・７４２・ 实用医技杂志２０１０年８月第１７卷第８期Ｊ０ｕｍａｌ ０ｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ ＴｅｃｈｎｉⅡｕｅｓ，Ａｕｇｌｌｓｔ ２０１０，Ｖｏ１．１７，Ｎｏ．８ ＣＩＮ ＩＩ患者ＨＰＶ阳性率３８．１％（８／２１）；９例ＣＩＮⅢ患者ＨＰＶ 阳性率６６．７％（６／９）。 ３讨 论 子宫颈浸润癌，大约需要１Ｏ年或数十年的时间，所以，对宫颈 癌前病变的早期诊断和治疗是当前减少宫颈癌发病率的重要 措施。 我院共检出９种ＨＰＶ基因型，依次为（按阳性率递减）： ＨＰＶ ５８、１６、６、１１、５３、１８、３１、３３、５２。ＨＰＶ感染年龄大部分在 性活跃期ｆ２０～５０岁），２９岁以下以低危型ＨＰｖ感染为主，３０ 岁以上以高危型ＨＰｖ感染为主。随着宫颈病变程度加重， ＨＰｖ感染率逐渐增高，宫颈炎ＨＰＶ感染率为２６．２３％ＣＩＮ Ｉ ＨＰＶ感染率为２６．７％，ＣＩＮⅡＨＰＶ感染率为３８．１％ＣＩＮⅢ ＨＰＶ感染率为６６．７％。宫颈癌其“元凶”就是ＨＰＶ。该病毒通 基因芯片是近年发展起来的可对病原体核酸进行快速检 测的技术。快速导流杂交法是导流杂交技术结合低密度基因 芯片技术，利用ＰＣＲ扩增提高检测的灵敏度，分子杂交特异 性高，是ＨＰＶ基因分型检测的新方法。运用其检测的特点，达 到对２１种常见高危型和低危型，ＨＰＶ亚型在同一样品中进 行检测。而且不同亚型ＨＰＶ对子宫颈癌致癌性有不同影响， 因此，准确诊断ＨＰＶ感染及其分型对宫颈癌筛查、早期确诊 及治疗效果监测有着重大意义 （收稿日期：２０１０－０４—０９） 过在子宫颈上皮内自我复制来逃脱人体免疫系统的监视，导 致引发癌症。从妇女感染ＨＰＶ到发展为宫颈癌前病变，乃至 注射用环磷腺苷无菌检查法的建立和验证 山西省药品检验所（ｏ３ｏｏｏ￣） 山西省儿童医院 于荣 刘霄峰 注射用环磷腺苷为蛋白激酶致活剂，可改善心肌缺氧，缓 ＭＪｘ一２５ＯＢ—Ｚ型编号：Ｉ一１１０一ＣＴ—ｌ３（上海博迅实业有限公 司医疗设备厂）；ＹＸＯ—Ｉ５—７５Ｇ立式压力蒸汽灭菌器（上海 解冠心病症状及改善心电图。本品属于注射剂，为确保临床 用药安全，《中国药典）２ｏｏ５年版规定需进行无菌检查。本试 验按２００５年版《中国药典（二部）》所载“无菌检查法”，验证 并建立注射用环磷腺苷的无菌检查方法【ｌＪ。 １试验环境和试验材料 １．１试验环境：见表ｌ。 表１试验环境监测结果（温度２１℃ 相对湿度４５％） 博迅实业有限公司医疗设备厂）。 ２验证方法与结果Ｒ・３１ ２．１菌液制备：分别接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草 芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许至营养肉汤培养 基或营养琼脂培养基中，３５℃培养２４ ｈ，取此培养液１ ｍＬ加 ０．９％无菌氯化钠溶液９ ｍＬ，采用】０倍递增稀释法，稀释至 １０ ，使菌数＜１００ ＣＦＵ／ｍＬ。接种白色念珠菌的新鲜培养物至 １０ ｍＬ改良马丁培养基中，２５ ｃｃ培养４８ ｈ，取此培养液ｌ ｍｌ＿． 加０．９％无菌氯化钠溶液９ ｍＬ，采用ｌ０倍递增稀释法，稀释 至１０－５，使菌数约为＜１００ ＣＦＵ／ｍＬ。接种黑曲霉的新鲜培养物 至改良马丁琼脂培养基中，２５℃培养５ ｄ，加３ ｍＬ ０．９％无菌 氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取１ ｍＬ菌液加０．９％无 菌氯化钠溶液９ ｍＬ，采用１０倍递增稀释法，稀释至１０－５，使 菌数约为＜１００ ＣＦＵ／ｍＬ。 １．２供试品：注射用环磷腺苷（批号：２００８０７０１生产厂家：山 西省天丰世保扶制药有限责任公司）。 １．３培养基：营养琼脂培养基（０８１２１５）；玫瑰红钠琼脂培养 基（０８１０２３３）；营养肉汤培养基（０９０２２６）；改良马丁培养基 ２．２菌落计数：分别取上述６种细菌液＜１００ ＣＦＵ／ｍＬ加入培 养皿中，每种菌液平行２个平皿，注入４Ｏ℃营养琼脂培养基 或改良马丁琼脂培养基约１８ ｍＬ，３５℃、２５℃，３ ｄ培养计数， 见表２。 表２验证用菌液的稀释级及接种量 （０８１０１０３）；硫乙醇酸盐培养基（０９０３１１）；改良马丁琼脂培养 基（０９０６１０），培养基均由中国药品生物制品检定所提供。 １．４菌种：枯草芽孢杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１］、金黄色葡萄球菌 ［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３］、铜绿假单胞菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４］、大肠埃 希菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］、白色念珠菌［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００１］、黑曲 霉［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００３］（菌种均由中国药品生物制品检定所提 供，均为第３代菌）。 １．５仪器设备：ＨＴＹ－－２０ＯＯＡ型集菌仪ＤＧＢ－－３３０全封闭集 菌培养器（批号：２００８０７２１）杭州高得医疗器械有限公司；生 化培养箱ｓＰｘ～２５０Ｂ—ｚ型编号：Ｉ－１０９一ＣＴ一１２霉菌培养箱 医技杂志２０ｌＯ年８月第ｌ７卷第８期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ ＴｅｃｈｎｉｃｌｌＩ ！Ａ ２ ！ ！ ｏ１．！！！ ． ・７４３・ ２－３培养基灵敏度检查：取每管装量１２ ｍＬ的硫乙醇酸盐流 体培养基９支，分别接种＜１００ ＣＦＵ的大肠埃希菌、金黄色葡 萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各２支，另１支不接种作为 空白对照，培养３ ｄ；取每管装量为９ ｍＬ的改良马丁培养基５ 支，分别接种＜１００ ＣＦＵ的白色念珠菌、黑曲霉各２支，另１支 不接种作为空白对照，培养５ ｄ，逐日观察结果。培养结果：每 种菌接种后的培养基均呈现生长良好，阴性对照无菌生长， 液１００ ｍｌ＿Ｊ￣，加入＜１００ ＣＦＵ／ｍＬ的试验菌，共做６桶（细菌４ 筒，真菌２筒），过滤，加入１００ ｎｉＬ培养基，逐日观察结果。阳 性组：另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作 为阳性对照。按规定温度培养３ ５ ｄ。各试验菌同法操作。各 试验菌及相应的培养基逐一进行验证。即硫乙醇酸盐流体培 养基４桶及改良马丁培养基２桶，１００ ｍｌＪ￥１￣。ｉ 阴性对照组：另取２薄膜过滤器，冲洗液为０．１％蛋白胨 因此判断所用培养基的灵敏度符合要求。 ２．４培养基无菌检查：随机抽取硫乙醇酸盐培养基和改良马 丁培养基各５支，培养１４ ｄ，结果均无生长。 ２．５无菌检查方法验证：试验组：（１５瓶／联 ３联＝４５瓶）将 水溶液５００ ｍＬ，然后分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良 马丁培养基各１００ ｍＬ，按规定温度培养３～５ ｄ。 