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马尾松花粉总黄酮对小鼠抗疲劳作用的研究

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现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2010,Vo1.26,No.8 马尾松花粉总黄酮对小鼠抗疲劳作用的研究 吴晶晶,黄培桦,朱良,林福兰 (华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640) 摘要:研究了马尾松花粉总黄酮的抗疲劳作用。将小鼠按体重随机分为对照组和低、中、高剂量组。低、中、高三个剂量组分 别灌胃给予lO、20、40 mgCkg的马尾松花粉总黄酮14 d,对照组给蒸馏水。测定小鼠游泳时间、爬杆时间、耐缺氧时间及游泳后血 乳酸、尿素氮、肝糖原等指标。结果表明马尾凇花粉总黄酮能延长小鼠的游泳时间和爬杆时间,降低了运动后血清BUN浓度,提高 肝糖元的储备量,增强清除乳酸能力。 关键词:马毛松花粉总黄酮;抗疲劳;尿素氮;血乳酸:肝糖原 文章篇号:1673.9078(2OLO)8.815.817 Anti-fatigue Effects ofFlavone inP/nUSMassoniana Pollen 0n Mice 、vU Jingqing,HUANG Pei-huang,ZHU Liang,LIN Fu-lan (CollegeofLightIndustryandFoodSciences,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640,China) Abstract:To investigate anti・fatigueefectofFlavoneinonmice,flavonewasadministered(i曲dailywiththreediferentdosestofemalemice 斯14days(10,20and40mg/kg'bw)anddistilledwaterwas administered( tocontrolgroup.After14days,hte swimmingtestandpolecl test were carrideout andthe smMvaltime ofmice subjectedtohypoxiawas reocrde&Whenthemicewere swimmingforaper ̄o,tbloodwastaken衙 determining serumlactic-acid,bloodureanitrogen(BUN)andtheirrivers weretakenfordetemaining glycogen.Results showed htat lfavoneinPinus Massonianapollencan significantlyprolong swimmingtime nadpoleclimbingtime,redHce BUNlevel,increase liverglycogen storageandaccelerate lactic-aciciclearanceafterswimm ̄.Andthe survivalitme subjectdetohypoxiaincreased,wihtout signiifcantdiferencebetweengroups. Keywords:flavoneinPinusMassonianapollen;anti-fatigue;bloodtkreanitrogen(BUN);serumlacitcacid;glycogen 松花粉药名松黄,是松科植物马尾松(Pinus 验就松花粉总黄酮抗小鼠运动性疲劳作用进行了研 massoniana)、油松( tabulaeformi)或同属数种植物 究。 于春季花刚开时,采摘花穗晒干收集,除去杂质所得 的淡黄色细花粉。其成分稳定、不含激素,是花粉产 1材料与方法 品中的佼佼者。松花粉是我国传统食药兼用的花粉品 1.1材料与试剂 种,神农本草、本草纲目等多种医籍中均有记载,有 1.1.1供试品的制备 润心肺、益气、怯风止血、壮颜益志、强身健体的功 马尾松花粉采自云南腾冲高黎贡山南麓。将松花 能【l】0作为古老的药源和营养源,国家卫生部近年已 粉晒干后冷冻超微粉碎,石油醚回流脱脂,95%乙醇 确认松花粉为新资源食品,并列为普通食品管理【2J。 回流浸提,提取后减压回收乙醇,浸膏加适量水溶解, 松花粉中的多种酶、核酸、有机酸、黄酮等生物活性 取水层浓缩后加入已处理好的聚酰胺柱中洗脱,至洗 物质,能调节人体机能,具有延缓衰老,促进新陈代 脱液中不含黄酮类成分为止,回收乙醇,水浴上挥干 谢的功能,对于保健及功能药物的开发具有重要意义 即得松花粉总黄酮,以芦丁为标准测定黄酮含量为 【31。 67.80%。 目前对松花粉的研究还是在原粉的的药用价值和 1.1.2试剂和动物 保健作用的研究上,对其活性成分尤其是黄酮类物质 试剂:血尿素氮(BERN)试剂盒宁波慈城生化试剂 的提取和功能的研究,尚少见报道 。