JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vol.29No.22019年第2期调味面制品中蜡样芽胞杆菌污染状况调查分析季小荣刘钦钰陈晓蔚渊江苏产品质量监督检验研究院江苏南京210007冤摘要为了分析调味面制品中蜡样芽胞杆菌污染状况袁根据GB47.14要2014叶食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验曳渊MPN计数法冤袁并通过QuanID微生物质谱鉴定系统对蜡样芽胞杆菌的生化鉴定结果进行了验证遥发现300批次调味面制品有28批次检出蜡样芽胞杆菌袁检出率为9.33%遥QuanID微生物质谱鉴定系统对蜡样芽胞杆菌的鉴定结果与国标法生化鉴定的结果保持一致遥由此可以说明袁调味面制品中存在蜡样芽胞杆菌污染袁另外袁QuanID微生物质谱鉴定系统鉴定蜡样芽胞杆菌相对于国标生化鉴定具有较大优势袁能够简化操作袁缩短检测周期袁节约成本等袁为快速检测蜡样芽胞杆菌等致病菌提供了技术手段遥关键词调味面制品曰蜡样芽胞杆菌曰生化鉴定曰QuanID微生物质谱鉴定系统中图分类号R155.5InvestigationandAnalysisofBacillusCereusContaminationinFlavoredNoodleProductsJIXiaorong,LIUQinyu,CHENXiaowei渊JiangsuProductQualityTesting&InspectionInstitute,Nanjing袁Jiangsu,210007,China冤Abstract院InordertoanalysethecontaminationofBacillusCereusinflavorednoodleproducts,thispaperusestheGB47.14要2014NationalFoodSafetyStandard-FoodMicrobiologicalExamination:BacillusCereus(MPNcountingmethod).ByusingtheQuanIDmicrobialmassspectrometrysystem袁thebiochemicalidentificationresultsofBacillusCereusareverified.Thereare28batchsthroughtheamountof300batchsofflavorednoodleproductshavedetectedBacillusCereus,andthedetectionrateis9.33%.TheidentificationresultsofBacillusCereusbyQuanIDmicrobialmassspectrometryreachedconsensuswiththebiochemicalidentificationresultsbasedonthenationalstandardmethod.SoitshowsthatBacillusCereuscontaminationisexistedinflavorednoodleproducts.Inaddition,comparedwiththenationalbiochemicalidentificationstandardmethod,theQuanIDmicrobialmassspectrometrymethodhasagreatadvantageinidentifyingBacillusCereus,whichcansimplifytheoperation,reducedetectionperiod,andsavethecost,whichprovidesatechnicalmeansforrapiddetectionofBacillusCereusandotherpathogenicbacteria.KeyWords院FlavoredNoodleProducts;BacillusCereus;BiochemicalIdentification;QuanIDMicrobialMassSpectrometryIdentificationSystem1前言蜡样芽胞杆菌袁是芽胞杆菌属中的一种革兰氏阳性杆菌袁广泛分布于空气尧土壤和食品等环境中遥当食品中蜡样芽胞杆菌菌量大于105CFU/g时袁会产生毒素袁引起呕吐和腹泻遥因此袁人们也越来越关注食品中蜡样芽胞杆菌引发的食物中毒[1]遥QuanID微生物质谱鉴定系统由MALDI-TOF质谱仪和微生物数据库组成遥其工作原理是袁将微第一作者E-mail院1051012397@qq.com收稿日期院2019-04-08生物样品和基质液点样到靶板上袁当激光轰击时袁基质吸收能量转移到微生物样品袁并提供质子给样品袁使样品离子化袁通过飞行时间后袁质量分离器将样品中的蛋白质根据质荷比渊m/z冤分离袁得到样品的蛋白指纹图谱遥通过与基于微生物核糖体蛋白和部分具有微生物种属特征的结构蛋白的QuanID菌种数据库比对袁获得鉴定结果[2]遥调味面制品袁俗称辣条袁具有野高盐尧高油尧高添窑36窑2019年第2期Vol.29No.2检验检疫学刊JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE加冶的特点遥由于其口感丰富袁价格低廉袁吸引了大量的消费者袁因此袁其产品质量显得尤为重要[3]遥本次研究是对调味面制品中蜡样芽胞杆菌的污染状况进行了调查分析袁通过调查分析来及时发现调味面用双料胰酪胨大豆多黏菌素肉汤冤袁于30益培养48h遥2.5.3培养用接种环从各管中分别移取1环袁划线接种到MYP琼脂平板上袁30益培养24h遥如果菌落不典型袁可继续培养24h再观察遥在MYP琼脂平板上袁典型菌落为微粉红色渊表示不发酵甘露醇冤袁周围有白色至淡粉红色沉淀环渊表示产卵磷脂酶冤遥2.5.4纯培养从MYP平板上挑取典型菌落袁划线接种于营养琼脂平板做纯培养袁30益培养24h袁进行确认实验遥在营养琼脂上袁典型菌落为灰白色袁偶有黄绿色袁不透明袁表面粗糙似毛玻璃或融蜡状袁边缘常呈扩展状袁直径为4耀10mm遥2.5.5生化鉴定挑取纯培养的单个菌落袁进行革兰氏染色尧过氧化氢酶试验尧动力试验尧盐还原试验尧酪蛋白分解试验尧溶菌酶耐性试验尧V-P试验尧葡萄糖利用渊厌氧冤试验尧根状生长试验尧溶血试验尧蛋白质毒素结晶试验遥2.5.6结果与报告根据证实为蜡样芽胞杆菌阳性的试管管数袁查MPN检索表袁报告每克样品中蜡样芽胞杆菌的最可能数袁以MPN/g表示遥2.5.7QuanID微生物质谱鉴定系统微生物鉴定制品中存在的问题袁确保食品安全袁为以后食品监测管理提供一定数据支撑遥另外袁通过QuanID微生物质谱鉴定系统对蜡样芽胞杆菌的生化鉴定结果进行验证袁确保试验结果的准确性袁同时袁比较蜡样芽胞杆菌两种鉴定方法的优缺点袁为快速鉴定蜡样芽胞杆菌提供了依据遥2材料和方法2.1试验设备生化培养箱曰QuanID微生物质谱鉴定系统曰电子天平曰高压蒸汽灭菌锅曰显微镜遥2.2样品来源从超市购买了300批次调味面制品遥2.3培养基和试剂甘露醇卵黄多黏菌素琼脂渊MYP冤曰胰酪胨大豆多黏菌素肉汤曰营养琼脂曰胰酪胨大豆羊血渊TSSB冤琼脂曰蜡样芽胞杆菌生化鉴定试剂盒遥2.4蜡样芽胞杆菌计数方法GB47.14要2014叶食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验曳渊MPN计数法冤遥2.5实验过程2.5.1样品制备称取样品25g袁放入盛有225mL生理盐水的无菌均质袋中袁用均质拍打1耀2min遥2.5.2样品接种取3个连续