现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．８ 马尾松花粉总黄酮对小鼠抗疲劳作用的研究 吴晶晶，黄培桦，朱良，林福兰 （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州５１０６４０） 摘要：研究了马尾松花粉总黄酮的抗疲劳作用。将小鼠按体重随机分为对照组和低、中、高剂量组。低、中、高三个剂量组分 别灌胃给予ｌＯ、２０、４０ ｍｇＣｋｇ的马尾松花粉总黄酮１４ ｄ，对照组给蒸馏水。测定小鼠游泳时间、爬杆时间、耐缺氧时间及游泳后血 乳酸、尿素氮、肝糖原等指标。结果表明马尾凇花粉总黄酮能延长小鼠的游泳时间和爬杆时间，降低了运动后血清ＢＵＮ浓度，提高 肝糖元的储备量，增强清除乳酸能力。 关键词：马毛松花粉总黄酮；抗疲劳；尿素氮；血乳酸：肝糖原 文章篇号：１６７３．９０７８（２ＯＬＯ）８．８１５．８１７ Ａｎｔｉ－ｆａｔｉｇｕｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＦｌａｖｏｎｅ ｉｎＰ／ｎＵＳＭａｓｓｏｎｉａｎａ Ｐｏｌｌｅｎ ０ｎ Ｍｉｃｅ 、ｖＵ Ｊｉｎｇｑｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｐｅｉ－ｈｕａｎｇ，ＺＨＵ Ｌｉａｎｇ，ＬＩＮ Ｆｕ－ｌａｎ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙａｎｄＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ａｎｔｉ・ｆａｔｉｇｕｅｅｆｅｃｔｏｆＦｌａｖｏｎｅｉｎｏｎｍｉｃｅ，ｆｌａｖｏｎｅｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ（ｉ曲ｄａｉｌｙｗｉｔｈｔｈｒｅｅｄｉｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｔｏｆｅｍａｌｅｍｉｃｅ 斯１４ｄａｙｓ（１０，２０ａｎｄ４０ｍｇ／ｋｇ＇ｂｗ）ａｎｄｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ（ ｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ａｆｔｅｒ１４ｄａｙｓ，ｈｔｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇｔｅｓｔａｎｄｐｏｌｅｃｌ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｄｅｏｕｔ ａｎｄｔｈｅ ｓｍＭｖａｌｔｉｍｅ ｏｆｍｉｃｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｈｙｐｏｘｉａｗａｓ ｒｅｏｃｒｄｅ＆Ｗｈｅｎｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇｆｏｒａｐｅｒ￣ｏ，ｔｂｌｏｏｄｗａｓｔａｋｅｎ衙 ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｅｒｕｍｌａｃｔｉｃ－ａｃｉｄ，ｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎ（ＢＵＮ）ａｎｄｔｈｅｉｒｒｉｖｅｒｓ ｗｅｒｅｔａｋｅｎｆｏｒｄｅｔｅｍａｉｎｉｎｇ ｇｌｙｃｏｇｅｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈｔａｔ ｌｆａｖｏｎｅｉｎＰｉｎｕｓ Ｍａｓｓｏｎｉａｎａｐｏｌｌｅｎｃａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｌｏｎｇ ｓｗｉｍｍｉｎｇｔｉｍｅ ｎａｄｐｏｌｅｃｌｉｍｂｉｎｇｔｉｍｅ，ｒｅｄＨｃｅ ＢＵＮｌｅｖｅｌ，ｉｎｃｒｅａｓｅ ｌｉｖｅｒｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅａｎｄａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｌａｃｔｉｃ－ａｃｉｃｉｃｌｅａｒａｎｃｅａｆｔｅｒｓｗｉｍｍ￣．Ａｎｄｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌｉｔｍｅ ｓｕｂｊｅｃｔｄｅｔｏｈｙｐｏｘｉａｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｉｈｔｏｕｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｌａｖｏｎｅｉｎＰｉｎｕｓＭａｓｓｏｎｉａｎａｐｏｌｌｅｎ；ａｎｔｉ－ｆａｔｉｇｕｅ；ｂｌｏｏｄｔｋｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎ（ＢＵＮ）；ｓｅｒｕｍｌａｃｉｔｃａｃｉｄ；ｇｌｙｃｏｇｅｎ 松花粉药名松黄，是松科植物马尾松（Ｐｉｎｕｓ 验就松花粉总黄酮抗小鼠运动性疲劳作用进行了研 ｍａｓｓｏｎｉａｎａ）、油松（ ｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉ）或同属数种植物 究。 于春季花刚开时，采摘花穗晒干收集，除去杂质所得 的淡黄色细花粉。其成分稳定、不含激素，是花粉产 １材料与方法 品中的佼佼者。松花粉是我国传统食药兼用的花粉品 １．１材料与试剂 种，神农本草、本草纲目等多种医籍中均有记载，有 １．１．１供试品的制备 润心肺、益气、怯风止血、壮颜益志、强身健体的功 马尾松花粉采自云南腾冲高黎贡山南麓。将松花 能【ｌ】０作为古老的药源和营养源，国家卫生部近年已 粉晒干后冷冻超微粉碎，石油醚回流脱脂，９５％乙醇 确认松花粉为新资源食品，并列为普通食品管理【２Ｊ。 回流浸提，提取后减压回收乙醇，浸膏加适量水溶解， 松花粉中的多种酶、核酸、有机酸、黄酮等生物活性 取水层浓缩后加入已处理好的聚酰胺柱中洗脱，至洗 物质，能调节人体机能，具有延缓衰老，促进新陈代 脱液中不含黄酮类成分为止，回收乙醇，水浴上挥干 谢的功能，对于保健及功能药物的开发具有重要意义 即得松花粉总黄酮，以芦丁为标准测定黄酮含量为 【３１。 ６７．８０％。 目前对松花粉的研究还是在原粉的的药用价值和 １．１．２试剂和动物 保健作用的研究上，对其活性成分尤其是黄酮类物质 试剂：血尿素氮（ＢＥＲＮ）试剂盒宁波慈城生化试剂 的提取和功能的研究，尚少见报道 。为促进松花粉 厂；乳酸测定试剂盒，北京金豪制药股份有限公司； 资源的开发利用，寻找新的抗疲劳性运动补剂，本实 三氯醋酸（分析纯）、葡萄糖（分析纯）、浓硫酸（分 收稿日期：２０１０－０４－１４ 析纯）及葸酮。其他试剂均为国产分析纯。 作者简介：吴晶晶（１９８６－），女，在读硕士，主要从事食品安全方面的研究 实验动物：４ Ｗ龄雄性健康昆明种小鼠６０只，体 通讯作者：朱良（１９７５一），男，讲师，主要从事天然产物方面的研究 重１８￣２ ｇ，购自南方医科大学动物房。小鼠于实验室 ８１５ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏｌ・２６，Ｎｏ・８ 条件适应１ Ｗ后称重，并对相关的行为学指标进行训 练，淘汰体重及运动能力与平均水平有明显差异者。 １．２实验仪器和设备 ＬＴ－１７１０型便携式乳酸测定仪，日本Ａｒｋｒａｙ公司； 超微粉碎机ＷＺＪ６（ＢＦＭ６），济南倍力粉技术工程有 限公司；高速冷冻离心机（ＢＥＣＫＭＡＮ仪器公司 Ｊ２一ＨＳ７２２）；生化分析仪（日本日立公司Ｈｉｔａｃｈｉ ７６００—０２０）；分光光度计（南京第四分析仪器有限公 司）；旋转蒸发仪（上海予华仪器有限公司）；电热恒 温水浴箱（杭州中拓仪器有限公司）；秒表；游泳箱。 １＿３实验方法 １．３．１剂量及分组 小鼠按体重随机分成４组，每组ｌ２只，设松花 粉总黄酮１０ ｍｇ／ｋｇ、２０ ｍｇ／ｋｇ、４０ ｍｇ／ｋｇ ３个剂量组 和１个溶剂（水）对照组。经口灌胃，连续１４ ｄ。溶 剂对照组给予双蒸水，小鼠灌胃量为２０ ｍＬ／ｋｇ。全部 动物均给予鼠全价颗粒饲料自由食用。 １．３．２负重游泳时问测定实验 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，置小鼠于游泳箱 中，水深大于３０ ｃｍ，水温（２５土０．５）℃，鼠尾根部负荷 ５％体重的铅皮，记录小鼠从游泳开始至死亡的时间， 作为小鼠游泳时间ｐＪ。 １．３＿３爬杆时间测定实验 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，将经训练筛选过 的小鼠分别放在长１１０ ｎｌｎｑ、直径７ ｌｌｌｎｌ的垂直悬挂的 光滑玻璃棒上端，使其肌肉处于静力紧张状态，记录 小鼠从爬杆开始，直至肌肉疲劳，无力抱住玻璃棒而 落到地上的时间，反复３次，第三次跌落后终止试验， 累计３次的时间作为爬杆时间（ｓ）［６】。 １．３．