为促进松花粉 厂;乳酸测定试剂盒,北京金豪制药股份有限公司; 资源的开发利用,寻找新的抗疲劳性运动补剂,本实 三氯醋酸(分析纯)、葡萄糖(分析纯)、浓硫酸(分 收稿日期:2010-04-14 析纯)及葸酮。其他试剂均为国产分析纯。 作者简介:吴晶晶(1986-),女,在读硕士,主要从事食品安全方面的研究 实验动物:4 W龄雄性健康昆明种小鼠60只,体 通讯作者:朱良(1975一),男,讲师,主要从事天然产物方面的研究 重18 ̄2 g,购自南方医科大学动物房。小鼠于实验室 815 现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2010,Vol・26,No・8 条件适应1 W后称重,并对相关的行为学指标进行训 练,淘汰体重及运动能力与平均水平有明显差异者。 1.2实验仪器和设备 LT-1710型便携式乳酸测定仪,日本Arkray公司; 超微粉碎机WZJ6(BFM6),济南倍力粉技术工程有 限公司;高速冷冻离心机(BECKMAN仪器公司 J2一HS722);生化分析仪(日本日立公司Hitachi 7600—020);分光光度计(南京第四分析仪器有限公 司);旋转蒸发仪(上海予华仪器有限公司);电热恒 温水浴箱(杭州中拓仪器有限公司);秒表;游泳箱。 1_3实验方法 1.3.1剂量及分组 小鼠按体重随机分成4组,每组l2只,设松花 粉总黄酮10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg 3个剂量组 和1个溶剂(水)对照组。经口灌胃,连续14 d。溶 剂对照组给予双蒸水,小鼠灌胃量为20 mL/kg。全部 动物均给予鼠全价颗粒饲料自由食用。 1.3.2负重游泳时问测定实验 末次灌胃给予受试物30 min后,置小鼠于游泳箱 中,水深大于30 cm,水温(25土0.5)℃,鼠尾根部负荷 5%体重的铅皮,记录小鼠从游泳开始至死亡的时间, 作为小鼠游泳时间pJ。 1.3_3爬杆时间测定实验 末次灌胃给予受试物30 min后,将经训练筛选过 的小鼠分别放在长110 nlnq、直径7 lllnl的垂直悬挂的 光滑玻璃棒上端,使其肌肉处于静力紧张状态,记录 小鼠从爬杆开始,直至肌肉疲劳,无力抱住玻璃棒而 落到地上的时间,反复3次,第三次跌落后终止试验, 累计3次的时间作为爬杆时间(s)[6】。 1.3.4常压耐缺氧时间测定实验 末次灌胃给予受试物30 min后,将小白鼠逐只放 入250 mL广口瓶中,瓶内预先置新鲜钠石灰lO g, 加瓶盖密封口,开始记时至小鼠呼吸停止,记录各鼠 耐缺氧时间。 1.3.5生化指标的测定方法 1.3.5.1血清尿素氮含量 末次灌胃给予受试物30 min后,在30℃水中游 泳90 min,采血,分离血清,全自动生化分析仪测定 尿素氮含量。 1.3.5.2肝糖原含量 末次灌胃给予受试物30 min后,在30℃水中游 泳90 min,立即处死,取肝脏200 mg匀浆。蒽酮法 测定肝糖原含量。 1.3.5-3血乳酸含量 末次灌胃给予受试物30 min后,负重(1%体重) 在30℃水中游泳90 min后停止,安静15 min,摘眼 球采血,用乳酸测定仪测定血乳酸含量。 1.3.6实验数据的处理 实验数据用单因素方差分析方法和多个实验组和 一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。 数据采用SPSS 10.0统计软件处理,数据以均数士 标准差表示,组间比较采用单因素方差分析。两组间 比较用t检验。 2结果与讨论 2.1 总黄酮各剂量组对小鼠负重游泳时间、爬杆时 间、常压耐缺氧时间的影响 总黄酮各剂量组对小鼠负重游泳时间、爬杆时间、 常压耐缺氧时间的影响结果见表1。 表1受试物对小鼠负重游泳时间、爬杆时间、耐缺氧时间的影 响(n=12, ±s) Table 1 Effect of hydrolysates on the weight loaded swimming time,swarming time,survival itme of resisting oxygen-absense of mice(n=12, 注:与对照组相比:a为P<0.05,b为P<0.01。 由表1可知,松花粉总黄酮各剂量组小鼠负重游 泳时间均比对照组延长,中、高剂量组与对照组相比 具极显著性差异(P<0.01)。 松花粉总黄酮各剂量组小鼠爬杆时间均比对照组 延长,中剂量组与对照组相比具显著性差异(P<0.05)、 高剂量组与对照组相比具极显著性差异(P<0.05)。证 明松花粉总黄酮能有效地延长运动时间,延缓疲劳的 发生。 不同剂量松花粉总黄酮耐缺氧时间比照组虽有增 加,但其差异在统计学上无显著意义。 2.2总黄酮各剂量组对小鼠生化指标的影响 血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量结果 见表2。由表2可见,松花粉总黄酮各剂量组小鼠血 清尿素氮含量均低于对照组,中,高剂量与对照组相 比分别具显著和极显著性差异(P<0.05,P<0.01)。