双水相萃取的应用研究进展

第２８卷　第１期　２０１４钲　３月　齐鲁工业大学学报　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＱＩＬＵ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　Ｖｏ１．２８　Ｎｏ．１　Ｍａｒ．　２０１４　文章编号：１００４—４２８０（２０１４）Ｏ１—００２３—０５　双水相萃取的应用研究进展　姜秀敏　，卢艳敏　，张　雷　（１．齐鲁工业大学食品与生物工程学院，山东济南２５０３５３；　２．齐鲁工业大学体育与文化产业学院，山东济南２５０３５３）　摘要：双水相萃取是一种新型的用于提取、分离、纯化的技术，目前的研究证明双水相萃取已经应用于生物分子分　离、污水处理、贵金属分离、生物合成、检测等方面，而且由于其本身的易于扩大，成本低、快速、高效等优势，应用前　景会更加广阔。　关键词：双水相；提取；分离；纯化　中图分类号：ＴＳ２０２．３　文献标识码：Ａ　Ｔｈｅ　ａｐｐｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ＪＩＡＮＧ　Ｘｉｕ．ｍｉｎ　，ＬＵ　Ｙａｎ．ｍｉｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ　，ＴＡＮ　Ｃｏｎｇ—ｐｉｎｇ　，ＬＩＡＮＧ　Ｙａｎ　，ＣＵＩ　Ｂｏ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｌｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｎａｎ　２５０３５３，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｐｏｔｓ　ａｎｄ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｑｉｌｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｎａｎ　２５０３５３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｉｓ　ａ　ｎｅｗ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉ—　ｆｃａｔｉｏｎ．Ａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　ｐｒｅｖｉｏｕｓ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｅｐａｒａ—　ｔｉｏｎ，ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｅｃｉｏｕｓ　ｍｅｔａｌｓ，ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｔｃ．Ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ａｄ－　ｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｎ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｅｘｐａｎｄ，ｌｏｗ　ｃｏｓｔ，ｆａｓｔ　ａｎｄ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｆｏｎ　ｐｒｏｓｐｅｃｔ　ｗｉｌｌ　ｂｅ　ｍｕｃｈ　ｂｒｏａｄｅｒ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　双水相是指某些高聚物之间或高聚物与无机盐　之间在水中以一定的浓度混合而形成互不相容的两　量以及聚合物部分间的相互作用，聚合物混合物的　成相归因于聚合物的高分子量以及聚合物部分间的　相互作用；　１．２高聚物／无机盐双水相体系　相。由于溶质在两相间的分配系数的差异而进行萃　取的方法即为双水相萃取…．