地龙颗粒剂的制备工艺及质量初步评价

倪妮;马格非;杨晔

【摘 要】优选地龙最佳提取工艺,制备地龙颗粒剂,并对地龙颗粒剂质量进行初步评价。正交试验法优选出地龙药材最佳提取工艺条件,湿法制得地龙颗粒,并对颗粒质量进行了初步评价。地龙药材最佳提取条件：加10倍量水,浸泡40 min,煎煮30 min；以淀粉(m)：糊精(m)：10%淀粉浆(V)：地龙提取浓缩液(1 g生药/mL)(V)=7：3：1：1为条件,制备地龙颗粒。结果表明该提取方法操作简单,制备的颗粒剂流动性好,不易吸湿,方便保存。%The extraction process of lumbricus was optimized to prepare lumbricus granules, and the quality of granules was evaluated. Orthogonal test was used to select the best conditions of lumbricus extraction, lumbricus granules were prepared by wet granulation technique. The quality of granules was preliminary evaluated. The optimal extraction process was as follows:the lumbricus was soaked with 10 times amount of water for 40 min, then decocted for 30 min. The prescription of lumbricus granules contained starch, dextrin, 10% starches, lumbricus extraction (1 g crude drug/mL) with ratio of 7:3:1:1 ( w/w/V/V) . Those results indicated that the extraction method was simple and the lumbricus granules had good flowability and low moisture absorption.

【期刊名称】《广州化工》

【年(卷),期】2016(044)019

【总页数】4页(P80-82,100)

【关键词】地龙;正交实验;颗粒;质量评价

【作 者】倪妮;马格非;杨晔

【作者单位】安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230032;安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230032;安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230032

【正文语种】中 文

【中图分类】R944.2+7

地龙(Lumbricus)为我国传统动物药材，其性寒、味咸，归肝、肺、膀胱经，具有清热定惊、平肝息风、平喘、通络[3]。现代药理研究表明地龙具有止咳平喘、调节免疫、抗肿瘤、抗炎、降血脂、降压、抗心律失常、抗凝血、溶血栓等功效[2]。地龙的临床给药方式多为以饮片为原料的汤剂。而饮片由于产地、采收、季节、炮制等原因易造成质量不稳定，从而影响临床药效。同时，饮片需要煎煮，对于现在快节奏的生活方式显得不相适应[3]。本研究通过正交实验法得到地龙最佳提取工艺条件，以该条件提取获得地龙提取液并浓缩，以湿法制得地龙颗粒，最后对地龙颗粒进行流动性、堆密度、吸湿性等进行评价。

1.1 仪 器

烘箱202-1A型，上海阳光实验仪器有限公司；电子天平AR2202CN型，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；D-37520 Osterode 低温高速离心机，德国赛默飞世尔科技公司；757分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；TH恒温恒湿试验箱，东莞市泓进仪器检测有限公司。

1.2 药品与试剂

地龙，安徽中医药大学第一附属医院，批号 20151117，经安徽中医药大学刘守金教授鉴定为地龙(Lumbricus)干燥体；磷酸，上海苏懿化学试剂有限公司；考马斯亮蓝G-250，天津市光复细化工研究所；淀粉、糊精，江苏强盛化工有限公司；正丁醇，天津市光复细化工研究所。

2.1 测定方法

2.1.1 蛋白质含量测定方法(考马斯亮蓝法)[4]

精密吸取100 μg/mL牛血清蛋白标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加蒸馏水将终体积补足至1.0 mL，加考马斯亮蓝G-250溶液5.0 mL，混合均匀，以蒸馏水为空白，595 nm 处测吸光度，以蛋白浓度(C)对吸光度值(A)进行回归处理，得回归方程：A=0.006 C+0.107(R2=0.999)，蛋白浓度在20～100 μg/mL间呈良好线性关系。

2.1.2 提取率计算

精密吸取样品液50 mL至干燥蒸发皿中，蒸干，105 ℃干燥5 h，移至干燥器中冷

却30 min，称重，按药材量计算得率。

2.2 正交实验

根据相关文献报道可知影响地龙蛋白提取的主要因素有加水量、浸泡时间、煎煮时间[5-6]。通过单因素预实验确定各因素影响地龙药材提取有意义的水平，进行正交实验[7]。

按表1正交因素水平设计L9(34)正交实验，结果见表2。以蛋白含量和出膏率为指标，对结果进行方差分析[8]。

2.3 地龙药材提取浓缩液的制备

地龙药材剪碎，打粉，称取地龙药材粉末50 g，加10倍量水，浸泡40 min，煎煮30 min，5000 rpm离心10 min，合并上清液，水浴加热浓缩至50 mL，得地龙提取浓缩液。4 ℃保存，备用。

2.4 地龙药材配方颗粒制备

2.4.1 辅料种类的筛选[9]

目前常用的辅料有淀粉、糊精等，本实验考察了淀粉、糊精两种单一辅料及淀粉和糊精(1:1)的混合辅料，分别将三种辅料与地龙提取浓缩液以2:1(w:V)比例混合，在相对湿度75% 条件下测定吸湿百分率。

