第４９卷第１期 ２０１０年１月 湖北农业科学 Ｈｕｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｖｏ１．４９ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．，２０１０ 猪圆环病毒的研究概况 刘 萍，陈苗苗，杜 平，马全英，刘学荣，牟克斌，黄银君 （中农威特生物科技股份有限公司，兰州 ７３００４６） 摘要：猪圆环病毒（ＰＣＶ）为圆环病毒科成员之一，可引起多种临床疾病，包括断奶仔猪多系统衰竭综合 征（ＰＭＷＳ），猪皮炎肾病综合征等。随着规模化养殖业的不断发展，由ＰＣＶ一２引起的疫病呈上升趋势，给 全世界齐猪业带来了巨大的经济损失 为了探讨有效控制本病的方法．特对该病的病原学、分子生物学、 病毒复制的研究情况进行综述 关键词：猪圆环病毒；病原学：分子生物学；复制 中图分类号：￥８５８．２８ 中献标识码：Ａ 文章编号：０４３９—８１１４（２０１０）０ｌ一０２１５—０３ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ＬＩＵ Ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｍｉａｏ－ｍｉａｏ，ＤＵ Ｐｉｇ，ｎＭＡ Ｑｕａｎ－ｙｉｎｇ，ＬＩＵ Ｘｕｅ－ｒｏｎｇ，ＭＵ Ｋｅ—ｂｉｎ，ＨＵＡＮＧ Ｙｉｎ－ｊｎｉｌ （Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００４６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ（ＰＣＶ）ｈａｓ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｐｒｅｖａｉｌｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｖｅＥａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ，ｓｕｃｈ ａｓ ｐｏｓｔ— ｗｅａｎｉｎｇ ｍｕｈｉｓｙｓｔｅｍｉｃ ｗａｓｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＰＭＷＳ）ａｎｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ａｎｄ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＰＤＮＳ）．Ｉｔ ｃａｕｓｅｄ ｅｎ０ｒ－ ／／Ｉｏｎｓ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｌｏｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ｐｉｇ ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｆｏｒ ｓｔｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｖａｌｉｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｉｔｓ ｅｔｉｏｌｏｇｙ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ；ｅｔｉｏｌｏｇｙ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ；ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ 猪圆环病毒ｆＰｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ．ＰＣＶ）是已知最 小的能在哺乳动物细胞中自行复制的病毒．它是一 种无囊膜、共价闭合、负股、单链ＤＮＡ病毒。它主要 １ ＰＣＶ的病原特征 猪圆环病毒（ｐｃｖ）是无囊膜单股环状ＤＮＡ病 感染单核／巨噬细胞系细胞．