用钼_铕_络合物法测定四环素类抗生素的研究

用钼(铕)络合物法测定四环素类抗生素的研究

　　卢继新　李　娟　　　　　张贵珠*　孙　英　王月梅　何锡文　史慧明

(天津医科大学药学系,天津300203)　　　(南开大学化学系,天津300071)　　　　　　

摘　要　利用四环素与钼、土霉素与铕的络合反应,建立了用钼、铕络和物法测定药物的新方法。检出限分别为0.5μg/mL,0.6μg/mL,线性范围分别为0.5～50～50μg/mL和0.6μg/mL。方法快速、简便。应用于尿中四环素的测定,结果较为满意。关键词　四环素的测定;铕钼络合物;尿

　　四环素类抗生素为广谱抗菌药物,近年来饲养业中广泛使用四环素类药物,增强动物的抗病能力,而造成食品的污染。临床研究还表

明,给病人服用四环素后,定时测定体液中四环素含量,可以诊断胃癌[1],四环素还可以作为荧光探针来诊断癌。因此,建立灵敏、快速、准确的测定动物体液中痕量四环素类抗生素的分析方法十分迫切。

关于四环素类抗生素的测定已有许多报道,如微生物法、荧光法

[6,7]

[8][3]

[4,5]

[2]

液;土霉素(OTC)标准溶液:用标准原料药配成1mg/mL的储备液;钼离子溶液:用分析纯(NH4)6Mo7O24·4H2O配成1mg/mL储备液;铕离子溶液:用分析纯Eu2O3配成1mg/mL储备液,使用时稀释为不同浓度;六次甲基四胺为20%水溶液,用盐酸调至不同pH值;十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)为0.2%水溶液。2　实验方法

于10mL容量瓶中,加入一定量的四环素(土霉素)标准溶液,然后依次加入钼(铕)离子溶液2.0mL,六次甲基四胺-HCl缓冲溶液(pH6.5)2.0mL,0.2%的

CTMAB溶液

2.5mL,稀释至刻度,摇匀。在390nm(385nm)处用1cm液池对试剂空白测其吸光度。3　结果与讨论

3.1　吸收光谱

实验了多种金属离子与TC、OTC的络合反应及光谱特征,其中Mo、Eu与TC、OTC可形成稳定性好、灵敏度高的络合物,如图1所示,借此可测定TC和OTC的含量。TC和

、差示导数光谱

[9,10]

法、流动注射法、吸附溶出伏安法紫

外法[11,12]、高效液相色谱[13]、离子对萃取法[14]等。但微生物法比较繁琐,操作冗长,且准确度和专属性都不高,其它方法又不够简便。本文利用四环素与钼的络合反应,土霉素与铕的络合反应建立了利用金属络合物测定四环素类药物的新方法。方法灵敏度较高,快速、简便,准确度高。应用于尿中四环素的测定,结果较为满意。1　仪器与试剂

岛津UV240型分光光度计,MV870型数字式酸度计,电动离心沉降机。四环素(TC)标准溶液:用标准原料药配成1mg/mL的储备

本文系国家自然科学基金资助项目

—47—1997年　　　　　　　　　　　　分析试验室　　　　　　　　　　第16卷　第6期OTC的最大吸收波长分别为357nm和3nm,络合物形成后,其最大吸收波长,TC-Mo、TC-Eu分别为390nm和397nm,OTC-Mo、OTC-Eu均为385nm,分别红移33nm、40nm、31nm。吸收强度明显增加,TC-Mo、OTC-Eu的摩尔吸光系数较高,分别为2.19×104和1.63×104。

剂的种类对络合物形成有很大影响。柠檬酸钠

作为缓冲溶液络合物难以形成,NaAc介质中,络合物虽能形成,但灵敏度较低,只有在六次甲基四胺-HCl介质中吸光度最高,故选择六次甲基四胺-HCl作为缓冲溶液。

3.2.4　钼(铕)离子用量的选择　吸光度随钼(铕)用量的增加而升高,当钼(铕)用量为2.0mL时吸光度达最高且不再随钼(铕)的量的增加而变化,故选择钼(铕)的用量为2.0mL。3.2.5　时间及温度　时间、温度对体系的影响不大,在室温下络合物立即形成,可稳定数小时。

