维普资讯 http://www.cqvip.com 江苏农业科学２００７年第５期 一１０１一 蓝浆果的组织培养及离体微繁技术研究 刘 捷 ，吴小锋 ，刘学平 ，杨丽娜 ，章镇 ，陶建敏 （１．南京农业大学园艺学院，江苏南京２１００９５；２．南京市茶桑果技术指导站，江苏南京２１００３６） 摘要：蓝浆果具有很高的保健功能，是目前世界上最重要的小果类果树之一。以５个北高丛蓝浆果品种和１ 个兔眼蓝浆果品种为试材，取成熟的蓝浆果单芽切段及幼嫩叶片为外植体，在添加各种激素的改良１／２ＭＳ培养 基上培养，筛选蓝浆果离体增殖和生根培养基。试验结果表明，兔眼蓝浆果品种粉蓝在添加３ ｍｇ／Ｌ ＺＴ的改良 １／２ＭＳ培养基上初代培养后诱导出大量新生枝，北高丛蓝浆果蓝丰和伯克利在分别添加了５、１０ ｍｇ／Ｌ Ｚ—ｉｐ的改 良１／２ＭＳ培养基上继代培养５周后，增殖率均可达４０～５０倍；在改良１／２ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ的生根培养基上生 根培养３个月后，蓝浆果的生根率可达１００％。 关键词：蓝浆果；组织培养；离体快繁 中图分类号：￥６６３．９０４ ．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２００７）０５—０１０１—０３ 蓝浆果（Ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ），又名越橘、蓝莓，为杜鹃花 科越橘属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ Ｌ．）植物，多年生落叶或常绿 灌木或小灌木，广泛分布于北半球，具有较高经济价 值和广阔的开发前景¨ 。蓝浆果低糖、低脂肪、抗 氧化能力列所有果品、蔬菜之首，具有防止脑神经衰 老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特功效，因此被 国际粮农组织列为人类五大健康食品之一 。尽 丛蓝浆果、半高丛蓝浆果和高丛蓝浆果的一些品种， 并在长白山和大小兴安岭地区推广生产。中国科学 院南京植物研究所于１９８７年开始引种，先后从美国 引进兔眼蓝浆果和高丛蓝浆果，目前生长状况良 好 ；贵州省麻江县于２０００年引种美国兔眼蓝浆果 ８个品种栽培已获成功 』。我国蓝浆果的引种工作 还在日益扩大，因此，迫切需要对蓝浆果品种进行繁 管中国也有越橘属植物分布，但对其研究很少。随 着人们生活水平的提高，蓝莓、树莓、沙棘、酸枣等因 具有独特风味及营养保健作用而日益受到人们的关 注，被列入世界第三代水果的行列¨Ｊ。蓝浆果将成 为２１世纪最有发展前景的果树树种之一 。商业 栽培的主要种是北高丛蓝浆果（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃｏｒｙｍｂｏ— 殖试验的研究。各类蓝浆果品种的传统繁殖方法有 所不同，高丛蓝浆果主要采用硬枝扦插，兔眼蓝浆果 以绿枝扦插为主，矮丛蓝浆果则以地下根茎繁殖。与 传统繁殖方法不同的是蓝浆果组织培养能够在短时 间内繁育出大量组培苗。关于蓝浆果的组织培养繁 殖，国内外已经有一些成功的报道 。本文以粉 ｓｕｍ Ｌ．）和南高丛蓝浆果。前者需要较长的低温需 求量，故主要分布于美国的温带地区和加拿大的哥 伦比亚省；南高丛蓝浆果要求较短的低温需求量，主 要分布于美国东南部的亚热带气候区。兔眼蓝浆果 （Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ａｓｈｅｉ Ｒｅａｄｅ）在美国东南部栽培很普 遍 Ｊ。我国蓝浆果的引种工作始于２０世纪８０年代 中后期。自１９８５年起，吉林农业大学首次引进了矮 蓝、迪克西、赫伯特、大达柔、伯克利和蓝丰６个品种 为试材，研究适宜它们的离体微繁体系与关键技术。 １材料与方法 １．