其中猪的肺泡巨嗜细 胞是其主要的靶细胞… ＰＣＶ分为ＰＣＶ一１和ＰＣＶ一２ 毒，属圆环病毒科圆环病毒属成员 猪圆环病毒 （ＰＣＶ）是无囊膜二十面体病毒粒子，直径为１７ １３１３３． 两种血清型＿２＿ ＰＣＶ一１是Ｔｉｓｃｈｅｒ等从猪肾细胞株 ＰＫ一１５的污染物中分离得到．没有致病性．不能引 是目前已知猪病原微生物中最小的 病毒粒子在 ＣｓＣ１中的浮密度为１．３７ ｇ／ｍＬ．沉降系数为５２ｓＴＭ． 对外界环境的抵抗力较强．在酸性环境中及氯仿中 可以存活较长时间。ＰＣＶ不能在原代胎猪肾细胞、 恒河猴肾下细胞、ＢＨＫ一２１细胞上生长，能够在肺泡 起细胞病变．猪体接种该病毒后不表现任何临床症 状和病理变化 研究表明．ＰＣＶ一２与猪群中发生的许多新传染 病密切相关．包括断奶仔猪多系统衰竭综合征 （ＰＭＷＳ）、猪皮炎肾病综合征（ＰＤＮＳ）、猪呼吸道综 巨噬细胞以及ＰＫ一１５细胞上生长．但在ＰＫ一２１细 胞上不引起细胞病变 合征（ＰＲＤＣ）及Ａ２型先天性震颤（ＣＴ）等，已给各国 养猪业造成严重的经济损失 近年来．ＰＣＶ一２与其 ２病毒的分子生物学 ２．１基因组结构 他细菌性或病毒性病原的混合感染越来越普遍．并 引起更为严重的临床疾病．造成了更为惨重的经济 损失。另外由于缺乏有效的药物与疫苗和对其致病 ＰＣＶ的基因组为单链环状ＤＮＡ分子．ＰＣＶ—ｌ 基因组大小为１ ７５９ｂｐ．包含７个编码蛋白大于 ５ｋＤａ的开放阅读框（ＯＲＦ） 。ＰＣＶ一２基因组大小为 １ ７６８ｂｐ（或１ ７６７ｂｐ）。包括１１个编码蛋白为２ 机理的了解，目前国内外对ＰＣＶ及其相关疾病的防 治还没有很好的办法 收稿日期：２００９—１０—１５ 作者简介：刘（１９７９一），女，山东单县人，研究实习员，主要从事分子生物化学及病毒学（电话）１３９ｌ９Ｏ９２ｏ２ｌ（电子信箱）ｌｊｕｐ６１０＠１６３．ｃ０ 。 ，２１６ 湖 北 农 业 科 学 ２０１０年 ３６ｋＤａ的开放阅读框 ．也有报道认为它含有６个 开放阅读框，其中位于正链上的最大开放阅读框架 ＯＲＦＩ编码与病毒复制有关的蛋白（Ｒｅｐ）．位于负链 上的ＯＲＦ２编码病毒的结构蛋白（ＣａＤ）。 ＰＣＶ一１和ＰＣＶ一２各自毒株之间的基因组序列 同源性都在９０％以上．其中ＰＣＶ一２毒株之间ＯＲＦ１ 的同源性为９７％～１００％．其编码氨基酸的同源性也 为９７％ １００％，而ＯＲＦ２的同源性为９１％ １００％．其 编码氨基酸的同源性为８９％～１００％ ＰＣＶ一１和 ＰＣＶ一２毒株之间基因组序列同源性则在６８％～７６％ 之问．但在基因组的不同部位其同源性不尽相同． 由ＯＲＦ１编码的Ｒｅｐ蛋白高度保守，其氨基酸的同 源性为８５％，由ＯＲＦ２编码的ＣａＤ衣壳蛋白则相对 较低．其同源性为６５％ ： 研究表明．在ＰＣＶ的Ｒｅｐ和ＣａＰ两个主要蛋 白之间有一条回纹序列，形成发卡结构（ＳｔｅＩｌｌ—ｌ０ｏｐ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ），在该结构中有一保守的九聚体（５＂－ＴＡＧ— ＴＡ＇Ｉ３＂ＡＣ）．同时ＣＧＧＣＡＧＣＧＧ／ＴＣＡＧ在该序列中重 复出现了两次．因此该序列是启动复制蛋白的结合 位点．Ｍａｎｋｅｒｔｚ等对ＰＣＶ一１的研究也表明了它的 复制启始点在一个ｌｌ １ｂＤ长的片段上（核苷酸７２８— ８３８ｂｐ）。另外．最近研究发现ＰＣＶ一２的ＯＲＦ３与病 毒引起的细胞凋亡有关．对ＯＲＦ３的功能研究渐成 热点－９ １。 ２．２编码蛋白与功能 ２．２．１ ＲｅＰ基因 ＲｅＰ蛋白与病毒基因组的滚环复 制相关Ｎｏ１．由ＰＣＶ最大的开放阅读框ＯＲＦＩ编码． 分子量为３５．６ＫＤａ（ＰＣＶ—１）或３５．８ＫＤａ（ＰＣＶ一２），由 ３１２ａａ（ＰＣＶ—１）或３１４ａａ（ＰＣＶ一２）组成Ｆ３ ３。ＰＣＶ一１与 ＰＣＶ一２相比较，Ｒｅｐ蛋白氨基酸序列同源性达 ８６％．这也是２种血清型ＰＣＶ病毒产生抗原交叉性 的主要原因所在 ＰＣＶ一１ Ｒｅｐ蛋白仅有一个糖基化 位点，位于２０—２２ａａ（ＮＰＳ）；ＰＣＶ一２ Ｒｅｐ则有３个糖 基化位点，２２３—２２５ａａ（ＮＰＳ）、２５６—２５８ａａ（ＮＱＴ）及 ２８６—２８８ａａ（ＮＡＴ）。