瘦素对大鼠血管张力的影响及机制研究

７５４．　．中国心血管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＪｏＭｍ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕ　Ｒｅｓｅｎｒｃ　，Ａｕｇｕｓｔ　２０１５，　。ｚ・１３，Ⅳ０・８　瘦素对大鼠血管张力的影响及机制研究　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｏｎ　ｒａｔ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｔｏｎｅ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｓｔｕｄｉｅｓ　陈岳林沈粤春　基金项目：２０１０年度广东省自然科学基金面上项目（项目编号：１０１５１ｏ０９５Ｏ４Ｏ０ｏ００７）　作者单位：５１０１２０广东省广州市，广州医科大学附属第一医院心内科　通讯作者：沈粤春，Ｅ－ｍａｉｈ　ｓｈｅｎｙｃｌＯ２８０６＠１６３．ｃｏｒｎ　【摘要】　目的探讨瘦素对Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉环血管张力改变及其影响因素。方法　１５只雄性　Ｗｉｓｔａｒ大鼠，按以下分组：①ＰＢＳ对照组（ｃ）；②Ｏ．１　ｍｇ／ｋｇ低浓度瘦素注射组（Ｌ）；③０．５　ｍｇ／ｋｇ高浓度瘦素注　射组（Ｈ）。注射７　ｄ。记录大鼠日进食量、体重，测量平均动脉压（ＭＡＰ）；测定胸主动脉环对各种血管活性药物　的反应性；酶联免疫吸附法测定血清中６一酮前列腺素Ｆ．　（６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　）和血栓素Ｂ　（ＴＸＢ：）水平。结果注　射瘦素第２天即明显抑制大鼠进食量［Ｈ（２１．７５＿＋２．４１）ｇ比Ｌ（２３．８４＿＋０．７４）ｇ比Ｃ（２８．５４＿＋１．１５）ｇ］。Ｈ组大鼠体　重在第４天开始显著下降［Ｈ（２５９．２５＿＋９．３１）ｇ比Ｃ（２７２．７５±１２．９２）ｇ，Ｐ＜Ｏ．０５］，持续至第７天［Ｈ（２５７．５￣７．９６）ｇ　比ｃ（２８１．２５±１１．２８）ｇ，Ｐ＜０．Ｏ１］。与Ｃ组比较，Ｌ组和Ｈ组ＭＡＰ无显著升高［Ｈ（８Ｏ．７３－＋５．５６）ｍｍ　Ｈｇ比Ｌ　（８３．４５－＋７．４７）ｍｍ　Ｈｇ比ｃ（８４．５３－＋２．１７）ｍｍ　Ｐｉｇ，Ｐ＞Ｏ．０５］。胸主动脉环对血管收缩剂（苯肾上腺素、花生四烯　酸）的张力无显著改变［１Ｏ　Ｍ苯肾上腺素收缩百分比，Ｈ（１３３．６４±２６．０６）％比Ｌ（１４６．９８－＋２０．３４）％比ｃ　（１４０．９１－＋２２．１７）％，Ｐ＞Ｏ．０５；１０　Ｍ花生四烯酸收缩百分比，Ｈ（２２．５２±１．５５）％比Ｌ（２３．７８＿＋２．４３）％比ｃ（２２．７６－＋　１．１）％，Ｐ＞Ｏ．０５］。但Ｈ组由一氧化氮（ＮＯ）介导的内皮细胞依赖性血管舒张剂乙酰胆碱（Ａｃｈ）和缓激肽（ＢＫ）　引起的舒张加强，Ａｃｈ半大效应浓度值减少（ＥＣ　）［Ｈ（一６．３３＋０．１１）比Ｃ（一５．６９－＋０．１２），Ｐ＜０．０５］。瘦素加强ＢＫ　的舒张作用被内皮型一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ—ＮＡＭＥ明显抑制。Ｈ组体重变化与Ａｅｈ最大舒张值百分比　（Ｅｍａｘ）呈正相关（ｒ＝Ｏ．７３７，Ｐ＜０．０５）。另外，Ｈ组血清ＴＸＢ２水平显著升高［Ｈ（６０．１５－＋８．８４）ｎｇ／ｍｌ比ｃ（５０．４４－＋　６．４）ｎｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５］。结论较长时间注射瘦素虽上调血小板收缩血管物质ＴＸＢ：的表达，但综合效应是增强　动脉内皮细胞依赖的舒张功能，这与舒血管物质６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　无关，而与增加内皮细胞ＮＯ表达及注射瘦素　后摄食量减少、体重减轻、内皮细胞舒张功能改善有关。此研究结果为减肥防治高血压提供了客观依据。　【关键词】瘦素；　内皮细胞；环氧化酶一２；前列环素；　血栓素；血管张力　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５３０１．２０１５．０８．０２１　中图分类号Ｑ９５—３３；Ｒ５４　文献标识码Ａ　文章编号　１６７２—５３０１（２０１５）０８—０７５４—０６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｏｎ　ｒａｔ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｔｏｎｅ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ＣＨＥＮ　Ｙｕｅ—ｌｉｎ，ＳＨＥＮ　Ｙｕｅ—ｃｈｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔｌ，Ｇｕａｎｇａｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０１２０，Ｃｈｉｎａ　—　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＳＨＥＮ　Ｙｕｅ—ｃｈｕｎ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈｅｎｙｃ１０２８０６＠１６３．