４常压耐缺氧时间测定实验 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，将小白鼠逐只放 入２５０ ｍＬ广口瓶中，瓶内预先置新鲜钠石灰ｌＯ ｇ， 加瓶盖密封口，开始记时至小鼠呼吸停止，记录各鼠 耐缺氧时间。 １．３．５生化指标的测定方法 １．３．５．１血清尿素氮含量 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，在３０℃水中游 泳９０ ｍｉｎ，采血，分离血清，全自动生化分析仪测定 尿素氮含量。 １．３．５．２肝糖原含量 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，在３０℃水中游 泳９０ ｍｉｎ，立即处死，取肝脏２００ ｍｇ匀浆。蒽酮法 测定肝糖原含量。 １．３．５－３血乳酸含量 末次灌胃给予受试物３０ ｍｉｎ后，负重（１％体重） 在３０℃水中游泳９０ ｍｉｎ后停止，安静１５ ｍｉｎ，摘眼 球采血，用乳酸测定仪测定血乳酸含量。 １．３．６实验数据的处理 实验数据用单因素方差分析方法和多个实验组和 一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。 数据采用ＳＰＳＳ １０．０统计软件处理，数据以均数士 标准差表示，组间比较采用单因素方差分析。两组间 比较用ｔ检验。 ２结果与讨论 ２．１ 总黄酮各剂量组对小鼠负重游泳时间、爬杆时 间、常压耐缺氧时间的影响 总黄酮各剂量组对小鼠负重游泳时间、爬杆时间、 常压耐缺氧时间的影响结果见表１。 表１受试物对小鼠负重游泳时间、爬杆时间、耐缺氧时间的影 响（ｎ＝１２， ±ｓ） Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏａｄｅｄ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｔｉｍｅ，ｓｗａｒｍｉｎｇ ｔｉｍｅ，ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｔｍｅ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔｉｎｇ ｏｘｙｇｅｎ－ａｂｓｅｎｓｅ ｏｆ ｍｉｃｅ（ｎ＝１２， 注：与对照组相比：ａ为Ｐ＜０．０５，ｂ为Ｐ＜０．０１。 由表１可知，松花粉总黄酮各剂量组小鼠负重游 泳时间均比对照组延长，中、高剂量组与对照组相比 具极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。 松花粉总黄酮各剂量组小鼠爬杆时间均比对照组 延长，中剂量组与对照组相比具显著性差异（Ｐ＜０．０５）、 高剂量组与对照组相比具极显著性差异（Ｐ＜０．０５）。证 明松花粉总黄酮能有效地延长运动时间，延缓疲劳的 发生。 不同剂量松花粉总黄酮耐缺氧时间比照组虽有增 加，但其差异在统计学上无显著意义。 ２．２总黄酮各剂量组对小鼠生化指标的影响 血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量结果 见表２。由表２可见，松花粉总黄酮各剂量组小鼠血 清尿素氮含量均低于对照组，中，高剂量与对照组相 比分别具显著和极显著性差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。证 明补充松花粉总黄酮能减轻运动时机体利用蛋白质供 能的程度。 ８１６ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏ１．２６．Ｎ０．８ 松花粉总黄酮各剂量组小鼠肝糖原含量均高于 对照组，中、高剂量组与对照组相比分别具显著和极 对照组，中、高剂量组与对照组相比具显著性差异 显著性差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。表明松花粉总黄酮能 （Ｐ＜０．０５）。显示松花粉总黄酮可增加肝细胞糖原含量。 减少运动时血乳酸的堆积。 松花粉总黄酮各剂量组小鼠血乳酸含量均低于 表２受试物对小鼠运动后各项生化指标的影响（ｎ＝１ ２， ±ｓ） Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｆｌａｖｏｎｅ ｏｎ ｍｕｓｃｌｅ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ，ｈｅｐａｔｉｃ ｇｌｙｃｏｇｅｎ，Ｓｅｒｕｍ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆｍｉｃｅ（ｎ＝１２， 注：与对照组相比：ａ为Ｐ＜Ｏ．０５，ｂ为Ｐ＜０．０１。 ３结论 ［１】 范国才．中国松属（Ｐｉｎｕｓ）植物花粉的利用研究［Ｊ】．云南林 业科技，１９９７，２０：４５—５２ 疲劳是涉及许多生理生化因素的综合性生理过 ［２】 赵霖，鲍善芬．中国人怎么吃［Ｍ】．北京：军事医学科学出版社， 程，是人体脑力或体力活动到一定阶段时必然出现的 １９８６．３６２．３６７ 一种正常的生理现象 Ｊ。运动性疲劳是指机体的生理 ［３］ Ｃｅｖｄｅｔ Ｎ，Ｉｃｌａｌ Ｄ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ 过程不能持续，其机能在—特定水平或不能维持预定 ｏｆ Ｐｉｎｕｓ ｐｉｎｅａ Ｌ．ｓｅｅｄｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，８６：３６５— 的运动强度 。运动实验与生化指标检测相结合可作 ３６８ 为评价疲劳的方法。一般认为采用运动耐力实验和血 ［４］ 何晓燕，孙雪圆，于智洋．松花粉的有效成分及药理作用【Ｊ】． 乳酸、血清尿素氮及肌／肝糖原等３项生化检测项目来 东北林业大学学报，２００７，３５（９）：７８．８０ 作为抗疲劳的指标较为合适。若１项以上（含１项） ［５］ 刘昌衡，ｔｄ，军，袁文鹏，等．复方海参口服液的抗疲劳和免 耐力运动实验和二项以上（含２项）生化指标为阳性， 疫功能的研究［Ｊ］．现代食品科技，２００９，２５（１０）：１１１５—１１１９ 即可以判定受试物具有抗疲劳活性 Ｊ。 ［６］ 高珊，童英，吴少平，等．昆明种小鼠抗疲劳试验中若干参考 研究发现运动引起骨骼肌自由基和其它形式的活 值测定【．『】．实验动物科学与管理，２００１，１８：１６—１８ 性氧增加是导致骨骼肌损伤和疲劳的重要原因之一 ［７】 余谦，李明富，宋开源，等．中医药抗体力性疲劳的整体思辨 【ｌ ｏ】。自由基和脂质过氧化损伤与疲劳形成有关。运动 与应用前景［Ｊ］＿中国运动医学杂志，２００１，２０：３－４ 尤其是大强度运动引起体内自由基大量产生Ｉ¨Ｊ，这些 ［８］ 王利安．运动医学［Ｍ】．北京：人民体育出版社，２００８：１４８ 自由基进而攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，引起脂质 ［９】 何来英，严卫星，楼密密，等．保健食品抗疲劳作用实验研究 过氧化反应，破坏了膜的完整性、流动性及通透性， 【Ｊ］．中国食品卫生杂志，１９９７，９（４）：１—６；２４；４６ 导致运动能力下降，诱发运动性疲劳，运动性疲劳与 ［１０］陈吉棣．运动营养学［Ｍ】．北京：北京医科大学出版社，２００２： 出现的脂质过氧化增强、Ｃａ２＋稳态失调、能量代谢紊 ３３－３７．２９８－３０１ 乱及生物膜损伤之间具有紧密的联系。补充抗氧化剂 【１ｌ】王兰，葆琪．现代劳动卫生学［Ｍ】．北京：人民卫生出版社， 能阻抑这种改变，提高运动能力ｌＪ…。 １９９４．１５．２０ 马尾松花粉总黄酮能延长小鼠的游泳时间和爬杆 ［１２】Ｒｅｄｄｙ ＫＶ，Ｋｕｍａｒ ＴＣ，Ｐｒａｓａｄ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｌｍｏｎｎａｒｙ ｌｉｐｉｄ 时间，降低了运动后血清ＢＵＮ浓度，提高肝糖元的 ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｅｘｈａｕｓｔｉｖｅ 储备量，增强清除乳酸能力。松花粉总黄酮含丰富的 ｐｈｙｓｉｃａｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ：ｔｈｅｒｏｌｅ ｏｆ ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ［Ｊ］． 黄酮类物质，它们在清除因运动而产生的自由基过程 Ｎｕｔｒｉｉｔｏｎ，１９９８，１４：４４８－４５１ 中起着重要的作用［１ ，可通过降低运动后的自由基 ［１３】Ｋａｎｔｅｒ Ｍ Ｍ．Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ，ｅｘｅｒｃｉｓｅ，ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ 浓度，减轻自由基的损伤程度，从而减缓运动疲劳的 ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｐｏｒｔ Ｎｕｔｒｉｉｔｏｎ， 产生，这可能是松花粉总黄酮抗疲劳作用的机制之一。 １９９４．４：２０５．２２０ 参考文献 ８ｌ７