Ｒｅｐ蛋白具有与典型滚环复制 （ＰＣＲ）相关的３个保守基序Ｉ（ＦＴＬＮＮ）、ＩＩ（ＨＬＱＧ）、 ＩＩＩ（ＹＣＳＫ）以及结合ｄＮＴＰｓ的Ｐ环ｆＰ～ｌＯ０Ｄ）结构（序 列为Ｇ—ＧＫＳ）．这些结构对于维持Ｒｅｐ蛋白的功能 至关重要．突变或缺失均会影响病毒的复制１１，这 也进一步证明ＰＣＶ病毒ＤＮＡ进行滚环式复制。 Ｒｅｏ蛋白在所有圆环病毒中相对保守，而且与植物 病原的Ｎａｎｏｖｉｒｕｓ及Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ的Ｒｅｐ蛋白具有同 源性 对ＰＣＶ一１感染细胞进行转录分析表明，ＰＣＶ一 １的Ｒｅｐ基因转录出２种ｍＲＮＡ（分别长１ ２５０ｎｔ和 ７５０ｎｔ）：一个编码３ｌ２氨基酸的Ｒｅｐ蛋白，另一个转 录子被剪接．编码１６８氨基酸的Ｒｅｐ，蛋白剪切引起 了Ｒｅｐ’蛋白的Ｃ端发生移码与原来的Ｒｅｐ基因序 列不同。ＰＣＶ～ｌ病毒的复制需要Ｒｅｐ与Ｒｅｐ’蛋白的 共同参与［１２１。２种蛋白均结合于包含有复制起点的 一段双链ＤＮＡ（病毒核酸的复制中间体为双链）．而 且它们均无结合单链ＤＮＡ（负链亦或正链）的活性＿１３］ Ｃｈｅｕｎｇ Ｅ“ 对ＰＣＶ一２病毒进行转录分析发现．ＰＣＶ一２ 体外感染ＰＫ一１５细胞后生５种ＲｅＤ相关的 ｍＲＮＡｓ，分别命名为Ｒｅｐ（１ Ｏ００ｎｔ），Ｒｅｐ’（７５０ｎｔ）， Ｒｅｐ３ａ（２８０ｎｔ），Ｒｅｐ３ｂ（２８０ｎｔ）和Ｒｅｐ３ｃ（４７０ｎｔ），这些 ＲＮＡ具有相同的５’和３’端核苷酸序列 Ｒｅｐ ｍＲ。 ＮＡ可能是初始转录物．然后通过不同的剪接方式 产生其他４种ｍＲＮＡ 根据推导的氨基酸序列比较 和试验结果证明，ＰＣＶ一２的Ｒｅｐ、Ｒｅｐ’蛋白与ＰＣＶ一 １的两种蛋白相当．也与病毒ＤＮＡ的复制密切相 关．其余ｍＲＮＡ的功能尚不清楚 ２．２．２ Ｃａｐ基因 ＣａＤ蛋白为病毒的主要结构蛋 白．构成病毒的核衣壳．由病毒基因组中ＯＲＦ２编 码．在病毒感染细胞后在宿主各种酶的参与下产 生 ＣａＰ蛋白Ｎ端基因序列较保守．在１ ２３８ｎｔ的位 置起始转录．转录子是一个１１９ｎｔ的非翻译引导序 列，启动子在 ｅｐ基因内部的１ ４２８ １ １６８ｎｔ Ｆ￣ ，Ｃａｐ 基因启动子的调节作用还不清楚 ＰＣＶ—ｌ与ＰＣＶ一２的ＣａＤ蛋白氨基酸同源性仅 为大约６４％ ２种病毒的ＣａＤ只有单一的糖基化位 点．分别位于ＰＣＶ一２ Ｃａｐ的１４３～１４５ａａ（ＮＹＳ）及 ＰＣＶ一１的１０２～１０４ａａ（ＮＹＳ）。多肽扫描（ＰＥＰＳＣＡＮ） 显示．ＰＣＶ一１与ＰＣＶ一２的Ｃａｐ蛋白上共同的抗原 决定簇．但血清学实验却显示．两种血清型的Ｃａｐ 蛋白没有抗原交叉．ＰＣＶ一２的Ｃａｐ蛋白抗体（或抗 原）不能与ＰＣＶ一１ Ｃａｐ蛋白（或抗体）发生反应，通 过电镜扫描还发现．ＰＣＶ一２ ＣａＰ蛋白上存在３个特 有的抗原位点（６５—８７ａａ，ｌ１３—１３９ ａａ，１９３—２０７ａａ）， 这为建立特异检测ＰＣＶ一２的血清学方法奠定了基 础 软件分析分子量为２７．８ｋＤａ．然而试验报道的分 子量则差异很大 Ｃａｐ蛋白Ｎ端富含碱性氨基酸 （如精氨酸），与蛋白的核内定位有关。Ｌｉｕ 等对 ＰＣＶ一２ ＯＲＦ２基因（即Ｃ即基因）进行一系列突变 表明，Ｃａｐ蛋白的核内定位与其Ｎ端的４１个氨基 酸密切相关：进一步研究发现，位于１２一ｌ８位及３４— ４ｌ位的氨基酸对ＣａＤ蛋白的核内定位起决定性的 作用 Ｎａｗａｇｉｔｇｕ Ｌ” 和Ｐｏｍｔｉｐｐａｔ 等将ＰＣＶ一２ ＯＲＦ２ 基因在昆虫细胞中表达．经测定表达的蛋白分子量 为３０ｋＤａ．将该表达蛋白纯化经电镜负染观察可见 病毒颗粒．而且这种颗粒的密度比ＰＣＶ一２病毒离子 的密度要低．但形态与病毒粒子相似，其直径也为 １７ｎｍ左右．通过免疫电镜观察发现：这种衣壳样颗 第１期 刘萍等：猪圆环病毒的研究概况 ２１７ 粒就是ＯＲＦ２表达蛋白组装而形成的衣壳样结构， 从而证实了Ｃａｐ基因编码的蛋白是ＰＣＶ一２的主要 Ｒｅｐ’蛋白都可结合包括结构蛋白（Ｃａｐ）启动结合 区．但是只有全长的ＲｅＰ蛋白可以被阻遏，而剪切 结构蛋白 另外，由于Ｃａｐ基因是病毒中惟一容易 变异的基因．因此它可能影响ＰＣＶ一１和ＰＣＶ一２的 致病性．