ｃｏｍ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ　ｔｈｏｒａｃｉｃ　ａｏｒｔｉｃ　ｒｉｎｇｓ　ｖａｓ—　ｃｕｌａｒ　ｔｅｎｓｉｏｎ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｉｆｔｅｅｎ　ｍａｌｅ　ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　３　ｇｒｏｕｐｓ：（１）　ＰＢＳ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｃ）．（２）Ｏ．１　ｍｇ／ｋｇ　ｌｏｗ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ｌ）．（３）０．５　ｍｇ／ｋｇ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｅｅｎｔｒａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ｈ），ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　７　ｄａｙｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄａｉｌｙ　ｆｏｏｄ　ｉｎｔａｋｅ，ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｍｅａｎ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ（ＭＡＰ）ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｔｈｏｒａｃｉｃ　ａｏｒｔｉｃ　ｒｉｎｇｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ．Ｅｎｚｙｍｅ　ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｓｅｒｕｍ　６一Ｋｅｔｏ　ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ　ＦＩ　（６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ１　）ａｎｄ　ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ　Ｂ２（ＴＸＢ２）ｌｅｖｅ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂ－　ｉｔｅｄ　ｄａｉｌｙ　ｆｏｏｄ　ｉｎｔａｋｅ　Ｏｌｌ　ｔｈｅ　ｎｅｘｔ　ｄａｙｌＨ（２１．７５－＋２．４１）ｇ　ｖｓ　Ｌ（２３．８４－＋０．７４）ｇ　ｖｓ　Ｃ（２８．５４－＋１．１５）ｇ］．Ａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｇｉｎ—　ｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒｔｈ　ｄａｙｓ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｌｏｓｅ　ｏｎｌｙ　ｉｎ　Ｈ　ｇｒｏｕｐ［Ｈ（２５９．２５－＋９．３１）ｇ　ｖｓ　Ｃ（２７２．７５－＋１２．９２）ｇ，Ｐ＜　０．０５］，ａｎｄ　ｌａｓｔ　ｔｏ　７　ｄａｙｓ［Ｈ（２５７．５－＋７．９６）ｇ　ｖｓ　Ｃ（２８１．２５±１１．２８）ｇ，Ｐ＜Ｏ．０１］．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　Ｃ　ｇｒｏｕｐ，Ｌ　ａｎｄ　Ｈ　ｒｏｕｐ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｉｇｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ＭＡＰｌＨ（８０．７３－＋５．５６）ｈｉｍ　Ｈｇ　ｖｓ　Ｌ（８３．４５＋７．４７）ｍｍ　Ｈｇ　ｖｓ　Ｃ（８４．５３－＋２．１７）ｍｍ　Ｈｇ，　！　？　管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖ∞ｃ¨ｌａｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａｕｇｕｓ　２０１５，　。１．１３，　．８　Ｐ＞０．０５　Ｊ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｄ　ｔｏ　ｖａｓｏｃｏｎｓｔｉｒｃｔｏｒ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ　ａｎｄ　ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ［１０　Ｍ　ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｈ（１３３．６４￣２６．０６）％ｖｓ　Ｌ（１４６．９８￣２０．３４）％ｖｓ　Ｃ（１４０．９１±２２．１７）％，Ｐ＞０．０５：１０一　Ｍ　．７５５．　ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｈ（２２．５２－＋１．５５）％ｖｓ　Ｌ（２３．７８￣２．４３）％ｖｓ　Ｃ（２２．７６－＋１．１）％，Ｐ＞０．０５］．Ｈ　ｇｒｏｕｐ　ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ　ａｇｅｎｔｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ（ＮＯ）：ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（Ａｃｈ）　ａｎｄ　ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ（ＢＫ）ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　Ａｃｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　５０％ｍａｘｉｍａｌ　ｅｆｆｅｃｔ（ＥＣ５。）