一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 106191031 A(43)申请公布日 2016.12.07

(21)申请号 201610837131.4(22)申请日 2016.09.21

(71)申请人 四川农业大学

地址 625000 四川省雅安市雨城区新康路

46号四川农业大学食品学院(72)发明人 张兰　曾思琪　段小雨　胡玉　

唐倩倩　李益文　刘韫滔　胡欣洁　刘爱平　(74)专利代理机构 北京华仲龙腾专利代理事务

所(普通合伙) 118

代理人 李静(51)Int.Cl.

C12N 15/01(2006.01)C12N 13/00(2006.01)

()发明名称

一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法(57)摘要

本发明公开了一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其采用叠氮化物类突变剂、紫外线和微波相互作用的复合诱变，通过重复作用，可以实现食用菌的协同效应的突变，较单一诱变效果更好，筛选到具有富硒能力的菌株效价提高了55%-65%，紫外线和微波处理的食用菌细胞有修复作用，使正突变率提高。而且，本发明的如叠氮化钠（NaN3)等电点是pH=4. 18，在pH=3时NaN3溶液中主要产生呈中性的分子HN3，易透过膜进入细胞内，以碱基替换方式影响DNA的正常合成，从而导致点突变的产生，NaN3具有高效、无毒、便宜及使用安全等优点。提高了富硒能力食用菌的筛选与选育效率。

权利要求书1页 说明书4页

CN 106191031 ACN 106191031 A

权　利　要　求　书

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1.一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）准备培养基，将食用菌的孢子置于培养基中进行培养，得到单核的初生菌丝体；（2）在所述步骤（1）得到的单核的初生菌丝体中加入叠氮化物类突变剂，进行预突变处理，预突变时间为3-6h；（3）将步骤（2）中预诱变处理的菌丝体置于波长为260nm的紫外线中进行辐照处理，在辐照处理3s后，在开启微波，利用微波进行辐射处理；（4）将步骤（3）中辐射和辐照处理后的菌丝体置于培养基中，并在培养基中加入亚硒酸钠的培养液，进行富硒驯化培养；（5）培养一段时间，即可选育出具有富硒能力食用菌。

2.根据权利要求1所述的一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的培养基是采用以下质量分数的物质配制而成：25-30份马铃薯、2-5份琼脂、3-8份蔗糖、鱼蛋白份8-10份和80-120份的水；其配制的具体步骤为：按配方配制的成分均匀混合后，分装于试管里，利用管口塞棉塞，并及时将试管置于灭菌箱中进行灭菌，灭菌时间为20分钟，消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基，挑取2-3支试管放置于250℃的恒温箱中培养3-5天，选取培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌的培养基作为符合要求的培养基，培养基的PH为5.8-6.3，培养温度为28-29℃。

3.根据权利要求1所述的一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，叠氮化物类突变剂为叠氮化钠突变剂，其中，叠氮化钠突变剂的浓度为0.03-0.05wt%，突变时间为5-8h。

4.根据权利要求1所述的一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，微波进行辐射时，微波的功率为800W，脉冲频率为2200MHz，微波辐射时间为15-20s。

5.根据权利要求1所述的一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，紫外线照射处理的时间为20-30s。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于：所述步骤（4）中加入的亚硒酸钠的培养液的浓度为300-400mg/L，且每1KG的培养液中加入0.8-1.2L的亚硒酸钠的培养液。

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一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法

技术领域

[0001]本发明涉及食用菌的选育与筛选领域，具体涉及一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法。

背景技术

[0002]自由基是一类外层轨道上具有不配对价电子的原子、原子团或分子。通常氧自由基在机体内的生成和去除处于平衡状态,不会对身体造成严重损伤，但是当机体的自由基去除能力减弱或自由基去除剂供给不足,以及摄入生成自由基的物质过多时 ,体内的自由基将过剩 ,引起生物大分子如脂质、蛋白和核酸的氧化损伤,导致多种疾病的发生,如衰老、癌症、心脑血管疾病、 冠心病等。