１ 材料 植物材料选用北高丛蓝浆果品种迪克西 （Ｄｉｘｉ）、赫伯特（Ｈｅｒｂｅｒｄ）、大达柔（Ｂｉｇ Ｄａｒｒｏｗ）、伯 克利（Ｂｅｒｋｅｌｙ）、蓝丰（Ｂｌｕｅｃｒｏｐ）和兔眼蓝浆果品种 粉蓝（Ｐｏｗｄｅｒｂｌｕｅ）两种类型。外植体材料为田间生 长的蓝浆果的半木质化绿枝和田间嫩梢叶片。 １．２ 方法 收稿日期：２００７—０３—２２ 基金项目：国家“８６３”项目（编号：Ｐ２００３１０）；国家农业综合开发科技 示范项目（编号：财发２ＯＯｌ一１４）。 作者简介：刘捷（１９７９～），女，山东菏泽人，硕士生，从事果树生物 １．２．１无菌苗的获得以田间生长的半木质化绿 技术研究。Ｅ—ｍａｉｌ：２００４１０４０９６＠ｎｉａａ．ｅｄｕ．ｃｎ 通讯作者：陶建敏。Ｅ—ｍａｉｌ：￣ｍ２６６＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ。 枝和嫩梢叶片为初始外植体，枝条切成１～２ ＣｌＴＩ的 单芽茎段。外植体用自来水冲洗５～６ ｈ，在超净工 维普资讯 http://www.cqvip.com － ．——１０２．－－—— 江苏农业科学２００７年第５期 作台上用７０％的酒精灭菌４０～５０ Ｓ，０．１％的升汞溶 殖效果都很好，而迪克西、赫伯特和大达柔的丛生芽 增殖没有最终取得成功。 ２．２ 适合蓝浆果品种离体微繁的基本培养基筛选 ＭＳ、１／２ＭＳ、改良１／２ＭＳ ３种基本培养基中均 添加１０ ｍｇ／Ｌ的ｚ—ｉｐ，从不同蓝浆果品种在３种不 同培养基上的反应中可以看出（表１），在改良１／２ ＭＳ培养基上，蓝浆果品种的丛生芽分化和增殖生长 液浸泡５～８ ｍｉｎ，无菌水冲洗４～６次，以备接种。 １．２．２培养条件 外植体接种选用的基本培养基 有ＭＳ、１／２ＭＳ、改良１／２ＭＳ（１／２ＭＳ大量，２倍ＭＳ铁 盐）３种培养基。从附加不同浓度ｚ—ｉｐ（５、１０、１５、 ２０ ｍｇ／Ｌ）和ｚＴ（３、５、１０ ｍｒ，／Ｌ）的培养基中筛选出 最适宜的丛生芽诱导和增殖培养基。培养基中添加 蔗糖３０ ｇ／Ｌ，琼脂７ ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．３左右。培养基在 最好，而在ＭＳ及１／２ＭＳ培养基上所生长的外植体 １２１℃、１３１ ｋＰａ的条件下灭菌２０ ｍｉｎ，接种后在温 表现为淡黄色，芽分化和增殖生长较差。所有供试 度为（２５±２）℃、光照强度为１ ２００ ｌｘ左右、光暗周 蓝浆果品种在改良１／２ＭＳ培养基上的成活率均达 期１６ ｈ／８ ｈ的条件下培养。 到９０．０％以上。 １．２．３生根培养剪取１—２ ｅｍ的无菌苗新梢，接 ２．３适合不同蓝浆果品种离体微繁的培养基筛选 种到添加ＩＢＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ的改良１／２ＭＳ培养基上进 蓝浆果品种不同适宜它们生长的培养基也不 行生根培养，先暗培养１周，然后转移到光暗周期为 同。从表２中可以看出，粉蓝品种在添加了不同浓 １６ ｈ／８ ｈ条件下培养，３个月后统计生根率。 度ｚＴ（３、５、１０ ｍｒ，／Ｌ）的改良１／２ＭＳ培养基上诱导 ２结果与分析 丛生芽，结果差异显著，在添加ｚＴ ３ ｍｇ／Ｌ的改良 １／２ＭＳ培养基上可以长出新生枝，长势最好，丛生芽 ２．１ 蓝浆果无菌苗的获得 的诱导和增殖最多，成活率可达到１００％。而当ｚＴ ６个供试蓝浆果品种迪克西、赫伯特、大达柔、 为５、１０ ｍｒ，／Ｉ 时接种的外植体全部死亡，并不能诱 伯克利、蓝丰和粉蓝的外植体初代培养后均获得了 导出丛生芽。蓝丰和伯克利分别在添加ｚ—ｉｐ ５ 一些成活植株，长势最好的是兔眼蓝浆果品种粉蓝。 ｍｇ／Ｌ和１０ ｍｇ／Ｌ的培养基上丛生芽诱导和增殖效 在继代培养过程中，伯克利、蓝丰和粉蓝的丛生芽增 果最好。 表１ 不同基本培养基对蓝浆果不同品种初代培养成活率的影响 蓝丰 粉蓝 激素 ， 成活数 成活率（％） 成活数 成活率（％） ５ ３０ １１ ３６．７ ２６ ８６．７ １０ ３０ ２７ ９０．０ ９ ３０．０ １５ ３０ １４ ４６．７ １１ ３６．７ ２０ ３０ １３ ４３．