［Ｈ（一６．３３－＋０．１１）ｖｓ　Ｃ（一５．６９±　０．１２），Ｐ＜０．０５　ｊ．Ｌｅｐｔｉｎ　ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｄ　ｖｓｏｒａｅｌａｘａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＢＫ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙ　Ｌ—ＮＡＭＥ（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｅｎ—　ｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｎｉｔｉｒｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）．Ｈ　ｇｒｏｕｐ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ａｃｈ　ｐｅ　ｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｍａｘｉｍａｌ　ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ（Ｅｍａｘ）（ｒ　０．７３７，Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，Ｈ　ｇｒｏｕｐ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ＴＸＢ２　ｌｅｖｅｌ［Ｈ（６０．１５＿＋８．８４）ｎｇ／ｍｌ　ｖｓ　ｃ（５０．４４＿＋６．４）ｎｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５］．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｏｒｓ　ＴＸＢ２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｆｉｎａｌ　ｅｆｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ　ｉｓ　ｅｎｈａｎｃｉｎｇ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｅｎ—　ｄｏｔｈｅｌｉｌ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａ　ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｖａｓｏｄｉｌａｔａｔｉｏｎ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦｌ　ｂｕｔ　ｔｏ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＮＯ，ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｆｏｏｄ　ｉｎｔａｋｅ　ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｉｎ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌｏｓｅ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｄｉａｓｔｏｌｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａｎ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｔｈａｔ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌｏｓｅ　ｉｓ　ｂｅｎｅｆｉｔ　ｔｏ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｌｅｐｔｉｎ；　ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａＩ　ｃｅＩＩ：　ＣＯＸ一２；Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ：Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ：　Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｔｏｎｅ　瘦素是一种由肥胖基因（ｏｂ基因）编码的、１６７　个氨基酸组成、相对分子质量约１６　ＫＤａ的蛋白质　产物，或称为蛋白类激素，主要由脂肪细胞合成和　１．１．３主要器材无创鼠尾血压计（美国Ｋｅｎｔ公　司）；ＪＺ３００型高精度张力换能器（量程５　ｇ，北京新　航兴业科贸公司）；ＰｏｗｅｒＬａｂ数据采集分析系统（澳　大利亚ＡＤ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）。　１．２方法　分泌。瘦素进入血液循环后，作用于中枢和外周不　同亚型的瘦素受体，主要功能是通过中枢系统抑制　食欲、增加能量消耗以调节能量平衡…。瘦素还具　有广泛的生物学效应，如调节免疫、炎症、造血　等…。短时间（３０　ｍｉｒ０内使用超生理剂量（１６０　ｎｇ／ｍＰ　瘦素能增加内皮细胞表达内皮型一氧化氮合成酶　（ｅＮＯＳ）［２］，而使用生理剂量（１０　ｎｇ／ｍ１）瘦素能上　调神经型一氧化氮合成酶（ｎＮＯＳ）的表达＿３Ｉ。