双水相萃取被广泛用　于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品　分离和提取中。　对于高聚物来说，使用较多的是ＰＥＧ，对于成　相盐来说，盐的类型和浓度都会影响成相，通常在单　一的聚合物一水体系中足够高浓度的盐能导致相分　的上相。　１双水相体系的分类　目前来说，双水相体系共分为五类：　１．１　高聚物／高聚物双水相体系　离，产生一个高盐低聚合物的下相和低盐高聚合物　１．３　亲水性低分子有机物／无机盐双水相体系　Ｃ２Ｈ５ＯＨ／Ｋ２ＣＯ３、１一ｐｒｏｐａｎｏ／（ＮＨ４）２ＳＯ４、２一　ＰＥＧ／Ｄｅｘｔｒａｎ，ＰＥＧ／￣基纤维素糖，ＰＥＧ／变性淀　粉等；聚合物混合物的成相归因于聚合物的高分子　收稿日期：２０１３—１０—２９　ｐｒｏｐａｎｏｌ／ｋ２ＨＰＯ４、ａｃｅｔｏｎｅ／ＮａＣｌ。目前对这一体系　的相分离现象的解释主要是无机盐、有机溶剂与水　基金项目：山东省高等学校科技计划项目（Ｊ１１ＬＣ１２）　作者简介：姜秀敏（１９８９一），女，山东省菏泽市人，齐鲁工业大学硕士研究生，研究方向：功能食品与食品添加剂　齐鲁工业大学学报　第２８卷　分子缔合竞争的结果ｌ２　Ｊ。　１．４表面活性剂双水相体系　正负离子表面活性剂双水相体系　Ｊ、非离子表　面活性剂双水相体系　和正离子型表面活性剂双　水相体系。　１．５　离子液体／盐双水相体系　２双水相萃取的应用　２．１　在生物大分子分离纯化方面的应用　蛋白质、酶、多糖、核酸等大分子物质可以利用　双水相进行分离、纯化，双水相体系由于其温和的特　性，能够保持酶本身应有的活性，所以利用双水相萃　取技术分离纯化酶得到广泛的应用。　Ａｍｉｄ等　人研究了利用表面活性剂／盐双水相　体系纯化鹊肾树叶中的丝氨酸蛋白酶，在提取条件：　３１％普朗尼克Ｌ６１，０．３％ＫＮＯ　，５０％原料提取液　（ｐＨ７．０）下，酶的纯化倍数和得率分别达到１０．３，　９２％。　Ｎａｎｄｉｎｉ等　人用ＰＥＧ６０００／Ｎａ２　ＨＰＯ４双水相对　脂肪酶进行提取，得出脂肪酶活性回收率是１１６％，　纯化倍数２．２５。　ＪｉａｎＭｉｎ　Ｘ等　人先用双水相在１８％　ＰＥＧ２０００，２５％硫酸铵，ｐＨ　３．０，０．３　Ｍ　ＮａＣ１的条件　下提取芦荟多糖，接着用膜超滤分离纯化芦荟多糖。　Ｌｏｃ等人　人首先利用４０％ＰＥＧ／１８％Ｋ３ＰＯ４　（ｐＨ７．０）双水相室温下纯化仅一淀粉酶，酶的分配得　率是９３．４５％，比活３６４．３６　Ｕ／ｍｇ蛋白，浓缩蛋白酶　的上相以７：３的体积比与３０％Ｋ　ＰＯ　混合，经过两　步纯化，酶的纯化倍数达到３．５６，回收率５９．３７％。　２．２在天然产物中提取小分子物质方面的应用　天然产物中存在许多对人体有益的活性小分子　物质，但是提取一直以来都是高投入低回收，目前许　多活性物质大多数是利用化学合成来满足人们的需　求，但是化学合成物质的效果和天然活性成分比，仍　有一定的差距，人们一直在寻找能够同时达到高提　取率和高纯度的方法，以降低成本。目前有很多关　于双水相分离纯化活性小分子的研究。　Ｔｉａｎｗｅｉ　Ｔ等　人用６０％（ｖ／ｖ）Ｃ２Ｈ５ＯＨ／１５％　（ｗ／ｖ）磷酸盐形成的双水相体系从乌拉尔甘草提取　液中分离甘草酸，在此条件下甘草酸的回收率为　９２％，纯化倍数２／６。　Ｇｕｏ等¨。。人用（ＮＨ４）２ＳＯ４／Ｃ２Ｈ５ＯＨ双水相体　系结合超声提取丹参中的紫草酸Ｂ，在最佳条件　２２％（ｗ／ｗ）（ＮＨ４）２ＳＯ４／３０％（ｗ／ｗ）Ｃ２Ｈ５ＯＨ、料液　比１０、超声功率５７２．１　Ｗ，超声时间４２．２　ｍｉｎ，　２５　ｑＣ，ｐＨ２．０下，紫草酸Ｂ的得率为４２．４９　ｍｇ／ｇ，纯　度达到５５．２８％（ｗ／ｗ）。　Ｃ１６ｕｄｉｏ等　人利用离子液体／无机盐双水相　体系从天然产物中提取没食子酸，结果表明，在低　ｐＨ下不带电荷的没食子酸趋向于离子液富集相，并　且在酸性条件下提取率得到提高。　Ｗｕ等¨　人通过响应面法优化双水相提取谷胱　甘肽，得出最优提取条件是：ＰＥＧ分子量６０００、１０％　ＰＥＧ、１４％Ｄｅｘｔｒａｎ、ｐＨ５．２、温度３２℃。此时，谷胱　甘肽的提取率高达８３．５５％。　Ｚｈａｎｇ等　人用阳离子（ＳＤＳ）和阴离子　（ＣＡＴＢ）表面活性剂双水相体系提取茶氨酸，在　ＳＤＳ／ＣＴＡＢ比值２．８／７．２时，茶氨酸提取率高达　９５．２％。　２．