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果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌组织的表达及其对预后的影响解析

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・1088・生堡塞堕窆E塾盘壶!!!!生兰旦筮!!鲞箜堡塑鱼堕』垦堑!!堡:垒P巫!垫!!:!丛:箜:盟!:兰・临床研究・果糖一1,6一二磷酸酶在肝癌组织的表达及其对预后的影响杨碌陈建平徐斌杜鹏黄浩杰蒋敬庭作者单位:213003常州,苏州大学附属第三医院消化内科(杨绿、陈建平),肿瘤生物诊疗中心(徐斌、杜鹏、蒋敬庭);MN55905罗切斯特,美国梅奥临床医学院(黄浩杰)通信作者:蒋敬庭,Email:jiangjingting@suda.edu.cnDOI:10.3760/cma.J.issn.1001-9030.2016.04.067【摘要】目的检测果糖-1,6-二磷酸酶(FBPl)在肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达,探讨其对肝癌患者预后的影响。方法应用免疫组织化学法检测90例肝癌患者肿瘤组织及对应的癌旁组织中FBPI表达。采用配对秩和检验比较肝癌组织与癌旁组织中FBPl的表达水平,应用,检验分析FBPl表达与I临床病理特征的关系。应用Kaplan—Meier法和Log.rank检验分析FBPl表达水平与患者生存期的关系。结果肝癌组织中FBPI的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(Z=7.952,P<0.01),FBPl在>3cm的肝癌组织中表达显著低于≤3cm的肝癌组织(P<0.01)。美国肿瘤联合会(AJCC)分期中,Ⅲ一Ⅳ期肝癌组织FBPl表达水平低于I~Ⅱ期(P<0.01),且FBPl低表达的肝癌患者平均生存期显著低于FBPl高表达组[15.29个月比50.17个月,95%可信区间(c,):19.71—38.30,P<0.05]。结论肝癌组织中FBPl表达水平显著下降,FBPl低表达患者预后较差,FBPl与肝癌预后相关,可作为判断肝癌患者预后的参考指标。【关键词】果糖.1,6-二磷酸酶;肝癌;免疫组织化学;预后基金项目:国家自然科学基金(81171653);国家自然科学基金海外及港澳学者合作研究基金(31428005);江苏省条件建设与民生科技专项资金项目(BL2014034);江苏省“333工程”科研项目(BRA2叭3054、BRA2014064)Expressionoffructose一1.6一bisphosphataseinheptocelharcarcinomatissuesanditseffectprognosisofpafientstheonPe增,HuangHaojie,JiangJingtingDepartmentofGstroenterology,the孤以AffiliatedHospitalofSoochowUniversity,Changzhou213003,Chi—na(比增J,ChenJP);DepartmentofTumorBiologicalTreatment,the死irdAffiliatedHospitalofSoo—chowUniversity,Changzhou213003,China(XuB,DuP,JiangJT);MayoClinwCancerCenter,MayoainicCollegeofMed&ine,RochesterMN55905,USA(HuangHJ)Correspondingauthor:JiangJinting,Email:jiangjingting@suda.edu.enYang如曙,ChenJianping,XuBin,Dutheexpressionleveloffructose—l,6一bisphosphatase(FBPl)inhepatoeellularcarcinomaandadjacenttissues.Determineitseffectontheprognosisofpatients.MethodsTissuesfrom90easesofheptocellularcarcinomawereevaluatedfortheexpressionofFBPln.examine【Abstract】0bjectiveTosingimmunohistochemistry.WilcoxonSignedRankstestwasusedtocomparetheexpressionlevelofFBPIintumorandadjacenttissues.TheassociationofclinicalparameterswithexpressionlevelofFBPlwase—valuatedusingchi—squaretest.Kaplan—MeiertestandationLog—ranktestwereusedtodeterminetheassoci-oftheexpressionlevelofFBPlwiththeoverallsurvivalofpatient.ResulIsFBPlexpressionlevelintumortissuesWassignificantlylowerthaninadjacenttissues(Z=7.952,P<0.01).ExpressionofFBPlwasmuchlowerinheptocelluarcarcinoma(HCC)tissueswiththetumorsizelargerthan3am(P<0.01).ACCordingtoameficanjointcommitteeoncancer(nJCC)stage,FBPlexpressionwaslowerinIII1Vstage(P<0.01).TheaveragesurvivaltimeofFBPllOWexpressionpatientswasmuchshorterthanFBPlhighexpressionpatients『j3.29monthVS.50.17month,95%confidenceinterval(CI):19.71—toFBPlexpressionwassionisassOCiatedwithWorseprognosis.implyingthatit38.30.P<0.05].Conclusioncarcinoma.significantlycandecreasedinHCC.FBPllowexpres—beusedasanreft:renceindexforheptocellular【Keywords】Fructose—l,6一bisphosphatase;Heptocelluarcarcinoma;Immunohistochemistry;PrognosisFundprogram:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81171653);NationalNaturalSci—eneeFoundationofCollaborationofHongKong,MacaoandOverseaScholars(31428005);JiangsuProv—inceScienceandTechnologyofConstructionandPeople’SLivelihoodSpecialFunds(BL2014034);Jiang一万方数据主堡塞墅处登盘查垫!!生!旦蔓!!鲞苤兰塑垦!也』量婴坠!g:垒e趔!!!!:Y!!:!!:塑!:!Province“333Project”ResearchProjectsFunded・1089・SUProjects(BRA2013054,BRA2014064)肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,尽管肿瘤标志物、cT、磁共振成像(MRI)等辅助检查技术水平与手术、介入治疗、放化疗及免疫治疗等手段不断提高,但是肝癌早期诊断率不高,患者预后差。肿瘤细胞在供氧充足的环境下仍通过糖酵解为自身供能,果糖-1,6-二磷酸酶(FBPl)是糖异生的限速酶,可将糖酵解的中间产物果糖一1,6.二磷酸转化为果糖一6一磷酸以阻断糖酵解。有研究结果显示,FBPl在乳腺癌、肾癌中表达下降¨引。肝脏是糖代谢及糖异生的重要器官,本研究旨在检测FBPl在肝癌中的表达并分析FBPl表达与患者预后的关系。资料与方法1.一般资料:肝癌组织芯片取自2006年8月至2009年11月进行手术的90例肝癌患者(上海超越生物科技公司,HliV—HCCl80Sur-02),并用癌旁组织作为阴性对照。所有标本由两位病理专家进行组织学染色评估。肝癌患者术后随访4—6年,生存时间从手术日开始计算。2.免疫组织化学染色:肝癌组织芯片经常规二甲苯、梯度酒精脱蜡、水化,室温下于0.3%H:O:孵育30min,阻断内源性过氧化物酶。抗原修复液100℃处理20min,自然冷却至室温。磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,每次5rain。抗生物素蛋白封闭液室温下封闭1h。孵育一抗后4℃过夜(FBPl兔抗人多克隆抗体,美国Sigma公司,工作浓度1:4000)。次日芯片PBS洗3次后,加二抗室温下孵育lh(鼠/兔通用型二抗)。链霉亲和素一生物素一过氧化物酶复合物(Vector公司)处理30min,芯片再次用PBS洗3次后加二氨基苯胺(DAB)染色,苏木素复染,梯度乙醇及二甲苯脱水,干燥,中性树脂封片。3.免疫组织化学染色评分:芯片染色结果经两位病理专家在双盲的情况下进行评分。随机选择光学显微镜下5个高倍视野(×200),根据阳性细胞百分率评分如下:0分:阳性细胞率为0%;1分:1%~25%;2分:26%~50%;3分:>50%。染色强度评分:0分:阴性;1分:轻度染色;2分:中度染色;3分:重度染色。两者乘积为最终得分。最终评分为0—4分认为FBPl低表达,>4分评为FBPl高表达。细胞质阳性染色则为FBPl阳性表达。4.统计学方法:应用SPSS13.0统计软件分析,FBPl在肝癌组织及癌旁组织中的表达分析采用配对秩和检验。不同临床特征的均衡性分析采用,检验,万方数据生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.FBPl在肝癌组织及癌旁组织中的表达:肝癌组织中染色评分中位数为3(0~9),而癌旁组织中染色评分中位数为9(3—9),见图1。