但　较长时间（７　ｄ）注射大剂量（１　ｇ・ｋｇ－１・ｍｉｎ－１）瘦素　却能通过激活交感神经【引、增加肾内氧化应激＿５１等　方式升高平均动脉压（ＭＡＰ）。目前关于较长时间注　射瘦素的动物血管环对血管活性物质的反应性改　变尚不明确．本研究将就此方面展开探讨。　１．２．１分组将Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成３组：（￣ＰＢＳ　对照组（ｃ组），注射生理盐水；②０．１　ｍｇ／ｋｇ低浓度　瘦素注射组（相当于瘦素缺乏型小鼠生理补充剂　量，Ｌ组）；③０．５　ｍｇ／ｋｇ高浓度瘦素注射组（５倍生　理补充剂量，Ｈ组）。分别向腹腔内注射等体积药物　７　ｄ。ＳＰＦ级饲养环境，自由进食，昼夜时长为１２　ｈ：　１２　ｈ，记录日进食量、体重及注射瘦素２　ｈ后ＭＡＰ。　１．２．２大鼠离体胸主动脉环制备及张力测定　大　鼠麻醉，胸主动脉分离，血管环制备及固定参考付　阳等【　１方法。麻醉后从右心室抽取３　ｍｌ血液用于　Ｅｌｉｓａ实验。每只大鼠制备３条血管环，共１５条／　组。置３７℃Ｋ—Ｈ溶液中，平衡６０　ｍｉｎ，隔１５　ｍｉｎ　１材料与方法　１．１材料　更换Ｋ—Ｈ溶液，调整基础张力值为２　ｇ。用６０　ｍＭ　８周龄ＳＰＦ级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠　花生四烯酸（ＡＡ）（美国Ｓｉｇｍａ　１．１．１实验动物１．１．２主要试剂氯化钾（ＫＣ１，预激液）预收缩平衡后，更换Ｋ—Ｈ溶　液，并重复１次。分别测量１０—３　Ｍ苯肾上腺素　（Ｐｈｅ，仅受体激动剂）；１０—５　Ｍ　ＡＡ（环氧合酶作用底　１５只（中山大学实验动物中心）。　公司）；缓激肽（ＢＫ）（美国Ｍｅｒｃｋ公司）；Ｎ一（２一甲氧　基环己烷一４硝基）甲砜胺（ＮＳ一３９８）、Ｎ一硝基一Ｌ一精　氨酸甲酯盐酸盐（Ｌ—ＮＡＭＥ）（上海碧云天）；６一Ｋｅｔｏ　物）及预先孵育３　Ｍ　ＮＳ一３９８（选择性ＣＯＸ一２抑制　剂）［７１　３０　ｍｉｎ后再加入ＡＡ各组的张力值。分别测　量１Ｏ一３Ｍ　Ｐｈｅ预收缩稳定后依次加入不同浓度　ＰＧＦ　酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）试剂盒（美国　Ｃａｙｍａｎ公司）；重组大鼠瘦素、ＴＸＢ，Ｅｌｉｓａ试剂盒　（美国Ｒ＆Ｄ公司）；Ｋｒｅｂｓ—Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（Ｋ—Ｈ）溶液　（ＮａＣ１　１　１８　ｍＭ，ＫＣ１　４．７　ｍＭ，ＣａＣ１２　２．５　ｍＭ，ＭｇＳＯ４　１．２　ｍＭ，ＫＨ２ＰＯ４　１．２　ｍＭ，ＮａＨＣＯ３　２５　ｍＭ，Ｇｌｕｃｏｓｅ　（１０—８～１０—３　Ｍ）乙酰胆碱（Ａｃｈ，内皮细胞依赖的血　管舒张剂）；（１０—８—１０—５　Ｍ）ＢＫ（内皮细胞依赖的血管　舒张剂）；（１０－９～１０—３　Ｍ）硝普钠（ＳＮＰ，非内皮细胞依　赖的血管舒张剂）及预先孵育０．３　ｍＭ内皮型一氧　化氮合成酶抑制剂Ｌ—ＮＡＭＥ　３０　ｍｉｎ，再加入１０　Ｍ　测各组的张力值。通过ＬａｂＣｈａｒｔ　７．２读出张力数　１１　ｒａＭ）（Ｆ－州化学试剂厂）。　７５６．　中国心血管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＪｏＭｒｎａｌ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，Ａｕｇｕｓｔ　２０１５，　。ｌ・１３，Ｎｏ・８　．据，使用ＧｒａｐｈＰａｄ　ＰｒｉｓＩｌｌ　５对曲线进行非线性拟合　计算半大效应浓度值（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　５０％ｍａｘｉ—　ｍａｌ　ｅｆｆｅｃｔ，ＥＣ５ｏ）。　１．２．３酶联免疫吸附测定　采用ＥＬＩＳＡ（竞争法）　测定各组血清中６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　和ＴＸＢ：水平。严格　按照各自Ｅｌｉｓａ说明书进行：血清经离心、２倍稀　释、配制标准品、加样、加酶标抗体、显色、孵育及终　止反应后，３Ｏ　ｍｉｎ内在酶标仪波长为４０５　ｎｍ处读　出各组６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ。　ＯＤ值，在４５０　ｎｍ处读出各　组ＴＸＢ，ＯＤ值。根据ＯＤ值及Ｅｌｉｓａ说明书公式计　算出各标准品及待测样品Ｂ／Ｂ０％。利用Ｃｕｒｖｅ　Ｅｘｐｅｒｔ　１．３对曲线拟合后得出各自公式，根据公式　计算待测样品浓度。　１．３统计学方法采用ＳＰＳＳ　１３．０统计软件进行　统计。数据用　±ｓ表示，两组间比较采用样本ｔ　检验，进食量及张力值采用重复测量方差分析进行　组问均值比较。当差异存在显著性时，方差齐性用　Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法，方差不齐用Ｄｕｎｎｅｔｔ　ｓ　Ｔ３进行两两比　较。Ｐ＜０．０５时认为差异有统计学意义。　２结果　２．１瘦素对进食量、体重及ＭＡＰ的影响注射瘦　素第２天后大鼠进食量即开始减少，以Ｈ组最为　明显。两瘦素注射组抑制大鼠进食量均在第４天达　高峰，Ｌ组在５　ｄ后不再显著抑制进食量（Ｐ＞Ｏ．０５），　但Ｈ组持续至第７天（图１）。在第４天及第７天观　察大鼠体重，与Ｃ组比较，注射瘦素后各组体重均　有下降趋势，Ｌ组变化不显著，但Ｈ组体重显著减　轻（图２）。随注射时间的延长，各组ＭＡＰ均有升高　趋势，但与Ｃ组比较，未见统计学差异（Ｐ＞０．０５）。见　表１。　２．２注射瘦素后胸主动脉环血管张力的改变注　射瘦素７　ｄ后Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉环对１０—３　Ｍ　Ｐｈｅ　引起的收缩无显著影响。以６０　ｍＭ　ＫＣ１收缩为　１００％作为对照，Ｈ组［（１３３．