2.4.2 辅料比例的优化

为优化淀粉和糊精的比例，将二者以不同比例混合，与地龙提取浓缩液以10 :1混匀，计算24 h吸湿百分率。

2.4.3 黏合剂用量选择[10]

本实验选淀粉浆作为黏合剂，取相同地龙提取浓缩液及辅料，分别与不同体积10% 淀粉浆混匀，制软材，过16目筛，50 ℃干燥30 min，整粒，能通过10目筛且不能通过12 目筛的颗粒为成品，以颗粒得率选择10% 淀粉浆用量。

2.4.4 颗粒中总蛋白含量测定

称取地龙干燥颗粒1.030 g，加5 mL蒸馏水，使溶解，取上清液1 mL，加考马斯亮蓝溶液5 mL，混合均匀，595 nm波长处测 定吸光值。

2.4.5 地龙颗粒鉴别

取地龙药材粉末1 g，加水10 mL，加热至沸，放冷，离心，取上清液作为对照品，另取地龙药材颗粒，以相同方法制备供试品，吸取上述2种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇:冰醋酸:水(4:1:1，V : V: V)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰(2015版《中国药典》一部地龙药材项下鉴别方法)。

2.5 地龙颗粒一般检查

2.5.1 流动性的考察

以测定休止角方法(2015版《中国药典》 4 部附录Ⅺ ⅩC 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则)考察颗粒的流动性，实验重复5次，休止角越小，颗粒均匀性越好。

2.5.2 堆密度的考察

取颗粒4.0 g，置10 mL量筒中，手持量筒于5 cm高度落在木板上，反复5次振动后，测药粉的容积，计算堆密度。堆密度越大，颗粒的均匀性越好。

2.5.3 吸湿性实验考察

将地龙颗粒平铺于干燥的称量瓶中，厚约2 mm，在相对湿度75%条件下按照吸湿性测定方法(2015版《中国药典》4 部附录Ⅺ ⅩC 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则)，分别测定2、8、24、48、58、82、106、130 h颗粒吸湿百分率。

3.1 地龙提取工艺正交实验结果

由极差分析可知，各因素对地龙药材提取的影响为：煎煮时间(B)>浸泡时间(C)>加水量(A)；由方差分析结果可知，各因素对药材提取的影响没有显著性差异；综合考虑，选择A2B1C2， 即加水量为10倍，煎煮时间30 min，浸泡时间40 min为最佳提取条件。且通过对该提取条件的验证，结果发现该方法重复性好，稳定性高。

3.2 地龙颗粒辅料种类筛选结果

由图1可以看出，混合辅料与单一辅料糊精相比，可降低吸湿率。从降低吸湿性和经济角度考虑，选择糊精:淀粉(1:1)的混合辅料。

3.3 辅料比例的优化结果

由表4可知，当糊精与淀粉以7:3比例混和，药粉吸湿性最小，故以此为糊精与淀粉混合辅料比例。

3.4 黏合剂用量实验结果

由表5可知，当加入黏合剂的量为500 μL，即药材提取浓缩液(V):黏合剂(V)为1:1 时，药材颗粒得率最高。

3.5 地龙颗粒总蛋白含量测定结果

由表6结果可知，1 g地龙药材颗粒至少含有蛋白成分0.2 mg，结合提取实验结果，可知1 g地龙药材颗粒相当于0.018 g地龙药材 。

3.6 地龙颗粒鉴别结果

由图2可知，地龙颗粒与原药材相比，在相应位置上，出现相同颜色斑点。

3.7 地龙颗粒一般性检查结果

实验结果表明：该颗粒休止角为(37.300±1.332)°，休止角小于 40°，颗粒流动性好，易于分装。堆密度为(0.453±0.010) g/mL，在相对湿度75%条件下放置130 h，吸湿增重为0.015%，说明颗粒吸湿性较低。

中药配方颗粒是以单味中药饮片为原料，经现代工艺提取，浓缩，干燥，制粒等工序精制而成的粉末或颗粒状制剂，供中医临床配方时使用，它是汤剂与饮片结合的最佳体现，既保留了饮片原有的性、味，又融入了汤剂的随症加减性质，更重要的是符合当代人们快节奏的生活方式。

本实验主要研究了地龙药材提取工艺颗粒制备工艺，并对颗粒质量进行了初步评价。地龙颗粒提取工艺路线的选择是依据地龙传统水煎的临床应用方式，并综合有效成分、剂型需要以及生产可行性和生产成本等多方面考虑的结果。在提取工艺研究中，以蛋白含量、提取率为评价指标，优选出最佳地龙提取条件，既保留了地龙药材原有的性质，又充分体现了现代中药新制剂研究的科学性。从地龙颗粒质量标准检查结果可以看出，颗粒大小均匀，流动性好，且不易吸湿，质量稳定，易于保存；与药材相比，较完备的保留了主要成分，且可以定量检出。

本实验结果表明，地龙颗粒剂和原有汤剂的比较，具有质量稳定、易于保存、服用方便、服用量减少等优点，并且其制备工艺简单，适合于放大生产。

【相关文献】

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[3] 周仕川.杏葶颗粒制备工艺及质量标准研究[D].成都:成都中医药大学,2012.

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