３在医药行业的应用　双水相体系不仅可以用于分离医药行业需要的　细胞，还可以用来高效的提取抗生素。抗生素不仅　能杀灭细菌，而且对支原体、衣原体等致病微生物也　具有良好的抑制及杀灭效果。所以双水相萃取技术　在医药行业得到广泛认可。　Ｓｏｕｓａ等　人利用免疫亲和性ＰＥＧ／Ｄｅｘｔｒａｎ双　水相体系从脐带血中分离造血干细胞／源细胞，针对　造血干细胞ＣＤ３４表面抗原的单克隆抗体用于直接　分离脐带血中的造血干细胞到ＰＥＧ相中，干细胞的　回收率达到９５％，纯化因子达到２４５。　刘庆芬等　研究表明亲水性离子液体１一丁基　一３一甲基咪唑四氟硼ＢＦ　和ＮａＨ　ＰＯ　形成的双水相　体系能够快速从青霉素水溶液中萃取青霉素Ｇ，最　佳条件为ＮａＨ　ＰＯ４・２Ｈ　Ｏ　３６％～３８％（ｗ／ｗ）、青霉素　浓度５００００　ｕｇ／ｍＬ、离子液４０％一４５％（ｖ／ｖ），萃取　率可高达９３．７％。　马春宏等　钊人用亲水性离子液体四氟硼酸１一　丁基一３一甲基咪唑（ＢＦ４）和ＮａＨ　ＰＯ　组成的双水　相体系萃取分离四环素，结果显示离子液体１。０～　２．０　ｍＬ，四环素１．８　ｍＬ，ＮａＨ２ＰＯ４质量分数３３．３％　～３８．５％下，四环素的萃取率高于９５％。　２．４在废水处理方面的应用　工厂排放的废水中往往既含有大量的对环境污　染性极大的物质，如酚类物质及一些镉等金属污染　物，也含有一些可以回收循环利用的物质，所以对废　水的处理意义重大，亟需一种快速高效的方法来解　决这些问题。近年来，很多研究者开始利用双水相　进行废水处理。　曹文等　人用正交实验优化１一ｐｒｏｐａｎｏｌ／　第１期　姜秀敏，等：双水相萃取的应用研究进展　（ＮＨ　）　ＳＯ　双水相体系去除医药、橡胶等行业生产　过程中排放的废水中的对氨基酚，得出最佳条件：１　－ｐｒｏｐａｎｏｌ　２０　ｍＬ、１５　ｇ（ＮＨ４）２ＳＯ４　ｐＨ４．５，连续萃取　３次，对氨基酚萃取率高达９９．４１％。　张焱等¨　人利用１－ｐｒｏｐａｎｏｌ／（ＮＨ　）２ＳＯ　双水　相体系除去电镀废水中镉缔合物。萃取原理是利用　Ｃｄ（ＩＩ）与乙基紫（ＥＶ）、ＫＩ缔合后，加入１一ｐｒｏｐａｎｏｌ一　水双水相体系萃取分离镉，无ＥＶ的情况下，镉的萃　取率只有６８％，而加入毫克级用量的ＥＶ后，镉能够　完全分离。　草甘膦废水是化工农药行业生产草甘膦粉剂、　水剂过程中排出的高浓度有机废水，其中笛有１％　～２％的草甘膦或其铵盐，接近饱和的ＮａＣ１及少量　三乙胺等胺类杂质　。余龙等　人利用草甘膦生　产废水中接近饱和的ＮａＣ１与１一ｐｒｏｐａｎｏｌ结合形成　双水相体系，以此达到分离富集草甘膦生产废水中　草甘膦铵盐的目的。最佳条件下，草甘膦铵盐双水　相萃取效率高达９０．７％。　２．５　在手性分子识别分离方面的应用　手性分子，是化学中结构上镜像对称而又不能　完全重合的分子。手性分子在药力、毒性等方面往　往存在差别，有的甚至作用相反，所以获得药物的单　一旋光手性化合物意义重大。目前，利用双水相分　离手性分子达到了较高水平。　王珍等　¨人用含手性选择剂Ｂ一环糊精的３０％　（ｗ／ｗ）ＰＥＧ　２０００／２０％（ｗ／ｗ）（ＮＨ４）２ＳＯ４双水相体　系手性萃取拆分扁桃酸外消旋体，结果表明双水相　体系具有很强的手性分离能力，最佳条件下分离因　子高达２．４６，上、下相对应体过剩值分别为４２．１３％　和４０．４３％。　Ｃｈｅｎ等　人用含有手性选择剂Ｂ一环糊精和　ＨＰ一１３一环糊精的ＰＥＧ／（ＮＨ　）　ＳＯ　双水相体系提取　苯丙氨酸对映体，在最优的手性提取条件下对映选　择性达到１．５３。最佳条件是：３０％ＰＥＧ２０００，２０％　（ＮＨ　）：ＳＯ　，手性选择剂（ｐ一环糊精：ＨＰ—ｐ一环糊精　＝１：１）浓度０．０１　ｍｏｌ／Ｌ，苯丙氨酸浓度３．０　ｍｏｌ／Ｌ，　温度２５℃，ｐＨ　５．５。　２．６在生物合成方面的应用　许多生物反应过程存在产物的反馈抑制高浓度　的产物抑制细胞的生长，降低生物催化剂的活　力　，目的产物往往和大量的底物、副产物混杂在　一起，反应体系的组成极其复杂，产物分离困难，分　离时间长，分离效率低，制约着生物技术产业化的快　速发展　Ｊ。双水相的出现帮助人们解决了这些复　杂的问题。　朱建航等　人利用双水相体系耦合酶法合成　头孢氨苄，最终选择２０％（ｗ／ｗ）ＰＥＧ４００和１２％　ＭｇＳＯ　，头孢氨苄的分配系数是６．