６４＋２６．０６）％］比Ｌ组　［（１４６．９８＋２０．３４）％］比Ｃ组［（１４０．９１＋２２．１７）％］，Ｐ　均＞０．０５。瘦素对１０－５Ｍ　ＡＡ及预先孵育３　ｔｘＭ　ＮＳ～　３９８　３０　ｒａｉｎ后再加入１０—５　Ｍ　ＡＡ引起的收缩也无　显著改变（图３）。但Ｈ组由ＮＯ介导的内皮细胞依　赖性血管舒张剂Ａｃｈ和ＢＫ引起的舒张均加强（图　４、５），Ａｃｈ　ＥＣ　值减小（表２）。为了进一步说明高　浓度瘦素加强由ＮＯ介导的内皮细胞依赖性舒张　功能，研究通过预先孵育０．３　ｍＭ　Ｌ—ＮＡＭＥ　３０　ｍｉｎ　后加入１０—５　Ｍ　ＢＫ，瘦素加强ＢＫ的舒张效应消失　（表２），由ＳＮＰ引起的非内皮细胞依赖的舒张功能　３５　３Ｏ　２５　妞　２Ｏ　皿　ｌ５　０　ｌ　２　３　４　５　６　７　天数　注：与ＰＢＳ注射组比较，ａｐ＜０．０１，ｂｐ＜ｏ．０５　图１注射瘦素对Ｗｉｓｔａｒ大鼠日进食量的影响　Ｖ　１１毋ｌ】　４　天数　注：与ＰＢＳ注射组比较，　Ｐ＜０．０５，ｂｐ＜０．叭　图２注射瘦素对Ｗｉｓｔａｒ大鼠第０．４、７天体重的影响　表１注射不同浓度瘦素对Ｗｉｓｔａｒ大鼠　平均动脉压（ＭＡＰ）的影响（　）　组别　例数—ＭＡＰ（　ｍｍ　Ｈｇ　）　—ｄａｙ（０）ｄａｙ（４）ｄａｙ（７）　并未发生改变（表２）。Ｈ组体重变化与Ａｃｈ　Ｅｍａｘ　呈正相关，ｒ＝０．７３７，Ｐ＜０．０５，与Ａｃｈ　ＥＣ　相关性不　显著，ｒ＝０．６４８，Ｐ＞Ｏ．０５。　２．３瘦素对血清６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　和ＴＸＢ　表达水平　的影响注射瘦素７　ｄ后对大鼠血清中６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　表达水平无影响，各组间差异无统计学意义，　但高浓度瘦素组血清ＴＸＢ，水平显著升高。各组　ＴＸＢ２／６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ，　比值未见统计学差异。见表３。　３讨论　瘦素是一种作用广泛的内分泌激素，除抑制摄　食外，还有调节免疫、炎症、造血等生物学效应…。　研究发现，在离体实验中，瘦素通过促**滑肌肥　大ｌ　８ｌ、上调内皮素一１　及醛固酮表达　］等方式参与　中国心血管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅ　ｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，Ａｕｇｕａｔ　２０１５Ｖｏ１．１３．Ｎｏ．８　．・７５７・　表２注射不同浓度瘦素７　ｄ后Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉环对血管舒张剂ＥＣ　及Ｅｍａｘ的改变　）　￣Ｅ：Ａｃｈ：乙酰胆碱；ＢＫ：缓激肽；ｓＮＰ：硝普；Ｌ－ＮＡＭＥ：选择性内皮型一氧化氮合成酶抑制剂；ＥＣ　：半大效应浓度值；Ｅ　ａｘ：最大舒张值。与ＰＢＳ注射组　比较，‘Ｐ＜０．０５，ｂｐ＜ｏ．Ｏ１　一　ＬⅡ１　姆　图３注射瘦素７　ｄ。Ｗｌｓｔａｒ大鼠胸主动脉环对１０－ＳＭ　ＡＡ及预先孵育１０－￣Ｍ　ＮＳ一３９８　３０　ａｒｉｎ后　加入１０－￣ＭＡＡ收缩百分比改变　、／　妞　逝　８　７　６　５　４　乙酰胆碱（ｈｅｈ，一ｌｏ　）　注：以１０　Ｍ　Ｐｈｅ收缩为１００％，　Ｏ．０５，ｂＰ＜Ｏ．Ｏｌ　图４注射瘦素７　ｄ。Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉环对不同　浓度（１Ｏ　１０　Ｍ）Ａｃｈ的舒张功能反应　＾　恤　琏五　８　７　６　Ｓ　缓激敢（ＢＫ，一ｌｏｇ　）　注：以ｌ０　Ｍ　Ｐｈｅ收缩为１００％，　Ｏ．０５　图５注射瘦素７　ｄ。Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉环对　不同浓度（１０４－１０　）ＢＫ的舒张功能反应　表３注射不同浓度瘦素７　ｄ后对Ｗｉｓｔａｒ大鼠血清中　６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦｋ和ＴＸＢ２表达的影响（　）　注：６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　６一酮前列环素ＦＩ　；ＴＸＢ２：血栓素Ｂ　。与ＰＢＳ注射组比　较，　（Ｏ．０５　高血压的发病。在活体实验中不断发现，长期注射　瘦素的动物通过激活交感神经　、氧化应激［５］、增　加肾内Ｎａ￣－Ｋ＋一ＡＴＰ酶活性ｆ１】】等方式参与高血压　的发病。但也有关于瘦素增加内皮细胞表达一氧　化氮（ＮＯ）［３１、释放内皮细胞衍生性超级化因子　（ＥＤＨＦ）ｌｌ２］从而起舒张血管作用的报道。而目前关　于较长时间注射瘦素后动物内皮细胞依赖性舒张　功能改变尚不明确。　为探讨较长时间注射瘦素后大鼠动脉环对血　管活性物质的反应性，本研究通过注射不同浓度瘦　素后记录进食量、体重、血压及张力值的改变。结果　显示，低浓度瘦素注射组（０．１　ｍｇ／ｇ）除在第２天到　第４天明显抑制大鼠进食量外，对体重、ＭＡＰ、血管　张力及血清６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　ＴＸＢ　水平无显著影响，　表明注射低浓度瘦素仅发挥了抑制食欲、增加能量　消耗以调节能量平衡的生理学效应。但在高浓度瘦　素注射组中，除抑制大鼠进食量、降低体重外，还增　强了内皮细胞依赖的舒张功能，这种作用主要源于　增加了ＮＯ合成及释放。原因包括：（１）高浓度瘦素　注射组加强由Ａｃｈ引起的舒张，而Ａｃｈ主要通过　ｅＮＯＳ产生ＮＯ引起血管舒张。（２）ＢＫ通过３种方式　引起血管张［１３】：①通过ｅＮＯＳ合成ＮＯ；②在细小血　管内释放ＥＤＨＦ；③通过ＣＯＸ一２产生前列环素　ＰＧＩ，。