培养温度：装硫乙醇酸盐流体培养基的过滤器在３０—３５℃ 培养；装改良马丁流体培养基的过滤器在２３～２５℃培养，３～ 规定量供试品ｌ５瓶／联（每三筒为一联），每瓶取３００ ｍｇ，加 稀释剂０．１％蛋白胨水溶液１５０ ｍＬ，按薄膜过滤法过滤，冲洗 ５ ｄ观察结果，见表３。 ３讨 论 表３方法验证试验组与阳性对照组检查结果 按２００５年版《中国药典（二部）》的有关要求，对注射用环 磷腺苷的无菌检查进行验证并建立方法，由上述试验结果定 论，注射用环磷腺苷用薄膜过滤法做无菌检查，应取０．１％蛋 ２ｏ０７． 参考文献 苏德模，马绪荣．药品微生物学检验技术．北京：华龄出版社， 黄丽荣，许善初，石庆平．注射用环磷腺苷细菌内毒素检查方 法的建立．安徽医药，２００６，１０（８）：５６７—５６８． 白胨水溶液作为稀释液，按薄膜过滤法过滤后，再用冲洗量为 每筒１００ ｍＬ的０．１％蛋白胨水溶液进行冲洗，用该方法进行 检验，具有操作简单、灵敏度高、重现性好、使用性强的优点， 故可以用本方法对注射用环磷腺苷进行无菌检查，以达到用 药安全的目的。 李玮，许威，马仕洪．１５种注射用头孢菌素无菌检查方法研 究．药品监督，２００７，１８（２５）：１９７１—１９７３． （收稿日期：２０１０—０４—２５） 乙型肝炎患者血清前ｓ １抗原检测的临床应用研究 山西省晋城市人民医院（０４８ｏ００） 本研究对３６５例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者的血清标本 进行了前ｓｌ抗原（ＰｒｅＳ１）及乙型肝炎标志物检测，以探讨 ＰｒｅＳ１检测在临床的应用价值。 １材料与方法 连云芝赵书青 ２０８例患者中ＰｒｅＳ１一Ａｇ阳性１９７例，阳性率为９４．７％，表明 ＰｒｅＳｌ与ＨＢｅＡｇ检出高度相关；乙型肝炎“小三阳”［ＨＢｓＡｇ （＋）、乙型肝炎ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）（４－）、ＨＢｃＡｂ（＋）］１５７例患者中 ＰｒｅＳ１一Ａｇ阳性１０５例，阳性率为６６．９％，以往认为ＨＢｓＡｇ是 反映患者传染性和病毒复制的良好指项，但结果提示ＨＢｓＡｇ （一）时，血清ＰｒｅＳ１（＋），说明小三阳的患者体内病毒复制仍在 继续，具有一定的传染性，应注意临床治疗。 ３讨 论 １．１标本来源：所有标本均来自２００９年４月至７月我院门 诊及住院的患者，年龄１５ ６５岁，其中男性１９８例，女性１６７ 例，均符合２００６年修订的慢性乙型肝炎防治指南诊断标 准ｌｌｊ。 １．２仪器：仪器使用洗板机和雷勃酶标仪。 １．３试剂与方法：检测方法均采用酶联免疫吸附试验 ＰｒｅＳ１抗原位于乙型肝炎病毒颗粒表面，由１０８或１０９个 氨基酸组成，具有高度的免疫原性，介导宿主的免疫应答，在 病毒的感染、复制、装配上也有重要作用，变异的病毒只要这 一（ＥＬＩＳＡ），操作过程和结果判定严格按说明书要求进行，乙型 肝炎标志物试剂由上海科华生物技术有限公司提供，ＰｒｅＳ１ 试剂由北京华大吉比爱生物有限公司提供。 ２结 果 片完好就存在传染性，近年来有文献报道，血清ＰｒｅＳ１检测 是反映乙型肝炎患者传染性和ＨＢＶ复制的一项新的敏感性 指标。ＰｒｅＳ１检测与ＨＢＶ—ＤＮＡ具有高度相关性，是优于 ＨＢｓＡｇ的血清学检测指标，能够反映ＨＢＶ的感染和复制情 况，对于乙型肝炎的诊断和预后具有重要的意义，是对乙型肝 炎标志物检测的有效补充 。 ３６５例标本中ＰｒｅＳ１一Ａｇ阳性３０２例，阳性率为８２．７％，其 中乙型肝炎“大三阳”［乙型肝炎表现抗原（ＨＢｓＡｇ）（４－）、乙型 肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）（＋）、乙型肝炎核心抗原ｆＨＢｃＡｂ）（＋）］