[0003]硒是谷胱甘肽过氧化物酶的辅酶 ,对维持谷胱甘肽过氧化物酶活性至关重要, 是人类生命活动中必不可少的物质。研究表明, 硒具有保护心肌、防治克山病、大骨节病、肝病及降低多种癌症发病危险等多种生理功能。[0004]近年来 ,随着功能性食品的日益增长 ,食用菌类食品以其安全、天然、富有营养、具有调节一项或多项生理功能而赢得越来越多人的青睐。再者, 随着食用菌类食品的药用价值与营养成分不断被揭示，其食用和药用价值更受到重视。而具有富硒能力的食用菌中的多糖是其中的重要生物活性成分之一,它可通过淋巴细胞、巨噬细胞、网状内皮系统的作用而调节机体的免疫功能 ,提高身体抵抗病毒和细菌的入侵的能力。[0005]因此，如何选育出具有富硒能力的食用菌，对于提高食用菌的药用价值具有极其重要的作用。而随着突变技术育种的不断发展，如何通过突变处理来实现选育出具有富硒能力的食用菌，具有很好的前景。发明内容

[0006]本发明针对现有的技术问题，提供一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，通过突变处理来实现选育出具有富硒能力的食用菌，具有很好的前景。[0007]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

（1）准备培养基，将食用菌的孢子置于培养基中进行培养，得到单核的初生菌丝体；（2）在所述步骤（1）得到的单核的初生菌丝体中加入叠氮化物类突变剂，进行预突变处理，预突变时间为3-6h；

（3）将步骤（2）中预诱变处理的菌丝体置于波长为260nm的紫外线中进行辐照处理，在辐照处理3s后，在开启微波，利用微波进行辐射处理；

（4）将步骤（3）中辐射和辐照处理后的菌丝体置于培养基中，并在培养基中加入亚硒酸钠的培养液，进行富硒驯化培养；

（5）培养一段时间，即可选育出具有富硒能力食用菌。[0008]进一步，作为优选，步骤（1）中所述的培养基是采用以下质量分数的物质配制而

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成：25-30份马铃薯、2-5份琼脂、3-8份蔗糖、鱼蛋白份8-10份和80-120份的水；其配制的具体步骤为：按配方配制的成分均匀混合后，分装于试管里，利用管口塞棉塞，并及时将试管置于灭菌箱中进行灭菌，灭菌时间为20分钟，消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基，挑取2-3支试管放置于250℃的恒温箱中培养3-5天，选取培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌的培养基作为符合要求的培养基，培养基的PH为5.8-6.3，培养温度为28-29℃。

[0009]进一步，作为优选，所述步骤（2）中，叠氮化物类突变剂为叠氮化钠突变剂，其中，叠氮化钠突变剂的浓度为0.03-0.05wt%，突变时间为5-8h。[0010]进一步，作为优选，所述步骤（3）中，微波进行辐射时，微波的功率为800W，脉冲频率为2200MHz，微波辐射时间为15-20s。[0011]进一步，作为优选，所述步骤（3）中，紫外线照射处理的时间为20-30s。[0012]进一步，作为优选，所述步骤（4）中加入的亚硒酸钠的培养液的浓度为300-400mg/L，且每1KG的培养液中加入0.8-1.2L的亚硒酸钠的培养液。[0013]与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明采用叠氮化物类突变剂、紫外线和微波相互作用的复合诱变，通过重复作用，可以实现食用菌的协同效应的突变，较单一诱变效果更好，筛选到具有富硒能力的菌株效价提高了55%-65%，紫外线和微波处理的食用菌细胞有修复作用，使正突变率提高。而且，本发明的如叠氮化钠（NaN3)等电点是pH=4. 18，在pH=3时NaN3溶液中主要产生呈中性的分子HN3，易透过膜进入细胞内，以碱基替换方式影响DNA的正常合成，从而导致点突变的产生，NaN3具有高效、无毒、便宜及使用安全等优点。提高了富硒能力食用菌的筛选与选育效率。具体实施方式

[0014]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。[0015]实施例一

一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其包括以下步骤：（1）准备培养基，将食用菌的孢子置于培养基中进行培养，得到单核的初生菌丝体，其中，培养基是采用以下质量分数的物质配制而成：25份马铃薯、4份琼脂、3份蔗糖、鱼蛋白份8份和100份的水；其配制的具体步骤为：按配方配制的成分均匀混合后，分装于试管里，利用管口塞棉塞，并及时将试管置于灭菌箱中进行灭菌，灭菌时间为20分钟，消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基，挑取3支试管放置于250℃的恒温箱中培养4天，选取培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌的培养基作为符合要求的培养基，培养基的PH为5.8，培养温度为28℃。[0016]（2）在所述步骤（1）得到的单核的初生菌丝体中加入叠氮化钠突变剂，突变剂的浓度为0.03wt%，突变时间为5h，进行预突变处理，预突变时间为3h；