３ １２ ４０．０ ３ ３０ ３０ １００ ５ ３０ ０ ０ １０ ３０ ０ ０ ２．４不同蓝浆果品种的继代培养 ｃｍ茎段新梢接种在含有ｚＴ ３ ｍｇ／Ｌ的继代培养基 以兔眼蓝浆果品种粉蓝的茎尖和含单芽茎段为 中，培养５周后，可分化出ｌ５～３０个丛生芽，增殖倍 外植体，接种在改良Ｉ／２ＭＳ＋ｚＴ ３ ｍｇ／Ｌ诱导培养 数可达１５～３０倍。另外，２个北高丛蓝浆果品种蓝 基上，１周后开始萌发，４周后芽长成６～８ ｔｉｌ的新 丰和伯克利分别在添加ｚ—ｉｐ ５、１０ ｍｇ／Ｌ的培养基 梢，侧芽同时也萌发出４—６个丛生芽。剪取１～２ 上培养５周后，增殖倍数均可达４０～５０倍。 维普资讯 http://www.cqvip.com
刘捷等：蓝浆果的组织培养及离体微繁技术研究 一１０３— ２．５ 蓝浆果无菌苗的生根及炼苗 剪取１～２ ｃｍ的无菌苗新梢，接种到生根培养 基上。先暗培养１周，然后转移到光暗周期为１６ １１／８ ｈ条件下培养，３个月后统计生根率。结果发 现，蓝浆果供试品种的生根率可达１００％。因蓝浆 果组培苗小而弱，根纤细，移栽较其他植物组培苗困 难。移栽成活的关键是小环境保湿和基质通气性 好，以保证小檀株不失水和根的再生长。试验证明， 使用通透性好的基质并且保持小环境的空气湿度， 是保证蓝浆果组培苗移栽成活的关键。本试验采用 １：１的泥炭与珍珠岩做基质，移栽已生根的组培苗 小植株，移栽后用小拱棚封闭保湿４０ ｄ以上，以后 逐渐通风，降低棚内空气湿度，小植株成活率可达 ６０％以｝＝ ３讨论 本研究中选用了３种基本培养基，其中改良 １／２ＭＳ培养基最适宜。选择改良１／２ＭＳ培养基，即 ＭＳ大量减半，铁盐加倍，是依据越橘属局限于酸性 土壤中分布的特性。分析其中的主要原因可能是， 在ｐＨ值高的土壤中越橘属植物不能充分利用土壤 中的Ｆｅ而发生Ｆｅ的失调，其他如Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｕ等也 可能不足，因为这些元素的可溶性随着ｐＨ值的上 升而下降，在ｐＨ值６．５条件下Ｍｎ和Ｆｅ不足是其 生长受抑制的主要原因。蓝浆果能够积累，或者说 能够忍耐土壤中较高的Ｍｎ和Ａｌ含量，但如果吸收 了过多的ｃａ和Ｎａ盐，则会引起Ｎ过高，而使生长 势削弱。Ｃｒｅｅｃｈ等发现，当灌溉水中的Ｎａ 浓度达 到５０ ｍｇ／Ｌ时，就会对兔眼蓝浆果有害ｕ 。与Ｍｓ、 １／２ＭＳ培养基相比，供试蓝浆果品种在改良１／２ＭＳ 培养上的成活率均在９０．０％以上。Ｃｏｈｅｎｎ和Ｅｌｌｉｏｔ 以高丛蓝浆果新芽上取的单节茎为外植体，培养在 含１／４ＭＳ矿物质浓度、０．０２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ和ＬＳ培养 基的维生素浓度的培养基上获得成功。后来又发现 １／２ＭＳ矿物质浓度优于１／４ＭＳ，而且，在不含萘乙酸 的培养基上生长更好。Ｃｈａｎｄｌｅｒ和Ｄｒａｐｅｒ用ｚＴ代 替Ｚ—ｉｐ使不定芽诱导率提高２～４倍 。本试验 结果显示，在添加不同浓度ｚ—ｉｐ和ｚＴ的改良 １／２ＭＳ培养基可以成功地诱导一些蓝浆果品种的生 长。据报道，蓝浆果在试管内生根较慢，且生根率 低，在１／２ＷＰＭ添加ＩＢＡ的培养基中，培养２０ ｄ生 根率还不到１０％，培养４０ ｄ后生根率也仅３０％～ ７０％。黑暗条件下预培养１～２周，可以提高生根 率 ｊ，本试验结果证实了这一点。蓝浆果生根非常 缓慢，而且生出的根很细。不过，在添加ＩＢＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ的改良１／２ＭＳ培养基上生根３个月后，蓝浆果 的生根率可以达到１００％。 国内外蓝浆果离体微繁研究中所用的细胞 素多为ｚ—ｉｐ、玉米素核苷和ＴＤＺ，蓝浆果的组织培 养基本培养基均以改良的ＷＰＭ最好 ，而本研究 以改良１／２ＭＳ为基本培养基，供试品种在添加了不 同浓度ｚ—ｉｐ和ｚＴ的适宜它们生长的培养基上，均 能大量增殖。研究蓝浆果组织培养离体微繁技术可 以为蓝浆果的工厂化育苗和商品化建设奠定技术 基础。 