１，苯甘氨酸甲酯　的分配系数为１．５，７一ＡＤＣＡ的分配系数为１．２。且　青霉素酰化酶的分配系数小于０．０１。这种分配特　性有利于耦合反应，在此方法下，头孢氨苄的产率达　到６０％，远大于水系２０％的产率。　蔡晓生ｌ２　利用双水相共聚合成阴离子型聚丙　烯酰胺，利用偶氮类引发剂引发丙烯酞胺（ＡＭ）进　行双水相共聚合，得到了稳定的阴离子型聚丙烯酞　胺（ＡＰＡＭ）水分散液。　２．７在测定方面的应用　刘奇等ｌ２　人用ｃ　Ｈ　ＯＨ／（ＮＨ　）：ＳＯ　双水相体　系以及分光光度法测定粮食中微量钼，原理是在　ｐＨ３的条件下，钼与钼与水杨基荧光酮形成１：２的　稳定红色络合物，在双水相体系的乙醇相中，该络合　物的最大吸收波长为５１６　ｎｍ，与单一水溶液中络合　物相比，红移了２　ｎｍ波长。此方法的方法的检出限　（３Ｓ／Ｎ）为０．０６　ｍｇ／Ｌ。回收率为９７．４％一１００．　１％。　龙文清　等人用Ｃ　Ｈ　ＯＨ／（ＮＨ　）　ｓ０　双水相　体系萃取、荧光法测定　一萘乙酸，在最佳体系条件　下，测定ｏ【一萘乙酸的线性范围２．４ｘ１０～～５．２ｘ１０　ｍｏｌ／Ｌ，检出限７．８×１０一ｍｏｌ／Ｌ，回收率９５％～　１０３％，相对标准偏差２．２％～４．３％。　唐仕松等　人用２一ｐｒｏｐａｎｏｌ／（ＮＨ　）　ＳＯ　双水　相体系选择性分离富集维生素Ｂ１２并且用电热原　子吸收法测定，萃取后富集倍数为１　１．８，检测线性　范围２～１００　Ｌ，检出限为０．６　ｇ／Ｌ（３ｏｒ，ｎ＝１１），　相对标准偏差为２．８％（５０　ｇＺＬ，ｎ＝９）。加标回收　率在９７％～１０４％。　２．８在贵金属分离方面的应用　贵金属的分离提取及纯化技术主要有火法和湿　法两类，但是这两种方法的成本高、收率低，所以用　经济有效、环境友好的方法提取贵金属是大家共同　追求的目标，双水相以其独特的优势逐渐被使用在　贵金属提取纯化方面。　高云涛　。。用１一ｐｒｏｐａｎｏｌ／盐双水相体系和盐诱　导浮选分离法实现了铂、钯、锗、铱、金、锇、等贵金属　元素的分离，改变了传统较难分离惰性贵金属铑、铱　等的情况，并且此种方法易于扩大化。　张磊＿３　用氧化酸浸泡除去处理成７０—２００目　的废弃电子印刷线路板中的其它金属后，用王水溶　解剩余含金固体，在ＰＥＧ２０００质量浓度１５％、　（ＮＨ　）：ＳＯ　质量浓度２０％、温度２５　ｏＣ、ｐＨ＝１的条　２６　齐鲁工业大学学报　第２８卷　件下，金的３次萃取率超过了９７％。　２．９和其它技术的结合　郅文波等　人利用双水相体系在高速逆流色　谱仪中分离鸡蛋清中的蛋白质，第一步成功分离细　胞色素Ｃ、溶菌酶和血红蛋白，接着在１５％ＰＥＧ１／　１７％Ｋ　ＰＯ　盐双水相体系下成功分离了卵白蛋白、　溶菌酶和卵转铁蛋白。　翟素玲等　人将ＰＥＧ／ｄｅｘｔｒａｎ双水相体系耦　合电泳初步探索了苯丙氨酸和色氨酸的分离。　周安存等　人集成ｃ２Ｈ　ＯＨ／（ＮＨ　）　ＳＯ　按时　双水相体系与微波提取分离石榴皮多酚，提取率达　到１８．３３％，多酚在除提物中的含量７５．３６％。　董娜等　人把双水相和壳聚糖沉淀相结合分　离纯化猪胃蛋白酶，最佳条件下，纯化倍数达到　７．８３。　罗凯文等　人用Ｃ　Ｈ３ＯＨ／（ＮＨ４）２ＳＯ４铵双水　相体系在加热回流的条件下纯化防己粉末中粉防己　碱，防己得率为１９．８０　ｍ　ｇ，纯度为２０．３０％。　３结论与展望　双水相由于具有条件温和、易于放大、提取量大　等特有的优势，目前已经应用在化学、生物、医药等　各个行业，和其它方法的结合也弥补了很多生产中　的不足，不仅快速高效，而且能够降低成本，减少工　艺。但是也存在一些局限性，如对于有些物质来说，　双水相萃取能够达到极高的提取率，但是引入的物　质使得后序处理比较麻烦，在人们对生活环境要求　越来越高的前提下，研究开发出更多新型廉价易于　处理的环境友好的双水相体系意义相当重大。对某　些双水相体系的分配机理目前还缺乏一定的研究，　所以需要更进一步的探索，用理论来指导实践。　参考文献：　邓静，吴华昌，赵树进．双水相技术在酶分离纯化中的运用　［Ｊ］．氨基酸和生物资源，２００４，２６（１）：７２—７５．　李丽敏，尚庆坤．亲水有机溶剂／无机盐双水相萃取技术在分　离提纯生物物质中的应用［Ｊ］．光谱实验室，２０１１，２８（６）：３０７３　－３０７８．　