支气管扩张药（如氨茶碱等），同时使用抗组胺 （责任编辑：郭会田）