参考文献： ［１］修英涛，常风英，姜河，等．我国蓝莓（越橘）栽培研究现状及 发展措施［Ｊ］，辽宁农业科学，２００３（３）：２１—２３， ［２］刘庆忠，赵红军，郑亚芹，等．高灌蓝莓微体繁殖技术研究初报 ［Ｊ］．落叶果树，２００１（５）：１—３． ［３］孙贵宝．浅谈欧美及日本等国蓝莓栽培的立地条件［Ｊ］，北方园 艺，２００６（４）：１０３—１０５ ［４］苑兆和．世界蓝莓生产历史与发展趋势［Ｊ］．落叶果树，２００３ （１）：４９—５２． １５］Ｙｕ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｃ Ｙ，Ｙｉｎ Ｇ Ｕ，ｅｌ ａｌ，Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｂｌｕｅｂｅｎ＇ｙ ｇｒｏｗｉｎｇ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔ， ２００５，１４（２）：４２—４８， ［６］朱忠荣，聂飞，兔眼蓝浆果组织培养研究初报［Ｊ］．贵州林业 科技，２００３，３１（４）：２０—２２， ［７］Ｒｏｗｌａｎｄ Ｌ Ｊ，Ｏｇｄｅｌｌ Ｅ Ｌ，Ｕｓｅ ｏｆ ａ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｆｏｒ ｅｆｉｆｃｉｅｎｔ ｓｈｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ［Ｊ］，Ｈｏｌｔ－ ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２７（１０）：１１２７—１１２９， ［８］Ｄｗｅｉｋａｔ Ｍ，Ｌｙｒｅｎｅ Ｐ Ｍ，Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｓｈｏｏｔｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］，Ｈｏｒｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２３：６２９． ［９］Ｃａｏ Ｘ，Ｈａｍｍｅｒｓｃｈｌａｇ Ｆ Ａ，Ｄｏｕｇｌａｓ Ｌ Ｉ．Ａ ｔｗｏ—ｓｔｅｐ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｓｈｏｏｔ ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｈｉｇｈ ｂｕｓｈ ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ ＣＶ，Ｂｌｕｅｃｒｏｐ［Ｊ］，Ｈｏｒｔｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，３７（５）：８１９— ８２ｌ， ［１０］Ｌｙｒｅｎｅ Ｐ Ｍ，Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｅｙｅ ｂｌｕｅｂｅｒｒｉｅｓ［Ｊ］，Ｈｏｒｔ－ ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８０，１５（１）：８０—８１， ［１１］刘树英，张志东，吴林，等．兔眼越桶芽增生诱导培养基及激 素的筛选［Ｊ］，吉林农业大学学报，２００２，２４（１）：５５—５７， ［１２］王侠礼，钟士传，琴亚琴，等，美国高灌蓝浆果的引进及微体快 繁技术的研究［Ｊ］．中国种业，２００３（１２）：４０—４１． ［１３］刘庆忠，赵红军，高灌蓝浆果的组织培养及快速繁殖［Ｊ］．植物 生理学通讯，２００２，３８（３）：２５３． ［１４］顾姻，贺善安．蓝浆果与蔓越橘［Ｍ］．北京：中国农业出版 社，２００１：２５２． ［１５］陈慧都，郝瑞，关爱军，等．越桶工厂化育苗研究［Ｊ］，中国农 业科学，１９９０，２３（３）：４－４—５Ｏ．