但预先孵育Ｌ—ＮＡＭＥ（ｅＮＯＳ合成酶抑制剂）　后瘦素加强舒张功能消失，证明高浓度瘦素注射组　加强ＢＫ的舒张效应主要源于增加ＮＯ的合成，并　不是通过上调ＣＯＸ一２表达，增加ＰＧＩ，释放，而且　７５８．　中国心血管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｆｎｒＲｅｓｅｎｒｃ＾，Ａ　ｚ＾　ｓ　２Ｄ　５，　。ＬＪ３，Ⅳ０　．血清中６一Ｋｅｔ０　ＰＧＦ，　水平并未升高，它是ＰＧＩ：在　血液中的稳定存在形式。但本研究局限之处在于仅　用了２个不同浓度瘦素进行对比研究。另外，ＡＡ对　血管产生收缩或舒张作用主要取决于动物种属及　血管半径，通过ＣＯＸｓ将ＡＡ分解成ＰＧＩ　和ＴＸＡ：，　舒缩作用取决于两者的比例［１４１。本研究发现ＡＡ对　大鼠胸主动脉环起收缩作用，证明ＴＸＡ，占主要作　用地位。但注射瘦素后动脉环对ＡＡ、ＮＳ一３９８＋ＡＡ　引起的收缩并无影响，通过孵育ＮＳ一３９８后各组收　缩百分比均下降１０％左右，证明外源性ＡＡ通过　ＣＯＸ一２分解成ＴＸＡ，约占５０％。但注射瘦素后并不　能通过诱导内皮细胞中ＣＯＸ一２表达改变ＡＡ收缩　百分比。另外本研究发现，高浓度组ＴＸＢ　水平升　高，原因可能在于ＴＸＢ，可由血小板产生，当收集血　液后未及时进行离心时会升高。而且在临床上也有　报道，高瘦素血症肥胖妇女的血、尿液中１１一脱氢　血栓素Ｂ，表达升高＿ｌ５】，后者也是ＴＸＡ，的稳定代谢　物。所以有足够理由相信，较长时间注射高浓度瘦　素能上调动物血小板表达血栓素Ａ，，增加血小板　的聚集。　与本研究不同的是Ｍａｎｕｅｌ—Ａｐｏｌｉｎａｒ等【Ｉ６］发现　瘦素能上调大鼠内皮细胞ＣＯＸ一２　ｍＲＮＡ表达，而　本研究在细胞实验中发现除此作用外，瘦素还能显　著上调大鼠主动脉内皮细胞的ＣＯＸ一２蛋白表达，　升高６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ１　水平并降低ＴＸＢ２／６一ｋｅｔｏ　ＰＧＦ１　比例，但对ＴＸＢ，无影响。说明瘦素可能通过增加　ＣＯＸ一２、ＰＧＩ，表达以增强内皮细胞依赖的舒张功　能。虽然在体内我们发现瘦素并没有升高６－Ｋｅｔｏ　ＰＧＦｌ　水平、降低ＴＸＢ２／６一ｋｅｔｏ　ＰＧＦ】　比例，甚至相　反上调血小板表达ＴＸＢ，，但是在离体动脉环中证　实瘦素的确能增加内皮细胞依赖性舒张功能。这与　细胞实验总的结果是一致的，即从细胞实验中由各　种检测指标推测瘦素能增强动脉舒张功能，并由此　动脉环实验得到了验证。至于瘦素对ＣＯＸ一２及其　下游产物６一Ｋｅｒｎ　ＰＧＦ　和ＴＸＢ　表达有所差异，笔　者认为与使用瘦素浓度不一致、注射方式、瘦素代　谢速度及体内有众多因素参与（例如血小板）等有　关，这些需要在今后的研究中进一步探讨。另外，本　研究中各组ＭＡＰ随注射时间均有升高趋势，但各　组间比较未见统计学差异。原因可能在于：①年龄　增长；②反复注射和测量各项指标使动物较长时间　处于应激状态。使血压升高可能需要更高浓度瘦素　或改变注射方式　。　在本研究中高浓度瘦素组由Ａｃｈ、ＢＫ引起的　舒张加强，由于Ａｃｈ主要通过ｅＮＯＳ产生ＮＯ引起　血管舒张，并且瘦素加强ＢＫ的舒张作用被Ｌ—　ＮＡＭＥ所抑制，从而证明瘦素增强内皮细胞依赖的　舒张功能与ＮＯ有关［１７１。尽管瘦素增加了血小板缩　血管物质ＴＸＢ　的表达［１８１，对舒血管物质ＰＧＩ２的稳　定形式６一Ｋｅｔｏ　ＰＧＦ　表达水平无影响，但综合效应　是增强血管的舒张功能。另外，高浓度瘦素组体重　变化与Ａｃｈ　Ｅｍａｘ呈正相关，说明瘦素增强血管的　舒张功能与体重减轻有关。　综上所述，本研究探讨较长时间注射瘦素后动　物血管张力改变及其影响因素。结果发现，瘦素能　增强由ＮＯ介导的内皮细胞依赖的舒张功能，与通　过ＣＯＸ一２产生ＰＧＩ，的途径无关。同时也证实注射　瘦素后，大鼠摄食量明显减少，体重减轻，体重下降　有助于改善内皮细胞舒张功能【１９１，这为减肥防治高　血压提供了客观依据。　４参考文献　［１］Ｍｕｎｚｂｅｒｇ　Ｈ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ＣＤ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｏｆ　ｌｅｐｔｉｎ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２０１４，４２：４８８—４９３．　［２］Ｖｅｃｃｈｉｏｎｅ　Ｃ，Ｍａｆｆｅｉ　Ａ，Ｃｏｌｅｌｌａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｅｎ—　ｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｉｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｔｈｒｏｕＩｇｈ　Ａｋｔ—ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１２，５　１：１６８—　１７３．　［３］Ｂｅｎｋｈｏｆｆ　Ｓ，Ｌｏｏｔ　ＡＥ，Ｐｉｅｒｓｏｎ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ　ｅｕ—　ｄｏｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓ—　ｓｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ＮＯ　ｓｙｎｔｈａｓｅ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ　Ｔｈｒｏｍｂ　Ｖａｓｃ　Ｂｉｎ１，　２０１２，３２：１６０５—１６１２．　［４］Ｓｈｅｋ　ＥＷ，Ｂｒａｎｄｓ　ＭＷ，Ｈａｌｌ　ＪＥ．Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｅｒｅａｓ—　ｅｓ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，１９９８，３１：４０９—４１４．　