如改变ＰＣＶ一２在宿主细胞中的趋向性和病 异构体不能被阻遏。研究发现阻遏的调节是通过 ＲｅＤ蛋白与两个位于ＰＣＶ一１复制起始区的六聚体 Ｈ１和Ｈ２结合而发生的．不需要与六聚体Ｈ３和Ｈ４ 的参与 毒与细胞蛋白之间的相互作用 ２．２．３ ＯＲＦ３基因ＰＣＶ一２的ＯＲ乃长３１５ｎｔ．编码 １０４个氨基酸．同源性较高，达９４．５％。在ＰＣＶ～１， ＯＲＦ３长６１２ｎｔ．编码２０６个氨基酸。ＰＣＶ一１与ＰＣＶ一 ４ 结语 ＰＣＶ一２作为一种新发现的病毒．与其有关的疾 ２的ＯＲＦ３所编码的氨基酸同源性仅为大约 ６１．５％ 研究发现ＰＣＶ一２的ＯＲＦ３包含于ＯＲＦ１中， 但与病毒的复制却不相关．然而能引起细胞凋亡， 并与ＰＣＶ一２的致病机理有关＿ ｌ。 ３病毒的复制与转录 ＰＣＶ基因组复制采用滚环复制模式进行 病毒 在复制过程中首先产生双链的复制型中间体（ＲＦ）， 此复制型中间体ＤＮＡ的两条链都能进行基因转录 和蛋白质的表达 将两个ＰＣＶ一２全基因组串联入 ＰＳＫ载体．转染ＰＫＩ与细胞不会产生活的病毒粒 子．表明ＰＣＶ基因组首尾相连对病毒ＤＮＡ的滚环 复制是必不可少的 已有ＰＣＶ一１的部分转录图谱报道，通过 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析可从感染细胞中检到３个大小为 １ ２３０ｎｔ，９９０ｎｔ和７５０ｎｔ带Ｐｏｌｙ（Ａ）尾的病毒ＲＮＡ， 其中９９０ｎｔ的ＲＮＡ编码病毒衣壳蛋白 研究发现位 于病毒复制起始处有一段ｌ １１６ ｂｐ的ＤＮＡ片段 （７２８～８３８ｎｔ）．为启动滚环复的结合位点，在ＰＣＶ一１ 复制过程中 ｅｐ基因是必不可少，在尺８ 基因的４ 个保守序基元中截掉一段或导人突变位点均能导 致ＲｅＰ基因失活 月ｅｐ基因转录起始位点位于７６７＋ １／一１０ｂｐ处 Ｒｅｐ蛋白转录子中有一段为内含子 （１ １７６～１ ５５８ ｎｔ），此内含子如被剪掉，则会翻译出 一个较短的蛋白，被命名为Ｒｅｐ 蛋白，大小为 １９．２ｋＤ，由于读框移码．Ｒｅｐ’蛋白的最后４８个氨基 酸不同于全长的３５．８ＫＤ的Ｒｅｐ蛋白的Ｃ端．用 ＰＣＶ一１感染细胞或用带有Ｒｅｐ基因的质粒转染细 胞，均可通过实时ＰＣＲ检测到了尺ｅｐ和尺ｅｐ 基因 的转录ｌ２” 与其他滚环病毒复制不同．Ｒｅｐ蛋白不能 单独启动病毒复制，Ｒｅｐ和Ｒｅｐ’共同启动ＰＣＶ—ｌ 的复制。 研究发现，ＰＣＶ—ｌ的两个主要ＯＲＦ分别编码 复制起始蛋白（Ｒｅｐ，Ｒｅｐ’）和ＰＣＶ一１结构蛋白 （Ｃａｐ）；结构蛋白（Ｃ即）启动子基因位于１ ３２８一ｌ ２５２ｎｔ 处；复制起始蛋白（Ｒｅｐ）￣动子位于Ｒｅｐ基因（６４０ ７９６ｎｔ）的上游并与ＰＣＶ一１的复制起点重合。Ｒｅｐ， 病已经成为世界养猪业的重要传染病。给养猪业带 来巨大的经济损失 尽管世界许多实验室对ＰＰＶ和 ＰＲＲＳＶ与ＰＣＶ一２在致病方面的协同机制、该病毒 对其所导致的各种疾病及ＰＭＷＳ的人工复制等方 面进行了大量的研究，但对其分子生物学特性、病 毒对动物免疫系统的影响、致病机理、有效的防制 措施以及一些潜在的问题等方面仍然缺乏全面而 系统的了解 因此，还必须对这些方面进行更详细、 更深层的研究 由于该病毒较广泛地存在于猪体 内．与猪的健康密切相关．尤其是考虑可能用猪的 器官与人类进行异体移植时．更应当进一步加强对 此病原体的研究。另外，目前国内关于ＰＣＶ的分子 生物学和基因工程方面的研究鲜有报道．这也给国 内的兽医科技工作者提出了一个新的要求 参考文献： ［１］ＮＩＡＧＲＯ Ｆ Ｄ，ＦＯＲＳＴＨＯＥＦＥＬ Ａ Ｎ，ＬＡＷＴＨＥＲ Ｒ Ｐ，ｅｔ ａ１． Ｂｅａｋ ａｎｄ ｆｅａｔｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｍｅｓ： ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｅｓ￣Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ，１９９８，１４３（９）：１７２３－１７４４． ［２］ＭＡＮＫＥＲＴＺ，Ａ，ＨＩＬＬＥＮＢＲＡＮＤ，Ｂ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｅｏｖｉｎｍ ｔｙｐｅ １［Ｊ ３．