周莉，汤皎宁，黄成等．ＳＤＳ／ＣＰＣ混合表面活性剂双水相体系　［Ｊ］．深圳大学学报理工版，２００７，２４（１）：５９—６３．　藤弘霓，管玉翠．非离子型表面活的双相性质及萃取作用［Ｊ］．　化工学报，２００３，５４（１１）：１６４６—１６４９．　Ａｍｉｄ，Ｍ．，Ｍａｎａｐ，Ｍ．Ｙ．Ａ．，Ｓｈｕｈｍｍｉ　Ｍ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｆｒｏｍ　ｋｅｓｉｎａｉ　ｐｌａｎｔ（Ｓｔｒｅｂｌｕｓ　ａｓｐｅｒ）ｌｅａｖｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｓｕｆｆａｃｔａｎｔ—ｓａｌｔ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｍｉｅｅｌｌａｒ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ：ａ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｌｏｗ　ｃｏｓｔ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９８，（２）：１—８．　［６］Ｎａｎｄｉｎｉ　Ｋ　Ｅ，Ｒａｓｔｏｇｉ　Ｎ　Ｋ．Ｌｉｑｕｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐａｓｅ　Ｕ—　ｓｉｎｇ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌ—　ｏｇｙ，２０１１，４（２）：２９５—３０３．　［７］Ｊ　ｉａｎＭｉｎ　Ｘ，Ｆｅｎｆａｎｇ　Ｌ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｏｅ　ｐｏｌｙｓａｃ—　ｃｈａｒｉｄｅｓ　ｂｙ　ａ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｕｌｔｒａｆｉｈｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ—　ｇＹ，２００９，１５８（１）：１１一ｌ９．　［８］Ｌｏｃ　ＮＨ，Ｍｉｅｎ　Ｎ　ＴＴ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌｒａｄ—ａｍｙｌｓａｅｆｒｏｍ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｂｙ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ　ｉｎ　ａ　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｌ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２０１０，６０（４）：６２３—６２８．　［９］Ｔｉａｎｗｅｉ　Ｔ，Ｑｉｎｇ　Ｈ，Ｑｉｎａｇ　Ｌ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｙｅｙｒｒｈｉｚｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｇｌｙ－　ｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｃｎｓｉｓ　Ｆｉｓｃｈ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈａｎｏｌ／ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ　ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，２４（１７）：１４１７—１４２０．　