［５］Ｗｏｊｃｉｃｋａ　Ｇ，Ｊａｍｒｏｚ—Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋａ　Ａ，Ｗｉｄｏｍｓｋａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｋｉｎａｓｅｓ（ＥＲＫ）ｉｎ　ｌｅｐｔｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００８，８２：４０２—４１２．　［６］付阳．丙泊酚对糖尿病大鼠主动脉血管张力的影响．北京协和　医学院，２０１０．　［７］Ａｄｅａｇｂｏ　ＡＳ，Ｐａｔｅｌ　Ｄ，Ｉｄｄｒｉｓｓｕ　Ａ，ｅｔ　ａ１．ＮＳ一３９８，ａ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２　ｂｌｏｃｋｅｒ，ａｃｕｔｅｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ａｏｒｔａ：ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，　２０１３，４５８：１４５－１５４．　［８］Ｓｈｉｎ　ＨＪ，Ｏｈ　Ｊ，Ｋａｎｇ　ＳＭ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ　ｖｉａ　ｐ３８　ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎ　ｒａｔ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｇ—　ｃｌｅ　ｃｅｉｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，２００５，３２９：１　８—２４．　［９］Ｑｕｅｈｅｎｂｅｒｇｅｒ　Ｐ，Ｅｘｎｅｒ　Ｍ，Ｓｕｎｄｅｒ—Ｐｌａｓｓｍａｎｎ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ—ｌ　ｉｎ　ｅｎｄｎｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｃｉｒｃ　Ｒｅｓ，　２０１２．９０：７１１－７１８．　中国心血管病研究２０１５年８月第１３卷第８期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，Ａｕｇｕｓｔ　２０１５，Ｖｏ１．１３．Ｎｏ．８　・７５９・　［１０］ｄｅ　Ｈａｒｏ　ＭＣ，Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏ　ＶＮ，ｄｅ　Ｆａｒｉａ　ＡＰ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ—　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｌｅｐｔｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ａｒｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＩＬ一６，ｌｅｐｔｉｎ　ａｎｄ　ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｂｌｅｓ　ｏｆ　ｉｂｆｆｉｎｏｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ　ａｎｄ　ｏｂｅｓｅ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｈｏｒｍ　Ｍｅｔａｂ　Ｒｅｓ，２０１１，３４：６５９—６６３．　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｉｎ　ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｊ　Ｈｕｍ　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ，２０１３，２７：２２５－２３０．　［１６］Ｍａｎｕｅｌ—Ａｐｏｌｉｎａｒ　Ｌ，Ｌｏｐｅｚ—Ｒｏｍｅｒｏ　Ｒ，Ｚａｒａｔｅ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ＯｂＲｂ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ　２　ｏｎ　ｍｕｒｉｎｅ　ａｏｒｔａ　［１　１］Ｂｅｈｏｗｓｋｉ　Ｊ．Ｌｅｐｔｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｎａｌ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｈａｎｄｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｒｅｎａｌ　Ｎａ－Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ　ＡＴＰａｓｅｓ：Ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｒｉａｌ　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｕｒｒ　Ｃａｒｄｉｏｌ　Ｒｅｖ，　２０１０，６：３１—４０．　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，　２０１３，６：１９２—１９６．　