2013年第8 肉牛主要细菌性疾病的诊治及疗效评价 胡长敏 程淑芳 彭清洁 陈颖钰 姜鹏 郭爱珍H 1.华中农业大学动物医学院/华中农业大学农业微生物国家重点实验室/ 国家肉牛牦牛产业技术体系疾病控制功能研究室,武汉430070; 2.湖北省畜禽育种中心,武汉430070 摘要为了解我国肉牛细菌性疾病发生情况,本研究通过出诊和接诊肉牛场病例,采用临床症状观察、病理 解剖检查和病原菌分离鉴定,对多个肉牛场的细菌性疾病进行了确诊。结果表明,肉牛场病例以呼吸道症状为 主,以多种病原混合感染居多,牛支原体为导致肉牛发病的重要病原。 关键词肉牛;细菌性疾病;混合感染;牛支原体;诊治;疗效评价 随着我国肉牛养殖规模的不断壮大,北牛南运、 大豆肉汤(TSB)培养基(均按照试剂说明配制)购自 北繁南育日益普遍,肉牛各种疾病也随之而来,如何 BD公司;类胸膜肺炎菌(PPL0,即支原体)肉汤粉、 高效防控肉牛疾病成了养殖业的一大难题[1-引。 酵母粉、琼脂粉等购自BD公司;MEM培养基购自 2012年5月至2013年4月,笔者团队接诊了广东、 Sigma公司;马血清购自Hyclone公司;精氨酸购自 江西、山东、吉林、湖北等地20个肉牛场的病例,对 上海伯奥生物科技有限公司。按照石磊等[1]所用方 采集的病料进行了细菌学检测,结合实验室检测结 法配制支原体液体与固体培养基,但培养基中未加 果作出确诊,同时提出治疗方案,并进行疗效评价。 1 醋酸铊溶液。 本文分析了1 a内肉牛场临床病例的诊治情况,旨 1.3细菌分离培养 在阐明当今肉牛流行的主要细菌性疾病,并为临床 按彭清洁等[3]描述的方法,取小块组织样本,将 牛病的防控提供参考。 其切面在TSA平板上进行涂抹、划线,然后将培养 1材料与方法 皿倒置于37℃恒温箱内培养12 ̄24 h。观察优势 菌落的形态,并取优势菌落转接纯化,革兰氏染色后 1.1病料收集 油镜下观察细菌形态。 从2012年5月到2013年4月,华中农业大学 1.4病原茵的16S rDNA鉴定 动物医学院/国家肉牛牦牛产业技术体系疾病控制 用无菌牙签挑取分离纯化的细菌菌落,放人预 功能研究室接到来自广东、江西、山东、吉林、湖北等 先装有适量灭菌水的无菌离心管,煮沸10 min,冰 地2O个肉牛场的发病报告,笔者团队根据发病情 浴l min,12 000 r/min离心30 S,取上清作为DNA 况、临床症状和剖检病变作了初步诊断,并采集病变 模板。使用16S rDNA通用引物及扩增条件进行 最明显的组织作为实验室检测病料。 PCR扩增[4],回收PCR产物,与pMD一18T载体连 1.2培养基 接后送上海生物工程技术服务有限公司测序。获得 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)培养基及胰蛋白胨 的测序结果置GenBank中进行同源性比对,参照对 收稿日期:2013-06—24 .基金项目:现代农业(肉牛/牦牛)产业技术体系专项(CARS一38);农业公益性行业科研专项(201003060);宁夏科学技术厅重大科技专项 (宁夏肉牛呼吸疾病综合症及皮肤病防控技术研究与示范)。 *通讯作者 胡长敏,男,博士,副教授。 .1O.试验研究 饲料2013年第8 比序列同源性的高低鉴定菌株。 1.5牛支原体的分离鉴定 由表1可知,有呼吸道症状的占6O 9,6,单纯腹 泻症状的只占5 。 病牛主要病变集中在胸腔和肺部。轻者可见肺 按石磊等[1]描述的方法,分别将小块肺组织样 2.2病理变化 本、气管拭子、喉拭子涂于PPLO固体培养基表面, 并将小块组织样本放人到PPLO液体培养基中,均 部尖叶和心叶局部发生“肉变”。严重者肺部与胸腔 置于含5 9,6的C0。的细胞培养箱培养。2~3 d后, 有不同程度地粘连,肺表面有大小不等的灰白色干 观察液体培养基的颜色变化,并用光学显微镜观察 酪样坏死灶(有的形成脓包,刺破后有白色的脓汁流 固体培养基上的菌落形态。支原体可使PPLO液 出);气管、支气管内有乳白色泡沫;胸腔有积液,液 体培养基由红色变为黄色,并且透亮;支原体在 体混浊;心包积液,呈透明黄色。 PPLO固体培养基上菌落应具有“煎蛋样”的典型 2.3细菌学检测 特征。 对从20个肉牛场采集的病料进行细菌学检测, 按1.4的方法鉴定16S rDNA;按Subramani— 发现在8个感染牛支原体的肉牛场中,混合感染多 am等[5]描述的uvrC基因PCR方法鉴别牛支原体 杀性巴氏杆菌A型的有1个,混合感染溶血曼氏杆 与无乳支原体。 1.6多杀性巴氏杆菌的PCR分型 根据肖淦文等[4]报道的方法,用特异性的PCR 菌的有3个,混合感染大肠杆菌和志贺氏菌的有1 个。具体细菌学检测结果如表2所示。 表2病牛细菌学检测结果 对多杀性巴氏杆菌进行分型鉴定。 1.7病例的治疗和疗效评价 综合流行病学资料、临床症状、剖检病变和实验 室检测结果,确诊病例,提供治疗措施和综合防控方 案,并通过现场复诊、电话回访等评价治疗效果。 