免疫组织化学结果显示,肝癌组织中FBPl低表达率为65.6%。FBPl在肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(Z=7.952,P<0.叭)。2.肝癌组织中FBPl表达水平与患者临床病理特征的关系:分析性别、年龄、肿瘤大小(小肝癌是指单个癌结节≤3cnl,或者相邻两个癌结节直径之和≤3cm)、病理分级、美国肿瘤联合会(AJCC)临床分期以及是否合并肝硬化等l临床资料与FBPl表达水平高低的关系。结果显示,肿瘤越大,FBPl表达水平越低(P<0.01);AJCC分期越高,FBPl表达越低,差异有统计学意义(P<0.01),见表1。表1不同临床病理特征与FBPl表达水平的相关性分析注:AJCC:美国肿瘤联合会;FBPI:果糖.1,6一二磷酸酶;部分资料缺失:包括肿瘤大小缺失l例,AJCC分级缺失3例3.FBPl表达与患者总生存期的关系:FBPl表达水平与患者生存期(0S)密切相关,结果提示FBPl低表达患者平均生存期为34.88个月,而FBPl高表达患者的平均生存期为50.17个月[95%可信区间(c,):19.71~38.30],两组比较差异有统计学意义(P<0.05),FBPl高表达患者累积生存率明显高于FBPl低表达患者(表2,图2)。主堡塞坠窆E型苤壹!Q!鱼生兰旦筮!!鲞筮堡塑鱼!地』坠P璺坠臻,叁四!!Q!垒:!!!:!!,盟!:!口@,!竺巴’..j-,;1.@厂]0、坐坐O图1肝癌芯片的形态学观察免疫组化染色A:肝癌组织苏木素一伊红染色(×50);B:FBPl在肝癌组织中阴性表达(免疫组织化学染色,x50);c:FBPl在肝癌组织中阴性表达(免疫组织化学染色,×200);D:癌旁组织苏木素一伊红染色(×50);E:FBPI在癌旁组织中阳性表达(免疫组织化学染色,×50);F:FBPI在癌旁组织中阳性表达(免疫组织化学染色,×200);FBPI:果糖.I,6.二磷酸酶.表2FBPl表达水平对患者累积生存率的比较(%)DNA甲基化、组蛋白乙酰化和基因印记等表观遗传学现象通过调节基因转录在多种疾病的发生中起重要的作用旧圳,研究提示肝癌细胞中FBPl启动子区超甲基化可降低其生物学活性。本研究结果显示,与癌旁组织相比肝癌组织中FBPl表达水平明显下降。其在非小肝癌肿瘤组织中的FBPl表达显著降低r;且注:FBPl:果糖_l,6-二磷酸酶FBPl的表达水平随肿瘤分期增高而下调。生存分析提示FBPl高表达患者的生存期和累积生存率均显著高于FBPl低表达患者。本研究结果表明,FBPl在肝癌组织中的表达显著降低,其表达水平下调利于肿瘤组织的生长,并与肝癌患者的预后呈负相关。参考文献[1]DongC,YuanT,WuY,eta1.LossofFBPIbySnail・mediatedrepres—inbasal-likebreastsionprovidesmetabolicadvantagescaneer[J].CancerCell,2013,23(3):316.331.[2]乍存时问(月)DOI:10.1016/j.ccr.2013.01.022.¨B,QiuB,LeeDS,eta1.Fructose—l,6-bisphosphataseopposescarcinomaprogression[J].Nature,2014,513(7517):251-255.DOI:10.1038/naturel3557.renal注:FBPl:果糖一l,6一二磷酸酶图2[3]刘宇飞,孙圣荣,陈创,等.肝癌缺失基因1的表达及其甲基化与甲状腺乳头状癌的关系[J].中华实验外科杂志,2014,3(1):152-155.LiuYF,SunSR,ChenC,eta1.Proteinexpressionandpromotermeth—ylayionofthedeletedinlivercancer—lgeneinpapillarythyroidcarci—FBPI表达对肝癌患者生存期的影响讨论[4]noma[J].ChinJExpSurg,2014,3(1):152・155.DOI:10.3760/ema.j.issn.1001-9030.2014.01.053.肿瘤细胞摄糖率显著高于正常细胞,即使在供氧充足的条件下,仍通过糖酵解方式消耗大量的葡萄糖供能并产生大量的乳酸,这种葡萄糖代谢的变化被认为是肿瘤发病的重要原因之一∞1。FBPl是糖异生的曹如波,柯杨,薛军,等.Runt相关转录因子3基因甲基化在胃癌组织中的表达及临床意义[J].中华实验外科杂志,2013,30(9):1965—1967.CaoRB,KeY,XueJ,eta1.ExpressionandclinicalsignificanceofmethylationingastriccancerRunt・relatedtranscriptionfactor3genetissue[J].ChinJExpSurg,2013,30(9):152・155.(收稿日期:2015—10.11)DOI:10.3760/cma.i.issn.1001-9030.2013.09.066.限速酶,主要表达于肝脏和肌肉组织,以维持糖酵解与糖异生之间的动态平衡。万方数据

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