［１２］Ｌｅｍｂｏ　Ｇ，Ｖｅｃｃｈｉｏｎｅ　Ｃ，Ｆｒａｔｔａ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｌｅｐｔｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｄｉｒｅｃｔ　ｖａｓｏｄｉｌａｔｉｏｎ　ｔｈｒｏｒ　ｇｈ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，　２０１０，４９：２９３—２９７．　［１７］刘国祥，步秀婷，章莉，等．冠心病患者瘦素含量与一氧化氮　水平的相关性研究．中国心血管病研究，２００６，４：１８８—１９０．　［１８］李娇．血清瘦素与相关疾病．中国心血管病研究，２０１２，１０：　８７６—８７８．　［１３］Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ　ＪＡ，Ｄｅ　ｌａ　Ｃｅｒｄａ　Ｐ，Ｃｏｌｌｙｅｒ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ　ｉｎ　ａｏｒｔｉｃ　ｖａｓｃｕｌａｒ　［１９］Ｚａｎｅｔｔｉ　Ｍ，Ｂａｒａｚｚｏｎｉ　Ｒ，Ｖａｄｏｒｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｌａｃｋ　ｏｆ　ｄｉｒｅｃｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｈｙｐｅｒｌｅｐｔｉｎｅｍｉａ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｌｅａｎ　ｒａｔ　ａｏｒｔａ：ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｃａｌｏｒｉｅ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，　２００４，１７５：２５３－２５９．　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ．Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｈｅａｒｔ　Ｃｉｒｃ　Ｐｈｙｓｉｏ１．　２００６，２９０：Ｈ３０一Ｈ３６．　［１４］郭守利，李倩，张一飞，等．花生四烯酸及其３种代谢产物对　兔肺动脉环作用的比较．中国药理学通报，２００６，２２：６７９—６８２．　［１５］Ｓｋｕｒｋ　Ｔ，ｖａｎ　Ｈａｒｍｅｌｅｎ　Ｖ，Ｌｅｅ　ＹＭ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　（收稿日期：２０１５—０５—０７）　缬沙坦对心力衰竭家兔心肌细胞核及肌浆网　钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｖａｌｓａｒｔａｎ　ｏｎ　Ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ一Ⅱｉｎ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ａｎｄ　ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉｃ　ｒｅｔｉｅｕｌｕｍ　ｉｎ　ｈｅａｒｔ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｒａｂｂｉｔ　曲辅政张晓录孙经武王秀花　曲爱燕路新磊周红霞程林康浩飞　衣晓蕊王青海刘静史孟松魏静张明哲　作者单位：２６４１００山东省烟台市，滨州医学院烟台附属医院心内科（曲辅政、孙经武、王秀花、曲爱燕、路新磊、　周红霞、程林、康浩飞、衣晓蕊、王青海、刘静、史孟松、魏静、张明哲）；烟台毓璜顶医院检验科（张晓录）　通讯作者：张晓录，Ｅ－ｍａｉｌ１：ｚｈａｎｇｘｉａｏｌｕ７８２１＠１２６．ｅｏｍ　【摘要】　目的探讨家兔慢性心力衰竭（心衰）时心肌细胞核及肌浆网钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ　（ＣａＭＫＩＩ）蛋白表达和活性的改变，以及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法术后７周观察左心室结构、血流动力学的变化及ＣａＭＫＩＩ的表达和活性的改变。结果２４只家兔　随机分为３组，假手术组、心衰组和缬沙坦组，各８只。通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型，于　与假手术组比较，心　衰组左心室重量指数（ＬＶＭＩ）［（３．６１±Ｏ．０９）ｇ／ｋｇ比（１．３２＋０．０６）ｇ／ｋｇ，Ｐ＜Ｏ．０５］、左心室舒张末压（ＬＶＥＤＰ）　［（２３．００￣２．３７）ｍｍ　Ｈｇ比（一１．５０＋０．５０）ＢＩＴＩ　Ｈｇ，Ｐ＜０．０５］显著升高，左心室缩短率（ＬＶＦＳ）［（１７．３８＋３．１３）％比　（３７．８３＋３．５８）％，Ｐ＜Ｏ．０５］及左室射血分数（ＬＶＥＦ）［（３８．５０￣６．０７）％比（７１．９２＋４．５６）％，Ｐ＜Ｏ．０５］明显降低。与心　衰组比较，缬沙坦组ＬＶＭ！［（２．０７￣０．１４）ｇ／ｋｇ比（３．６１￣０．０９）ｇ／ｋｇ，Ｐ＜０．０５］和ＬＶＥＤＰ［（２．１７￣０．７２　ｍｍ　Ｈｇ比　（２３．００￣２．３７　ｍｍ　Ｈｇ，Ｐ＜Ｏ．０５］显著降低，ＬＶＦＳ［（３３．８３￣２．８５）％比（１７．３８￣３．１３）％，Ｐ＜０．０５］和ＬＶＥＦ［（６４．４５￣　３．６６）％比（３８．５０￣６．０７）％，Ｐ＜０．０５］明显升高。心衰组细胞核及肌浆网ＣａＭＫ１Ｉ蛋白表达（１．４２￣０．１１比０．８６￣　０．０４，１．３９＋０．１４比０．８０￣０．０６，Ｐ＜Ｏ．０５）及活性（３．４３￣０．１５比２．１４￣０．１３，３．３８￣０．１１比２．０９￣０．１１，Ｐ＜０．０５）显著高