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，２００２，８３（１１）： ２７４３－２７ １ ［３］ＬＩＵ，Ｑ，ＷＥＬＬＥＮＢＥＲＧ，Ｇ Ｊ，ＰＥＳＣＨ，Ｓ，ｅｌ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｅｉｒｅｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２ ｆｒｏｍ ｐｉｇ ｓｈｏｗｉｎｇ ｓｉｇｎｓ ｏｆ ｐｏｓｔｗｅａｎｉｎｇ ｍｕｈｉｓｙｓｔｅｍｉｅ ｗａｓｔｉｎｇｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ［Ｊ］．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ，２０００，２２（３）：１６７—１７２． ［４］ＭＥＥＨＮＡ ＢＭ，ＣＲＥＥＬＮＡ儿，ＭＣＮＥＩＬＬＹ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ：ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓ ｗｉｔｈ ｐｌａｎｔ ｅｉｒｃｏｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］． Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９７，７８（１）：２２１—２２８． ［５］ＨＡＭＥＬ ＡＬ，ＬＩＮ ＬＬ，ＮＡＹＡＲ ＧＰ．Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｅｏｖｉｒｕｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｓｔｗｅｎａｉｎｇ ｍｕｈｉｓｙｓｔｅｍｉｅ ｗａｓｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ，１９９８，７２（６）：５２６２—５２６７． ［６］ＭＥＥＨＡＮ ＢＭ，ＭＣＮＥＩＬＬＹ Ｆ，ＴＯＤＤ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｅｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｓｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ ｉｎ ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９８，７９（９）：２１７１—２１７９． ［７］ＡＮＤＲＥＷ Ｋ，ＣＨＥＵＮＧ．Ｔｍａｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｃｉｒ－ ｃｏｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２／Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００３，３０５：１６８—１８０． ［８］ＲＥＮ，ＬＡＲＯＣＨＥＬＬＥ，ＲＯＮＡＬＤ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｅｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２ （ＰＣＶ２）ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｃａｓｅｓ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｎｄｉ一 ｉ …・Ｇ。ｎ Ｖｉｍ ’ 。。 ’ 。， ０ 一¨ ’（下转第２３４页）