3.3　样品的测定

3.3.1　干扰实验　主要考察了在体内及尿中存在的一些物质对体系的影响。对于10μg/mL的TC,测定误差小于10%时,尿素(3000倍)、

图1　金属离子与TC、OTC络合物的吸收光谱1(1′)——TC(OTC);2(2′)——Mo-TC(OTC);3(3′)——Eu-TC(OTC);CTC=COTC=2.0×10mol/L,CEu=1.0×10mol/L,CMo=2.0×10mol/L,pH6.5

-4

-4

-5

肌酐(200倍)、马尿酸(20倍)、酒石酸钾钠(2000倍)、维生素C(100倍)、维生素B1(10倍)、维生素B2(20倍)不干扰TC的测定。

3.3.2　工作曲线　取不同量TC(OTC)标准溶液按实验方法测定,回归方程为:

+2.16×104cTC(mol/L)A=0.0014

r=0.9994,检出限为0.5μg/mL。+1.630×104cOTC(mol/L)A=-0.0123

r=0.9991,检出限为0.6μg/mL。3.3.3　样品测定　应用该体系,采用加入回收法测定了尿中的四环素,结果见表1。

表1　测定结果

四环素加入量

μg

204060

测得量平均回收率(%)相对标准μg20.2139.4959.61

(n=5)10198.799.4

偏差1.2%0.3%0.7%

3.2　反应条件的选择

为了找出结合物形成的最佳条件,研究了

酸度、表面活性剂的种类及用量、缓冲溶液的用量、金属离子的用量、反应时间、温度等条件对反应的影响。

3.2.1　反应酸度　络合物在较大酸度范围内均可形成,但pH5.5～7.0时吸光度最高且稳定,故选择pH6.5。3.2.2　表面活性剂的选择及用量　实验了多种表面活性剂对络合物形成的影响,发现只有阳离子表面活性剂(CTMAB)对络合物的形成有较大的增敏作用,阴离子、非离子表面活性剂不起任何作用。当CTMAB用量大于2.0mL时,吸光度达最大值且稳定,所以选用2.5mL。3.2.3　缓冲溶液种类的选择　实验表明,缓冲—48—3.4　反应机理初探

1997年　　　　　　　　　　　　分析试验室　　　　　　　　　　第16卷　第6期经研究发现四环素类药物与金属离子的反应,有多种结合方式,与反应时的浓度比有关,当药物过量金属离子时,一般形成1∶1络合物,再过量时形成2∶1或3∶1络合物,当金属离子过量于药物时,则形成1∶2络合物。络合物稳定性以1∶1,1∶2的结合方式最稳定,2∶1,3∶1的稳定性较差。经实测,OTC∶Eu=1∶2、TC∶Mo=1∶2。4　参考文献

1　张锦坤,陆廉贞.内科讲座.北京:人民卫生出版社,1982

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3　安登魁主编.药物分析.北京:人民卫生出版社,

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14　MishraDD,IslanI,SharmaJP.MikrochimAc-ta,1985,111:97

DeterminationofTetracyclineTypeAn-tibioticsbyMolybdenumandEuropiumCom-plexLuJixin,LiJuan(DepartmentofPhar-macy,TianjinMedicalUniversity,Tianjin

300203),ZhangGuizhu*,SunYing,WangYuemei,HeXiwenandShiHuiming(Depart-mentofChemsitry,NankaiUniversity,Tianjin300071),FenxiShiyanshi,1997,16(6):47～49Basedonthecomplexreactionsoftetra-cyclinewithmolybdenum(andOxytetracy-clinumandeuropium),anewmethodforthedeterminationoftetracycline(oxytetracy-clinum)hasbeendevelopedbyusingmolybde-num,europiumcomplexmethod.Beer'slawisobeyedfortetracycline(oxetracyclinum)in

～50～50therangeof0.5μg/mL(0.6μg/mL)andthedetectionlimitis0.5μg/mL(0.6～50μg/mL).Themethodisrapidandsimple.Themethodhasbeenappliedtothedetermi-nationoftetracyclineinurinewithsatisfactoryresults.

Keywords　Determinationoftetracy-cline;molybdenum;europium;complexurine

收稿日期:1996年8月12日

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