［１Ｏ］　Ｇｕｏ　Ｙ　Ｘ，Ｈａｎ　Ｊ，Ｚｈａｎｇ　Ｄ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ／ｅｔｈａｎｏｌ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｕｈｒａｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｆｒｏｍ＜ｉ＞Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｈｉｏｒｒｈｉｚａ＜／ｉ＞Ｂｕｎｇｅ［Ｊ］．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ　ｓｏｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，１９　（４）：７１９—７２４．　Ｃｌａｕｄｉｏ　Ａ　Ｆ　Ｍ，Ｆｅｒｒｅｉｒａ　Ａ　Ｍ，Ｆｒｅｉｒｅ　Ｃ　Ｓ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇａｌｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ　ｉｏｎｉｃ—ｌｉｑｕｉｄ—ｂａｓｅｄ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—　ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１２．　（９７）：１４２—１４９．　［１２］　Ｗｕ　Ｘ，Ｔａｎｇ　Ｌ，Ｄｕ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃｒｕｄｅ　ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｂｙ　ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｋｏｒｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１０，２７（６）：１８２９—１８３５．　［１３］　Ｚｈａｎｇ　Ｊ，Ｗａｎｇ　Ｙ，Ｐｅｎｇ　Ｑ．Ｐｈａｓｅ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｏｆ　ｃａｔｉｏｎｉｃ　ａｎｄ　ａｎｉｏｎｉｃ　ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｋｏｒｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．　２０１３：１—５．　［１４］　Ｓｏｕｓａ　Ａ　Ｆ，Ａｎｄｒａｄｅ　Ｐ　Ｚ，Ｐｉｒｚｇａｌｓｋａ　Ｒ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆｒ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｍ—　ｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｏａｆｉｆｎｉｔｙ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，３３（１２）：２３７３—　２３７７．　［１５］　刘庆芬，胡雪生，王玉红，等．离子液体双水相萃取分离青霉　素［Ｊ］．科学通报，２００５，５０（８）：７５６—７５９．　［１６］　马春宏，尹彦苏，王仁章，等．离子液体双水相萃取分离四环　素的研究［Ｊ］．吉林师范大学学报：自然科学版，２００９，３０（１）：　６２—６４．　［１７］　曹文，高云涛，王红斌，等．醇一盐双水相技术去除水中的对氨　基酚［Ｊ］．云南民族大学学报（自然科学版），２０１２，（４）：２５６—　２５９．　［１８］　张焱，亓新华，王爱荣．双水相体系萃取分离电镀废水中镉缔　合物［Ｊ］．材料保护，２００８，４１（５）：７７—７８．　［１９］　程鸣，何文英，彭光明，等．农药草甘膦生产废水处理的研究．　工业用水与废水，２００３，３４（１）：３Ｏ一３２　［２Ｏ］　余龙，余凤，陈俊．ＮａＣ１一丙醇双水相体系分离富集草甘膦生　产废水中草甘膦铵盐［Ｊ］．环境工程学报，２０１３，７（８）：３０８５—　３０８８．　（下转第６７页）　…