2结果与分析 2.1临床症状 所有发病肉牛都有相似的流行病学背景,肉牛 异地购进1周左右就开始出现临床症状。发病早 期,病牛表现为精神沉郁,流清鼻涕,咳嗽(阴雨刮风 天气或者早晚气温下降时,咳嗽会加剧),体温升高 至41 ̄42℃。随着病情的发展,病牛被毛粗糙,消 由表2可知,在各种病料中,以肺组织的分菌率 为最高,其次为喉拭子,最低的为鼻拭子;牛支原体 在肺组织上分菌率最高;在肺组织中除分离到牛支 瘦,有气喘、流脓鼻涕、拉稀、拉血等症状;有的病牛 原体外,还有多杀性巴氏杆菌A型、芽孢杆菌、金黄 继发肢蹄病,表现为关节红肿、化脓,跛行,起卧困难 色葡萄球菌、变形杆菌及嗜水单胞菌,分菌率均为 甚至卧地不起;有的病牛继发结膜炎。病情发展到 后期,病牛肺部听诊有湿哕音,严重者极度消瘦、 衰竭而亡,死亡率达到4O (犊牛可达50 )。对 8 ;大肠杆菌和溶血曼氏杆菌在肺组织上的分菌率 均为23 A;化脓隐秘杆菌在肺组织上的分菌率 o为15 。 2.4疗效评价 2O个肉牛场中有17个肉牛场的治疗效果确 实,消化道及呼吸道症状得到有效控制,7 d后肉牛 场未出现新发病例,15 d左右牛群基本恢复正常。 有2个肉牛场未严格执行笔者团队提供的综合防控 2O个肉牛场临床病例进行分析归纳,具体情况见 表l。 表1 肉牛疾病症状类型及发病率统计情况 方案,治疗效果较差。有1个肉牛场在初期治疗效 果确实,但后来继发其他传染病导致效果较差。 养殖与饲料2013年第8期 试验研究.11. 3讨论 药(如盐酸扑敏宁等);对于体质弱的牛应补充能量 (如可使用能量合剂:1O 9/6葡萄糖、三磷酸腺苷、辅酶 3.1呼吸道症状为发病肉牛的主要症状 A和肌苷)、维生素c、复合维生素B等,结合强心治 从临床病例症状调查结果发现,呼吸道症状是 疗(如使用氧化樟脑注射液等);对于腹泻肉牛可注 病牛的主要示病症状。部分病例有长途运输史,长 射阿米卡星等。对于久治不愈、呼吸极度困难的病 途运输带来的各种应激对疾病的发生有促进作用。 牛,建议淘汰。 . 减少运输应激能降低发病率,但不能阻止发病[6]。 3.2 以牛支原体为主的多细菌混合感染为肉牛发 参考文献 病的主要原因 E1-]石磊,龚瑞,尹争艳,等.肉牛传染性牛支原体肺炎流行的初步 分析病原菌分离鉴定结果发现,牛支原体感染 诊断口].华中农业大学学报,2008,27(4):572. 、 是肉牛发病的主要原因,但临床上多病原菌混合感 [2]连建华.牛病流行的现状及防治策略[J].畜牧兽医科技信息, 2012(11):52. 染现象经常出现。混合感染常使病情加剧、症状复 [3]彭清洁,王冲,胡长敏,等.肉牛大肠杆菌、志贺氏菌与牛支原体 杂化甚至预后不良。Radaelli等[7]报道,混合感染 混合感染的诊断与分析口].养殖与饲料,2012(11):36—41. 的常见病原菌包括多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌、 [4] 肖淦文,彭清洁,崔朋,等.肉牛牛支原体肺炎感染的细菌学研 昏睡嗜血杆菌、溶血性曼氏杆菌等;除此以外,大肠 究[J].中国牛业科学,2012,38(3):22—26. 杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、芽孢杆菌、变形杆 [5]SUBRAMANIAM s,BERGONIER D,POUMARAT F,et a1. Species identiifcation of Mycoplasma bowls and Mycoplasma 菌等也被分离到。 agalactiae based on the u ̄rrC genes by PCR[J].Molecular and 3.3综合性治疗措施 Cellular Probes,1998,12(3):161—169. 肉牛多病原菌混合感染的综合性防控措施包括 I-6]彭清洁,石磊,毛存志,等.抗应激处理对肉牛引入后发病的影 抗感染与对症治疗。抗感染方面,首选泰乐菌素、替 响[J].中国牛业科学,2010,36(5):22—26. 米考星等对牛支原体敏感的药物;同时,应根据混合 [7]RADAELLI E,LUINI M,LORIA G R,et a1.Bacteriological, serological,pathological and immunohistochemical studies of 感染情况,配合使用头孢噻呋钠等抗菌药物,以增强 Mycoplasma boris respiratory infection in veal calves and adult 疗效。对症治疗方面,对于体温升高的牛可用解热 cattle at slaughter[J].Research in Veterinary Science,2008,85 药(如安乃近、复方氨基比林等);对于喘气严重的牛 (2):282—290. 应用支气管扩张药(如氨茶碱等),同时使用抗组胺 (责任编辑:郭会田)