（3）将步骤（2）中预诱变处理的菌丝体置于波长为260nm的紫外线中进行辐照处理，紫外线照射处理的时间为20s，在辐照处理3s后，在开启微波，利用微波进行辐射处理，微波进

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行辐射时，微波的功率为800W，脉冲频率为2200MHz，微波辐射时间为20s；

（4）将步骤（3）中辐射和辐照处理后的菌丝体置于培养基中，并在培养基中加入亚硒酸钠的培养液，进行富硒驯化培养，加入的亚硒酸钠的培养液的浓度为400mg/L，且每1KG的培养液中加入0.8L的亚硒酸钠的培养液；

（5）培养一段时间，即可选育出具有富硒能力食用菌。[0017]经过多次试验证明，该实施例的筛选到具有富硒能力的菌株效价相比于采用单一的紫外线照射诱变提高了58-60%。[0018]实施例二

一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其包括以下步骤：（1）准备培养基，将食用菌的孢子置于培养基中进行培养，得到单核的初生菌丝体，其中，培养基是采用以下质量分数的物质配制而成：30份马铃薯、3份琼脂、6份蔗糖、鱼蛋白份10份和110份的水；其配制的具体步骤为：按配方配制的成分均匀混合后，分装于试管里，利用管口塞棉塞，并及时将试管置于灭菌箱中进行灭菌，灭菌时间为20分钟，消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基，挑取2支试管放置于250℃的恒温箱中培养4天，选取培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌的培养基作为符合要求的培养基，培养基的PH为5.9，培养温度为29℃。[0019]（2）在所述步骤（1）得到的单核的初生菌丝体中加入叠氮化钠突变剂，突变剂的浓度为0.05wt%，突变时间为8h，进行预突变处理，预突变时间为5h；

（3）将步骤（2）中预诱变处理的菌丝体置于波长为260nm的紫外线中进行辐照处理，紫外线照射处理的时间为25s，在辐照处理3s后，在开启微波，利用微波进行辐射处理，微波进行辐射时，微波的功率为800W，脉冲频率为2200MHz，微波辐射时间为20s；

（4）将步骤（3）中辐射和辐照处理后的菌丝体置于培养基中，并在培养基中加入亚硒酸钠的培养液，进行富硒驯化培养，加入的亚硒酸钠的培养液的浓度为350mg/L，且每1KG的培养液中加入1.1L的亚硒酸钠的培养液；

（5）培养一段时间，即可选育出具有富硒能力食用菌。[0020]经过多次试验证明，该实施例的筛选到具有富硒能力的菌株效价相比于采用单一的微波照射诱变提高了62-65%。[0021]实施例三

一种利用突变的方法选育具有富硒能力食用菌的方法，其包括以下步骤：（1）准备培养基，将食用菌的孢子置于培养基中进行培养，得到单核的初生菌丝体，其中，培养基是采用以下质量分数的物质配制而成：28份马铃薯、4份琼脂、6份蔗糖、鱼蛋白份10份和100份的水；其配制的具体步骤为：按配方配制的成分均匀混合后，分装于试管里，利用管口塞棉塞，并及时将试管置于灭菌箱中进行灭菌，灭菌时间为20分钟，消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基，挑取3支试管放置于250℃的恒温箱中培养4天，选取培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌的培养基作为符合要求的培养基，培养基的PH为6.3，培养温度为28.5℃。[0022]（2）在所述步骤（1）得到的单核的初生菌丝体中加入叠氮化钠突变剂，突变剂的浓度为0.03wt%，突变时间为7h，进行预突变处理，预突变时间为5h；

（3）将步骤（2）中预诱变处理的菌丝体置于波长为260nm的紫外线中进行辐照处理，紫

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外线照射处理的时间为25s，在辐照处理3s后，在开启微波，利用微波进行辐射处理，微波进行辐射时，微波的功率为800W，脉冲频率为2200MHz，微波辐射时间为20s；

（4）将步骤（3）中辐射和辐照处理后的菌丝体置于培养基中，并在培养基中加入亚硒酸钠的培养液，进行富硒驯化培养，加入的亚硒酸钠的培养液的浓度为350mg/L，且每1KG的培养液中加入1L的亚硒酸钠的培养液；

（5）培养一段时间，即可选育出具有富硒能力食用菌。[0023]经过多次试验证明，该实施例的筛选到具有富硒能力的菌株效价相比于采用单一的化学剂诱变提高了56-62%。

[0024]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

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