证 明补充松花粉总黄酮能减轻运动时机体利用蛋白质供 能的程度。 816 现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2010,Vo1.26.N0.8 松花粉总黄酮各剂量组小鼠肝糖原含量均高于 对照组,中、高剂量组与对照组相比分别具显著和极 对照组,中、高剂量组与对照组相比具显著性差异 显著性差异(P<0.05,P<0.01)。表明松花粉总黄酮能 (P<0.05)。显示松花粉总黄酮可增加肝细胞糖原含量。 减少运动时血乳酸的堆积。 松花粉总黄酮各剂量组小鼠血乳酸含量均低于 表2受试物对小鼠运动后各项生化指标的影响(n=1 2, ±s) Table 2 Effect offlavone on muscle lactic acid,hepatic glycogen,Serum urea nitrogen contents ofmice(n=12, 注:与对照组相比:a为P<O.05,b为P<0.01。 3结论 [1】 范国才.中国松属(Pinus)植物花粉的利用研究[J】.云南林 业科技,1997,20:45—52 疲劳是涉及许多生理生化因素的综合性生理过 [2】 赵霖,鲍善芬.中国人怎么吃[M】.北京:军事医学科学出版社, 程,是人体脑力或体力活动到一定阶段时必然出现的 1986.362.367 一种正常的生理现象 J。运动性疲劳是指机体的生理 [3] Cevdet N,Iclal D.Chemical composition and nutritive value 过程不能持续,其机能在—特定水平或不能维持预定 of Pinus pinea L.seeds[J].Food Chemistry,2004,86:365— 的运动强度 。运动实验与生化指标检测相结合可作 368 为评价疲劳的方法。一般认为采用运动耐力实验和血 [4] 何晓燕,孙雪圆,于智洋.松花粉的有效成分及药理作用【J】. 乳酸、血清尿素氮及肌/肝糖原等3项生化检测项目来 东北林业大学学报,2007,35(9):78.80 作为抗疲劳的指标较为合适。若1项以上(含1项) [5] 刘昌衡,td,军,袁文鹏,等.复方海参口服液的抗疲劳和免 耐力运动实验和二项以上(含2项)生化指标为阳性, 疫功能的研究[J].现代食品科技,2009,25(10):1115—1119 即可以判定受试物具有抗疲劳活性 J。 [6] 高珊,童英,吴少平,等.昆明种小鼠抗疲劳试验中若干参考 研究发现运动引起骨骼肌自由基和其它形式的活 值测定【.『】.实验动物科学与管理,2001,18:16—18 性氧增加是导致骨骼肌损伤和疲劳的重要原因之一 [7】 余谦,李明富,宋开源,等.中医药抗体力性疲劳的整体思辨 【l o】。自由基和脂质过氧化损伤与疲劳形成有关。运动 与应用前景[J]_中国运动医学杂志,2001,20:3-4 尤其是大强度运动引起体内自由基大量产生I¨J,这些 [8] 王利安.运动医学[M】.北京:人民体育出版社,2008:148 自由基进而攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸,引起脂质 [9】 何来英,严卫星,楼密密,等.保健食品抗疲劳作用实验研究 过氧化反应,破坏了膜的完整性、流动性及通透性, 【J].中国食品卫生杂志,1997,9(4):1—6;24;46 导致运动能力下降,诱发运动性疲劳,运动性疲劳与 [10]陈吉棣.运动营养学[M】.北京:北京医科大学出版社,2002: 出现的脂质过氧化增强、Ca2+稳态失调、能量代谢紊 33-37.298-301 乱及生物膜损伤之间具有紧密的联系。补充抗氧化剂 【1l】王兰,葆琪.现代劳动卫生学[M】.北京:人民卫生出版社, 能阻抑这种改变,提高运动能力lJ…。 1994.15.20 马尾松花粉总黄酮能延长小鼠的游泳时间和爬杆 [12】Reddy KV,Kumar TC,Prasad M,et a1.Pulmonnary lipid 时间,降低了运动后血清BUN浓度,提高肝糖元的 peroxidation and antioxidant defenses during exhaustive 储备量,增强清除乳酸能力。松花粉总黄酮含丰富的 physical exercise:therole of vitamin E and selenium[J]. 黄酮类物质,它们在清除因运动而产生的自由基过程 Nutriiton,1998,14:448-451 中起着重要的作用[1 ,可通过降低运动后的自由基 [13】Kanter M M.Free radicals,exercise,and antioxidant 浓度,减轻自由基的损伤程度,从而减缓运动疲劳的 supplementation[J].International Journal of Sport Nutriiton, 产生,这可能是松花粉总黄酮抗疲劳作用的机制之一。 1994.4:205.220 参考文献 8l7 

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