稀释度的样品匀液袁接种于10mL胰酪胨大豆多黏菌素肉汤中袁每一稀释度接种3管袁每管接种1mL渊如果接种量需要超过1mL袁则需要挑取单菌落袁将单菌落涂在靶板上袁添加稀释剂及基质袁然后上机鉴定遥3结果与分析3.1生化鉴定结果挑取的典型菌落进行生化鉴定袁鉴定结果达到预期生化鉴定结果袁具体生化鉴定结果详见表1所示遥表1蜡样芽胞杆菌生化鉴定结果项目革兰氏染色过氧化氢酶动力盐还原酪蛋白分解溶菌酶耐性卵黄反应结果革兰氏阳性杆菌垣垣垣垣垣垣项目葡萄糖利用渊厌氧冤V-P试验甘露醇产酸溶血根状生长蛋白质毒素晶体结果垣垣原垣原原注院野垣冶代表阳性袁说明检测到此类物质或特性的存在曰野原冶代表阴性袁说明没有检测到此类物质或特性的存在遥蜡样芽胞杆菌生化鉴定项目较多袁操作烦琐袁成本高袁对实验人员要求较高袁检测周期长袁大部分生化鉴定需要24耀48h袁蛋白质毒素晶体鉴定周期长达一周遥窑37窑JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vol.29No.22019年第2期3.2QuanID微生物质谱鉴定系统鉴定结果根据图1发现袁鉴定菌株的质谱峰与QuanID蜡样芽胞杆菌遥根据验证袁生化鉴定结果与QuanID微生物质谱鉴定系统鉴定结果保持一致遥数据库中蜡样芽胞杆菌菌株蛋白袁表明鉴定结果为样品中蜡样芽胞杆菌的质荷比样品中蜡样芽胞杆菌的质荷比图1蜡样芽胞杆菌鉴定图谱3.3结果统计通过查找MPN检索表袁具体检测数据结果见表2遥300批次调味面制品中袁共有28批次检出蜡样可以看出袁调味面制品中蜡样芽胞杆菌污染菌量相对不高袁没有达到引起食物中毒的菌量程度袁说明调味面制品的食品安全情况较好遥检出蜡样芽胞杆菌的调味面制品污染源可能是由于原料和生产环节没有采取相关必要措施遥芽胞杆菌袁其检出率为9.33%遥考虑到调味面制品的渗透压高袁虽然污染了蜡样芽胞杆菌袁但繁殖较慢袁所以袁检出蜡样芽胞杆菌样品的MPN值相对较低遥表2蜡样芽胞杆菌检测结果项目批次数约0.3MPN/g2720.36MPN/g210.92MPN/g52.3MPN/g24结语通过调查分析袁调味面制品中袁蜡样芽胞杆菌污染存在袁但菌量相对较轻袁没有达到食物中毒的菌量袁但人们还仍需提高警惕遥因为蜡样芽胞杆菌为条件致病菌袁一旦有较适宜的生长条件就会大量繁殖引起食物中毒袁且大多无变质现象袁感官性状正常[4]遥所以袁需将蜡样芽胞杆菌作为微生物监测的常检项目袁定期对调味面制品中的蜡样芽胞杆菌进化培养法为主遥该方法检测周期长袁需要操作人员有丰富的实验经验遥而QuanID微生物质谱鉴定系统鉴定蜡样芽胞杆菌相对于国标生化鉴定具有较大优势袁能够简化操作袁缩短检测周期袁节约成本等遥因此袁通过进一步研究QuanID微生物质谱鉴定系统鉴定方法袁可以为快速检测蜡样芽胞杆菌等致病菌提供技术手段遥参考文献[1][2][3][4]检疫学刊,2016,26(1):68-71.刘芳,罗臻,黄静敏,等.致病性蜡样芽胞杆菌的研究进展[J].检验江连洲,曹飞扬,陈颖,等.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱行监测袁保障食品安全遥食品企业还需加强对原材料和生产环节的监管袁提高生产人员的食品安全意识遥一般而言袁有部分蜡样芽胞杆菌会带有致病性的毒力基因袁所以袁在以后的监测过程中袁需要辅助监测携带毒力基因情况袁才能更全面地了解食品中蜡样芽胞杆菌的污染情况遥目前袁蜡样芽胞杆菌的检测方法袁仍以国标的生窑38窑快速鉴定蜡样芽胞杆菌研究与应用[J].东北农业大学学报,2016,47(12):56-.学,2016,44(3):88-,122.26(2):204-205.安虹,谭炜.调味面制品产品质量现状调研及分析[J].安徽农业科范和.一起蜡样芽胞杆菌引起食物中毒的检测[J].临床医学,2013,
